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《泥蚶（Tegillarca granosa）血紅蛋白基因（Tg-HbIIA）克隆、分析及免疫表達(dá)研究.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第43卷第1期海洋與湖沼Vo1．43．NO．12012年1月0CEAN0L0GIAETLIMNOLOGIASINICAJan．，2012泥蚶(Tegillarcagranosa)llll白基l~(Tg．HblIA)克隆、分析及免疫表達(dá)研究術(shù)汪青，2林志華①包永波①霍禮輝，顧海龍，2(1．浙江萬里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院寧波315100；2．上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院上海201306；3．寧波大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院寧波3152111提要通過已構(gòu)建的泥蚶血液eDNA文庫，克隆得到泥蚶Tg．HblIA基因全長cDNA序列，對其進(jìn)行生物信息學(xué)、組織表達(dá)及免疫相關(guān)分析。結(jié)果表明，泥蚶T
2、g—HblIAeDNA全長73lbp，包含63bp5，非編碼區(qū)(5'-UTR)，246bp3非編碼區(qū)(3'-UTR)，開放閱讀框450bp，編碼150個氨基酸；其氨基酸序列與毛蚶(Scapharcakagoshimensis)和不等殼毛蚶(Scapharcainaequivalvis)的序列有較高的同源性，分別達(dá)到89％和88％；對其結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示該蛋白具有血紅蛋白功能域，含有10個潛在血紅素結(jié)合位點(diǎn)。qRT-PCR檢測結(jié)果顯示：泥蚶不同組織部位中，Tg．HblIAmRNA在血液表達(dá)量最大，其次為外套膜和鰓，表達(dá)量最低的是肝胰臟；在副溶血弧菌(Vibrioparahaemol
3、yticu)、脂多糖、肽聚糖刺激后，泥蚶血液Tg-HblIAmRNA表達(dá)量顯著上調(diào)，表明Tg．HblIA在貝類抗菌免疫防御中可能起重要作用，而Tg—HblIA對不同致病因子免疫反應(yīng)的靈敏度和表達(dá)時序存在一定差異。關(guān)鍵詞泥蚶，血紅蛋白，菌刺激，mRNA表達(dá)免疫反應(yīng)中圖分類號Q789泥蚶(Tegillarcagranosa)俗稱血蚶、花蚶、粒蚶polyphemus)、龍蝦(Pacifastacusleniusculus)、章魚等，隸屬于瓣鰓綱，是我國傳統(tǒng)養(yǎng)殖貝類之一(孫長(Octopusvulgaris)和紅皺巖螺(Rapanavenosa)等無脊森等，2010)，廣泛分布于山
4、東、浙江、福建、廣東等椎動物的血細(xì)胞中，血藍(lán)蛋白也具有酚氧化酶或類地，浙江是國內(nèi)泥蚶養(yǎng)殖面積和產(chǎn)量最大的省份。近酚氧化酶活性，可以殺滅細(xì)菌(Asp／metal，1991；Sal—年來養(yǎng)殖泥蚶病害死亡頻發(fā)，因此，開展泥蚶免疫發(fā)vatoetal，1998；Deckeretal，2001；Dolashkietal，生機(jī)制和調(diào)控機(jī)理的研究對發(fā)展泥蚶健康養(yǎng)殖具有2011)。本研究以泥蚶為對象，對泥蚶血紅蛋白重要意義。孫虎山等(2001)和劉世良等(2003)認(rèn)為貝Tg—HblIA基因進(jìn)行克隆與分析，并進(jìn)行組織表達(dá)和類血細(xì)胞與脊椎動物血液內(nèi)的免疫細(xì)胞相似，承擔(dān)免疫相關(guān)分析，為探索貝類血
5、紅蛋白進(jìn)化和抗菌免部分免疫功能。Jiang等(2007)研究發(fā)現(xiàn)人血紅蛋白具疫機(jī)制等提供參考。有潛在類酚氧化酶活性，能有效殺滅金黃色葡萄球1材料與方法菌(Staphylococcusaureus)和銅綠假單胞菌(Pseudo—monasaeruginosa)等細(xì)菌；Nedjar—Arroume等(2008)1．1泥蚶Tg—HblIAcDNA全長克隆及核酸與氨基酸發(fā)現(xiàn)牛血紅蛋白水解片段對藤黃微球菌A270(Mi．序列分析CFOCOCCUSluteusA270)等具有抑制作用，說明哺乳動通過EST序列分析，發(fā)現(xiàn)一個477bp的EST序物血紅蛋白具有一定的抗菌免疫作用。鱟(Lim
6、ulus列與毛蚶(Scapharcakagoshimensis)fill紅蛋白HblIA國家自然科學(xué)基金項目，31001097號；浙江省自然科學(xué)基金項目，Y3100087號；國家貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項目，CARS一48號。汪青，E—mail：yiyibajiul189@126．corn①通訊作者：林志華，E-mail：zhihua9988@126．corn；包永波，E—mail：bobbao2001@gmail．corn收稿日期：2010—09—21，收修改稿日期：2O11—01．041期汪青等：泥蚶(f，口口D口)血紅蛋白基因(Tg—HbIIA)克隆、分析及免疫表達(dá)研究89序
7、列高度相似(89％)，以此EST序列設(shè)計特異引物為0．2mg／m1)，另取50個泥蚶注射滅菌海水作為對照Tg—HblIA—F，R克隆Tg—HbIIA基因。見表1。用Tg—組。在注射后Oh、1．5h、3h、6h、12h、24h、48h每HblIA．R和通用載體引物T3進(jìn)行5'RACE反應(yīng)，94℃組分別抽取四個健康樣本血液，并離心1000g10min40s56℃40s，72℃1rain，72℃延伸10min；用Tg—收集血細(xì)胞。另取弧菌注射12h后的四個樣本的6種HblIA．F和通用載體引物T7進(jìn)行3'RACE反應(yīng)，程
