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《應(yīng)用PCR檢測豬偽狂犬病毒野毒的研究.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，JournalofAnhuiAgn．Sci．2014，42(9)：2548—2549，2553責(zé)任編輯石金友責(zé)任校對李巖應(yīng)用PCR檢測豬偽狂犬病毒野毒的研究5長婕，李增奎(1．青海省大通縣東峽鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，青海大通81o1o4；2．青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，青海西寧81ooo3)摘要[目的]對豬偽狂犬病毒野毒進(jìn)行檢測。[方法]根據(jù)已發(fā)表的豬偽狂犬痛病毒gE基因核苷酸序列，設(shè)計(jì)合成1對引物，擴(kuò)增片段長度為276bp，優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，建立檢測PRV野毒的PCR方法。[結(jié)果]利用建立的PCR方法檢測疑似PRV野毒感染的臨床送檢組織病料34份，陽性樣品18份，陽性
2、率達(dá)52．94％(18／34)，選取6份陽性病料PCR產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行序列鑒定，測序結(jié)果表明均為PR~gE基因特異性序列。[結(jié)論]該方法敏感、特異、可靠，可用于PRV野毒感染的快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查。關(guān)鍵詞豬偽狂犬病毒；gE基因；PCR；檢測中圖分類號S852．651文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517—6611(2014)09—02548—02ApplicationofPCRforDetectionofPorcinePseudorabieswildStrainVirusZHANGJieetal(DongxiaTownAnimalHusbandryan
3、dVeterinaryStationofDatongCounty，QinghaiProvince，Datong，Qinghai810199)Abstract[Objective]Todetectporcinepseudorabiesvirus．[Method]BasedonpublishedpseudorabiesvirusgEgenesequence，designedandsynthesizedonepairsofprimers，amplifiedfragmentlengthwas276bp，afteroptimizationofPCRreactionconditio
4、ns，establishedaPCRmethodfordetectionofPRVwildstrainvirus．『ResultlBvusingPCRmethod，34suspectedPRVwildstrainvirusweredetected，positivesamples18，pos—itiverateupto52．94％(18／34)，6positivesamplesofPCRproductswereidentifiedbyShenggongBiologyEngineering(Shanghai)Co．Ltd．，thesequencingresultsindic
5、atedtheyareallPRVgEgenespecificitysequence．[Conclusion]Themethodissensitive，specificandreliable，whichcanbeusedforrapiddiagnosisandepidemiologiealinvestigationofPRVwildvirusinfection．KeywordsPorcinepseudorabiesvirus：gene：PCR；Detection豬偽狂犬病(pseudorabies，PR)是由豬偽狂犬病毒(pseu—和豬傳染性胃腸炎病毒(PEDV)一豬流
6、行性腹瀉病毒(TGEV)dorabiesvirus，PRV)引起的豬的一種急性、熱性、敗血性傳染二聯(lián)活疫苗，均購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司；豬繁殖病-2]。PRV屬皰疹病毒科(Herpesvifidao)a一皰疹病毒亞科與呼吸綜合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗(CH一1R株)和豬瘟(Alpha—herpesvirinae)，具有皰疹病毒的典型特征，可引起豬病毒(CSFV)活疫苗(細(xì)胞源)，均購自普萊柯生物工程股份的潛伏感染。PRV的潛伏感染并不使感染豬表現(xiàn)臨床有限公司產(chǎn)品；疑似PRV野毒感染豬組織病料，由青海省畜癥狀，但可使感染豬終身帶毒并排毒，增加了PR預(yù)防控制的牧獸
7、醫(yī)科學(xué)院第一實(shí)驗(yàn)室收集并保存。難度，故對PRV潛伏感染豬的篩查至關(guān)重要。目前，世界1．1．3主要試劑。蛋白酶K、Taq酶和dNTP，均購自TaKa—各國廣泛應(yīng)用PRVgE基因缺失疫苗進(jìn)行PR的防控，且歐Ra公司；SDS、苯酚、氯仿和無水乙醇，均為國產(chǎn)分析純，美等發(fā)達(dá)國家應(yīng)用PRVgE基因缺失弱毒疫苗與其配套的鑒市售。別診斷方法已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了PRV的凈化j。我國自20世紀(jì)701．2方法年代中期以來，廣泛使用基因缺失弱毒疫苗，其對PR的1．2．1引物設(shè)計(jì)與合成。參照GenBank上的PRVgE基因防控起到了重要的作用，但同時(shí)也給PRV野毒感染和疫
