泥蚶血紅蛋白克隆、表達(dá)與免疫相關(guān)性研究

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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：M090101062上上海海海海洋洋大大學(xué)學(xué)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文泥蚶血紅蛋白克隆、表達(dá)與免疫題目：相關(guān)性研究Molecularcloning,expressionandimmune-relatedresearchonthe英文題目：hemoglobinfrombloodclamTegillarcagranosa專(zhuān)業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖研究方向：功能基因組學(xué)姓名：汪青指導(dǎo)教師：林志華二0一二年五月二十三日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人

2、在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫(xiě)，我對(duì)所寫(xiě)的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)

3、制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文泥蚶血紅蛋白克隆、表達(dá)與免疫相關(guān)性研究摘要泥蚶(Tegillarcagranosa)俗稱(chēng)血蚶、花蚶、粒蚶等，隸屬于瓣鰓綱列齒目，蚶科，蚶屬。是我國(guó)傳統(tǒng)養(yǎng)殖貝類(lèi)之一廣泛分布于山東、浙江、福建、廣東等地，浙江是國(guó)內(nèi)泥蚶養(yǎng)殖面積和產(chǎn)量最大的省份。然而近年來(lái)養(yǎng)殖泥蚶病害死亡頻發(fā)，深入開(kāi)展泥蚶功能基因的研究，尤其是免疫相關(guān)基因及其機(jī)制研究并在此基礎(chǔ)上尋找泥蚶疾病防治的有效方法

4、對(duì)泥蚶的健康養(yǎng)殖十分重要。對(duì)于貝類(lèi)免疫系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，其血細(xì)胞在先天性免疫防御中起著重要的作用。周永燦和潘金培認(rèn)為在貝類(lèi)中參與免疫的主效因子是血細(xì)胞，由于貝類(lèi)不具有特異性免疫，只有細(xì)胞和體液的非特異性免疫系統(tǒng)，因此，血細(xì)胞對(duì)貝類(lèi)免疫來(lái)說(shuō)至關(guān)重要，它是貝類(lèi)體內(nèi)抵御外來(lái)病原生物侵襲的主要“屏障”。劉世良等發(fā)現(xiàn)貝類(lèi)血細(xì)胞的功能與維持體內(nèi)各種生理環(huán)境的穩(wěn)定性有密切關(guān)系，血細(xì)胞除具有營(yíng)養(yǎng)、防御的功能，主要通過(guò)參與包埋，吞噬，結(jié)節(jié)形成，細(xì)胞凝塊和傷口修復(fù)等過(guò)程起到免疫防御作用。這表明泥蚶、毛蚶等蚶科動(dòng)物血紅細(xì)胞與脊椎動(dòng)物血液內(nèi)的免疫細(xì)胞具有相

5、似的功能，承擔(dān)了部分免疫功能。在分子水平方面，Jiang等研究發(fā)現(xiàn)人血紅蛋白具有潛在類(lèi)酚氧化酶活性，能有效殺滅金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)等細(xì)菌；Nedjar-Arroume等發(fā)現(xiàn)牛血紅蛋白水解片段對(duì)藤黃微球菌A270(MicrococcusluteusA270)等具有抑制作用，說(shuō)明哺乳動(dòng)物血紅蛋白具有一定的抗菌免疫作用。鱟(Limuluspolyphemus)、龍蝦(Pacifastacusleniusculus)、章魚(yú)(Octopu

6、svulgaris)和紅皺巖螺(Rapanavenosa)等無(wú)脊椎動(dòng)物的血細(xì)胞中，血藍(lán)蛋白也具有酚氧化酶或類(lèi)酚氧化酶活性，可以殺滅細(xì)菌。因此研究泥蚶血紅蛋白對(duì)于泥蚶免疫防御機(jī)制的研究有重要的意義。首先，采用Hemacolor染料對(duì)泥蚶等5種水產(chǎn)動(dòng)物血細(xì)胞涂片進(jìn)行染色，利用光鏡和掃描電鏡兩種方法對(duì)5種動(dòng)物的血紅細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)和形態(tài)特征進(jìn)行觀察，以期對(duì)血紅細(xì)胞形態(tài)差異及進(jìn)化規(guī)律進(jìn)行探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：泥蚶、毛蚶兩種蚶科貝類(lèi)血紅細(xì)胞具有嗜酸性或嗜堿性顆粒，而鯽魚(yú)、牛蛙、中華鱉3種水產(chǎn)脊椎動(dòng)物則沒(méi)有；從蚶科貝類(lèi)到牛蛙，血紅細(xì)胞直徑不斷增

7、大，而中華鱉血紅細(xì)胞I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文直徑則變??；血紅細(xì)胞長(zhǎng)寬比也符合這一變化趨勢(shì)。泥蚶和毛蚶血紅細(xì)胞表面有明顯的波狀褶皺和較深的且直徑較大的凹陷；3種脊椎動(dòng)物血紅細(xì)胞表面也發(fā)現(xiàn)了直徑較小的凹陷，但未發(fā)現(xiàn)皺褶的存在，且表面凹陷程度逐漸減弱。分析認(rèn)為動(dòng)物不斷進(jìn)化，其活動(dòng)能力和生境也在變化，使得動(dòng)物血紅細(xì)胞發(fā)生相應(yīng)的變化，以獲得最大的氣體交換效率與細(xì)胞穩(wěn)定性。其次，本文通過(guò)RACE方法獲得了泥蚶血紅蛋白家族三種基因的cDNA全長(zhǎng)并對(duì)其進(jìn)行了序列的生物信息學(xué)分析，泥蚶血紅蛋白Tg-HBI全長(zhǎng)cDNA為748個(gè)堿基，其中開(kāi)放

8、閱讀框?yàn)?41個(gè)堿基，編碼147個(gè)氨基酸，泥蚶與貝類(lèi)動(dòng)物毛蚶、不等殼毛蚶HbI氨基酸序列同源性顯著，一致度都為82%，但與其他動(dòng)物一致度較低。Tg-HBIIA全長(zhǎng)cDNA為731個(gè)堿基，其中開(kāi)放閱讀框?yàn)?50個(gè)堿基，編碼150個(gè)氨基酸，序列比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tg-HBIIA的氨基酸序列與與毛蚶、