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《昆蟲病原細(xì)菌Cip蛋白多克隆抗體的制備.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，42(8)：62—66JournalofHenanAgriculturalSciences昆蟲病原細(xì)菌Cip蛋白多克隆抗體的制備游娟，黃建林。，曹莉。，韓日疇。(1．廣東藥學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系，廣東廣州510006；2．廣州計(jì)量檢測技術(shù)研究院，廣東廣州510030；3．廣東省昆蟲研究所，廣東廣州510260)摘要：昆蟲病原發(fā)光桿菌屬(Photorhabdus)細(xì)菌產(chǎn)生2種胞內(nèi)晶體蛋白CipA和CipB，為其共生線蟲的生長發(fā)育提供營養(yǎng)?；贑ip蛋白已在大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)中得到穩(wěn)定且高水平表達(dá)，以純化的重組Cip蛋白為抗原，免疫新西蘭大耳兔制備多克隆抗
2、體，ELISA測定2種蛋白抗血清效價(jià)，均可達(dá)到1：6400。Westernblot分析顯示，制備的抗體均可特異識別發(fā)光桿茵的胞內(nèi)晶體蛋白。Cip蛋白多克隆抗體的制備為建立該類蛋白的免疫學(xué)檢測方法奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：昆蟲病原細(xì)茵；發(fā)光桿菌屬；胞內(nèi)晶體蛋白；多克隆抗體；制備中圖分類號：$476．1l文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1004—3268(2013)08—0062一O5PreparationofPolyclonalAntibodyagainstCrystallineInclusionProteinofEntomopathogenicBacteriumY0UJuan，HUANGJian
3、-lin，CAOLi。，HANRi—chou。(1．DepartmentofBiochemistry&MolecularBiology，GuangdongPharmaceuticalUniversity。Guangzhou510006，China2．GuangzhouInstituteofMetrology&TestingTechnology，Guangzhou510030，China；3．GuangdongEntomologicalInstitute，Guangzhou510260，China)Abstract：EntomopathogenicPhotorhabdusbacter
4、iaproducetwotypesofintracellularcrystallineinclusionproteins，CipAandCipB，asthenutrientresourceforthesymbioticnematode．Basedonconstructedhigh—levelprokaryoticexpressionsystem，recombinantCipproteinswerepurifiedwithawarmextractmethodandusedastheantigenstoimmuneNewZealandrabbits，respectively．Thepo
5、lyclonalantibodieswiththetitersof1：6400wereraisedandmonitoredbyindirectan—zyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)．WesternblotassayconfirmedthattheantibodiescouldspecificallyrecognizetheinclusionproteinsinPhotorhabdusbacteria．PreparationofCippolyclonalantibodieswillbehelpfultOdeveloptheimmunologic
6、alassaymethodoftheseproteins．Keywords：entomopathogenicbacterium；Photorhabdus；crystallineinclusionprotein；polyclonalantibody；preparation昆蟲病原線蟲是一類在世界范圍被廣泛認(rèn)可的晶體蛋白[4-s]。該類蛋白富含疏水氨基酸，且其氨基高效安全的生物農(nóng)藥[1]。昆蟲病原發(fā)光桿菌屬酸含量和組成與共生線蟲的營養(yǎng)需求一致。在富含(Photorhabdus)細(xì)菌定殖于異小桿線蟲屬(Hete-Cip蛋白的環(huán)境中，線蟲的死亡率較低，大多能完成rorhabditis)線蟲
7、腸道，與線蟲互惠共生。細(xì)菌產(chǎn)生世代發(fā)育并得到具有高侵染力的感染期線蟲(infec—豐富的代謝產(chǎn)物，實(shí)現(xiàn)對昆蟲的毒性，并為線蟲的生tivejuvenile，IJ)[g-73，而感染期線蟲的得率是衡量這長繁殖提供營養(yǎng)[3]。Cip蛋白(crystallineinclusion種生物農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量的指標(biāo)之一。因此，對Cip蛋proteins)，包括CipA和CipB，分子量分別為11．6白的研究，有助于闡明“線蟲一細(xì)菌”的共生機(jī)制，并kD、11．3kD，是P^0￡Dr口6ds
