酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測HIV抗體影響因素探討.pdf

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1、·技術(shù)與方法·2012年1月第50卷第2期酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測HIV抗體影響因素探討畢秀欣(遼寧省丹東國際旅行衛(wèi)生保健中心，遼寧丹東118000)【摘要】通過對酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測HIV抗體的檢測前、檢測中和檢測后各相關(guān)影響因素的分析，探討各因素對結(jié)果的影響，以便尋找解決的方法和加強(qiáng)質(zhì)控管理，從而保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精確性?！娟P(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)；HIV抗體；影響因素【中圖分類號(hào)】R446．61【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1673—9701(2012)02—0076—02Theimpactfactorsofenzyme-linkedimmunosorbentassayindet

2、ectionofHIVantibodiesBIXiuxinInternationalTravelHealthCareCenterofDandonginLiaoningProvince，Dandong118000，China【Abstract】Byanalysisofallrelevantfactorsinpre—test，duringtestandpost—testofenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)indetectionofHIVantibodies，toexplorethevariousimpactfactorsontheresults

3、，inordertofindasolutionandstrengthenthequalitycontrolmanagement，toensureaccuracyandprecisionofthetestresults．【Keywords】ELISA；HIVantibody；Impactfactors酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)因其操作簡單、靈敏度高、特異性好、極易失活；底物容易被氧化，產(chǎn)生顏色。因此，必須加強(qiáng)試劑價(jià)格低廉等特點(diǎn)成為HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)的常用方法。優(yōu)質(zhì)的儲(chǔ)存管理，防止試劑失活和氧化。的試劑、良好的儀器、正確的操作和高素質(zhì)的技術(shù)人員是保1．2標(biāo)本證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。由于ELI

4、SA法檢測結(jié)果受血清是最常用的標(biāo)本。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)中標(biāo)本的質(zhì)量很多因素影響，其中任何一項(xiàng)因素都可造成HIV抗體結(jié)果也是影響結(jié)果的關(guān)鍵因素之一，標(biāo)本的干擾物質(zhì)容易引起假假陰性和假陽性結(jié)果的發(fā)生。因此必須加強(qiáng)HIV抗體初篩陽性或假陰性的結(jié)果。干擾分為外源性和內(nèi)源性。外源性干實(shí)驗(yàn)室的全面質(zhì)量控制，保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。筆者從事擾：細(xì)菌污染、溶血、凝固不全、反復(fù)凍融和標(biāo)本相互污染等：多年的HIV抗體檢測_【作，現(xiàn)將影響因素分析如下。標(biāo)本放置4℃冰箱冷藏一般不超過5d．如果保存過久，其中的蛋白質(zhì)可能發(fā)生聚合，可使本底加深：凍結(jié)的標(biāo)本要融化1檢測前后充分混勻，為防止蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)

5、充分輕輕i．1試劑混勻，避免產(chǎn)生氣泡：渾濁或有沉淀的樣本應(yīng)先離心澄清后1．1．1試劑的選擇優(yōu)質(zhì)的HIV抗體試劑是結(jié)果質(zhì)量的基再檢測；防止反復(fù)凍融，引起效價(jià)降低。內(nèi)源性干擾：一般包礎(chǔ)試劑要從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性性和經(jīng)濟(jì)性做出全面的評價(jià)并選擇好的試劑，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室抗體及某些自身抗體等，避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇要求選擇靈敏度高(精密度高，CV值<15％)、特異性好的試合適的試劑。①標(biāo)本溶血時(shí)釋放大量具有過氧化物酶活性的劑試劑的選擇很關(guān)鍵，通過廠家了解試劑包被物的組成，物質(zhì)，增加了非特異顯色，干擾測定結(jié)果：②標(biāo)

6、本被細(xì)菌污如原料來源(基因組成或合成多肽)、片段組成(按比例組成染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)；③血或化合組成)、片段長短等來判斷抗原、抗體包被的完整性清標(biāo)本應(yīng)充分離心，否則可因凝固不全、纖維蛋白原非特異和特異性。根據(jù)試劑批號(hào)檢定報(bào)告了解其質(zhì)量水平和試劑吸附于微孔內(nèi)而造成假陽性結(jié)果。的優(yōu)劣，還可以室問質(zhì)評報(bào)告中對試劑的評價(jià)結(jié)果來客觀1．3儀器評價(jià)、選擇適合實(shí)驗(yàn)室的試劑。要選擇和訂購長效批號(hào)的試酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)中會(huì)用到移液器、水浴箱或恒溫箱、劑．避免試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)量控制體系?。洗板機(jī)、酶標(biāo)儀等。移液器是一種比較精密的工具，要求比較1．1．2試劑的儲(chǔ)存試劑應(yīng)

7、儲(chǔ)存在2～8℃冰箱中，力求溫度恒高，必須定期對加樣器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)[31。每次加樣需更換吸定．并防止陽光照射。試劑盒中有3個(gè)主要的試劑，即免疫吸嘴，以免交叉污染。水浴箱溫度要準(zhǔn)確恒定；洗板機(jī)要定期維附劑、酶結(jié)合物和底物。酶結(jié)合物具有生物活性，保存不當(dāng)，護(hù)，檢測殘液量。76中國現(xiàn)代醫(yī)生CHINAMODERNDOCTOR2012年1月第5O卷第2期·技術(shù)與方法·2檢測中時(shí)間要力求準(zhǔn)確充分．并在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)比色。防止時(shí)間過2．1加樣長會(huì)褪色。比色時(shí)應(yīng)盡量選用雙波