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《基于組效關(guān)系的姜黃揮發(fā)油抗腫瘤活性成分辨識研究.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第40卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究報(bào)告第10期2012年1O月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1488～1493基于組效關(guān)系的姜黃揮發(fā)油抗腫瘤活性成分辨識研究蔣建蘭丁洪濤蘇鑫元英進(jìn)(天津大學(xué)化工學(xué)院制藥工程系，系統(tǒng)生物工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市生物與制藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300072)摘要基于GC-MS分析，建立了姜黃揮發(fā)油的化學(xué)成分與其抑制人宮頸癌Hela細(xì)胞作用的組效關(guān)系模型，尋找與藥效顯著相關(guān)的活性成分。采用水蒸汽蒸餾法提取得到31批姜黃揮
2、發(fā)油，提取率在1．63％～4．52％之間；采用GC-MS聯(lián)用儀建立了3l批姜黃揮發(fā)油的指紋圖譜，確定了20個(gè)特征峰，以特征峰的相對峰面積(各峰面積與內(nèi)標(biāo)正十三烷的峰面積之比)來表征其相對含量；MTT法測定姜黃揮發(fā)油抑制人宮頸癌Hela細(xì)胞活性，以抑制率為評價(jià)指標(biāo)；利用Simca-pl1．5軟件的正交投影偏最小二乘法(OrthogonalPartialleastsquares，OPLS)和SPSS軟件的雙變量相關(guān)(bivariate)分析，研究特征峰與藥效的相關(guān)性，根據(jù)s一載荷圖、變異權(quán)重參數(shù)值(Va
3、riableimportanceinprojection，VIP)和皮爾遜(Pearson)相關(guān)系數(shù)來辨識顯著活性成分。結(jié)果表明，11，15，7，19，3，6，12，14，9號等9個(gè)特征峰與姜黃揮發(fā)油抑制Hela細(xì)胞活性顯著相關(guān)，除l9號峰尚未定性外，11，15，7，3，6，12，14和9號峰對應(yīng)的成分分別為芳姜黃酮、姜黃酮、姜烯、p欖香烯、姜黃烯、姜黃酮、吉馬酮和倍半水芹烯。關(guān)鍵詞姜黃；揮發(fā)油；氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用；正交投影偏最小二乘法；組效關(guān)系1引言姜黃為姜科姜黃屬植物姜黃(CurCumalong
4、aL．)的干燥根莖，具有破血行氣、通經(jīng)止痛作用[1】。姜黃中富含揮發(fā)油，有研究表明，姜黃揮發(fā)油具有抗腫瘤活性，可以有效抑制肺癌細(xì)胞A549、人急性早幼粒白細(xì)胞HL一60和肝癌細(xì)胞HepG2t3j的增殖。姜黃揮發(fā)油成分復(fù)雜，文獻(xiàn)已報(bào)道了120余種成分[4]，主要為單萜和倍半萜類化合物。對姜黃揮發(fā)油的抗腫瘤活性起主要作用的成分目前尚不清楚。且姜黃揮發(fā)油的質(zhì)量評價(jià)多采用GC—MS化學(xué)指紋圖譜法，通過特征峰的相對含量等信息來評價(jià)藥材的質(zhì)量差異。但在這些特征峰中，有些成分對姜黃揮發(fā)油的抗腫瘤活性可能不起作用或
5、作用甚微，若將這些成分也作為姜黃揮發(fā)油的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)，可能造成信息冗余。中藥組效關(guān)系研究(Composition-activityre—lationship，CAR)，即研究中藥的化學(xué)組成與其藥效之間的關(guān)系，可用于更加科學(xué)地評價(jià)中藥質(zhì)量，還可實(shí)現(xiàn)藥效的預(yù)測、活性組分的辨識，近年來已引起中藥研究者的關(guān)注。目前尚未見有姜黃組效關(guān)系的研究報(bào)道。本研究在建立姜黃揮發(fā)油GC—MS指紋圖譜基礎(chǔ)上，采用基于正交投影的偏最小二乘法(Orthogonalpartialleastsquares，OPLS)卜和多元統(tǒng)計(jì)分
6、析中的雙變量相關(guān)(Bivariate)分析，探討姜黃揮發(fā)油的化學(xué)成分與抗腫瘤活性的相關(guān)性，尋找對抑制人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖起顯著作用的活性成分，可用于揭示姜黃揮發(fā)油的抗腫瘤藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并指導(dǎo)姜黃揮發(fā)油的指紋圖譜質(zhì)量評價(jià)研究及抗腫瘤活性成分篩選研究。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器、試劑和藥材Agilent6890／5975氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀，Agilent7683B系列自動進(jìn)樣器，NAPCO5420-1型C02培養(yǎng)箱(NAPCO公司)，JJT-900／1300型超凈工作臺(ill京半導(dǎo)體設(shè)備一廠)，Mod
7、el680型酶標(biāo)儀(Bio—Rad公司)，OlympusIX70倒置顯微鏡(日本Olympus公司)，Adventurer萬分之一電子天平(0HAuS公司)。甲醇(色譜純，Merck公司)，正十三烷標(biāo)準(zhǔn)品(德國Dr．Ehrenstorfer公司，批號：61220)，RPMI16402011—12-08收稿；2012—04-18接受本文系國家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(No．81102900)E—mail：jljiang@tju．edu．cn第l0期蔣建蘭等：基于組效關(guān)系的姜黃揮發(fā)油抗腫瘤活性成分辨
8、識研究1489培養(yǎng)基、胰蛋白酶均為GIBCO公司產(chǎn)品，胎牛血清(北京鼎國生藥技術(shù)有限責(zé)任公司)，四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲亞砜(DMSO)均為Sigma公司產(chǎn)品，依托泊苷(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號：09090731)，Hela細(xì)胞由武警醫(yī)學(xué)院生藥與藥劑學(xué)教研室提供。31批姜黃藥材分別購自不同的醫(yī)藥單位(各批藥材的生產(chǎn)單位、產(chǎn)品批號等資料均保存在本實(shí)驗(yàn)室，由于樣品較多，限于篇幅，這里不一一列舉)，由天津藥物研究院張鐵軍研究員鑒定，符合2010版《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)
