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《siRNA沉默多藥耐藥相關(guān)蛋白3基因?qū)Ω伟┘?xì)胞耐藥性的影響-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、中華肝臟外科手術(shù)學(xué)電子雜志2014年6月第3卷第3期ChinJHepatSurg(ElectronicEdition)，June2014，v01．3，No．3·39基礎(chǔ)研究·siRNA沉默多藥耐藥相關(guān)蛋白3基因?qū)Ω伟┘?xì)胞耐藥性的影響蘇正劉波劉建平張華耀呂澤堅(jiān)程子亮【摘要】目的研究小干擾核糖核酸(siRNA)沉默多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)3基因(MRP3一siRNA)對原發(fā)性肝癌(肝癌)細(xì)胞耐藥性的影響。方法應(yīng)用不同梯度濃度的多柔比星(ADM)制備肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2／ADM，用攜帶MRP3．siRNA的lipofectamine2000
2、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HepG2／ADM細(xì)胞。分為HepG2細(xì)胞組(對照組)、HepG2／ADM細(xì)胞組(耐藥組)和轉(zhuǎn)染MRP3一siRNA的HepG2／ADM細(xì)胞組(干擾組)。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測3組細(xì)胞MRP3基因信使核糖核酸(mRNA)含量，用蛋白質(zhì)印跡法檢測MRP3蛋白表達(dá)，噻唑藍(lán)法檢測肝癌細(xì)胞對ADM、氟尿嘧啶(5-FU)、長春新堿、奧沙利鉑的半數(shù)抑制濃度(IC)，并計(jì)算耐藥指數(shù)(RI)。3組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD—t或t檢驗(yàn)。結(jié)果耐藥組的MRP3mRNA平均含量(5．16m0-31)較對照組(3．08士
3、0．27)和干擾組(2．85-4-0．23)明顯升高(LSD—t=8．765，10．363；尸<0．05)。耐藥組的MRP3蛋白含量(21063~274)較對照組(14476~217)和干擾組(6660~153)明顯升高(LSD—t=-21．836，79．578；0．05o耐藥組對ADM、5-FU、長春新堿、奧沙利鉑的R1分別為14．40~0．31、26．68~0．22、28．70~0．49、20．23~0．54，干擾組相應(yīng)為3．55~0．16、9．60~0．27、2．11-4-0．17、3．15~0．13，干擾組的RI明顯低于耐藥組(t=
4、53．873，84．933，88．811，53．258；P<0．05o結(jié)論siRNA沉默肝癌細(xì)胞MRP3基因可提高肝癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性，逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞對化療藥物的耐藥性。【關(guān)鍵詞】肝腫瘤，實(shí)驗(yàn)性；RNA干擾；多藥耐藥相關(guān)蛋白質(zhì)類Impactofmultldrugresistance-relatedprotein3genesilencedbysiRNAonthedrugresistanceoflivercancercellsSuZheng*,LiuBo，LiuJianping,ZhangHuayao，LyuZejian，ChengZili
5、ang．"DepartmentofHepatobiliarySurgery,SunYat-senMemorialHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510120，ChinaCorrespondingauthorLiuJianping,Email：liuzhunlong@126．com【Abstract】ObjectiveToobservetheimpactofmultidrugresistance—relatedprotein(MRP)3genesilencedbysmallinterfering
6、RNA(siRNA)(MRP3一siRNA)onthedrugresistanceofprimarylivercancercells．MethodsThedrugresistancecelllinesHepG2／Adriamycin(ADM)weredevelopedbyexposingparentalcellstostepwiseincreasingconcentrationsofADMandthenMRP3一siRNAsweretransfectedinHepG2／ADMcellswithlipofectamine2000liposom
7、es．Threegroupswereassigned：HepG2cellgroup(controlgroup)，HepG2／ADMcellgroup(resistancegroup)andMRP3一siRNAtransfectedHepG2／ADMcellgroup(interferencegroup)．TheMRP3mRNAcontentsof3groupsweremeasuredbyreal—timefluorescentquantitativepolymeraseDOI：10．3877／cma．j．issn．2095—3232．201
8、4．03．O11基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011B031800296)作者單位：510120廣州，中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院肝膽外科(蘇正、劉建平、張華耀)，胃腸外科(呂澤堅(jiān))
