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1、第42卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究報告第9期2014年9月ChineseJournalofAn~yticalChemistry1343～1347DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．140445在線固相萃取．高效液相色譜聯(lián)用測定動物源食品中的維生素A、E謝云峰王浩劉佟任丹丹楊永壇(中糧營養(yǎng)健康研究院，營養(yǎng)健康與食品安全北京市重點實驗室，北京102209)摘要采用固相萃取與雙梯度高效液相色譜聯(lián)用技術(shù)，建立了一種在線固相萃取一高效液相色譜同時測定動物源食品中維生素A、E的分析方法。樣品于8O℃下皂化反應(yīng)30min，經(jīng)離心沉淀后引入一維c固
2、相萃取柱，采用60％(V／V)甲醇溶液對目標(biāo)物進行在線富集凈化，然后通過閥切換將其轉(zhuǎn)移至二維液相分析系統(tǒng)進行分離檢測?？疾炝溯腿√盍?、上樣溶劑及洗脫條件對豬肝、雞蛋和配方乳粉的維生素A、E富集和基質(zhì)凈化效果。結(jié)果表明，在優(yōu)化條件下，方法線性范圍為0．02～20mg／L，線性相關(guān)系數(shù)R30．9998，對維生素A、E的檢出限(S／N=3)為3．0—30．0g／L，實際樣品加標(biāo)回收率為87．3％～115．0％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1．8％4．6％。本方法操作簡便，靈敏度高，可用于動物源食品中維生素A、E的快速測定。關(guān)鍵詞在線固相萃??；雙梯度高效液相色譜；動物源食品；維生
3、素A；維生素E1引言維生素A和維生素E是機體維持正常生理功能和物質(zhì)能量代謝必需的微量營養(yǎng)成分，但是它們在體內(nèi)不能合成或合成量不足以滿足身體需要，必須通過食物進行補充]。肝臟、蛋類和乳品等動物源食品含有豐富的維生素A、E，是人體所需脂溶性維生素的重要來源。由于脂溶性維生素化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，易受光照、空氣和溫度影響導(dǎo)致氧化分解_2]，而且動物源食品蛋白脂肪含量高，干擾因素多，高效提取和測定復(fù)雜基質(zhì)食品中維生素A、E仍然是維生素分析技術(shù)的難點_3．4]。目前，維生素A和維生素E的分析方法主要有層析法E、比色法[、熒光法[、電化學(xué)法[、氣相色譜法[]和高效液相色譜法[m]，其中
4、以高效液相色譜法最為常用?，F(xiàn)行食品檢驗標(biāo)準(zhǔn)在內(nèi)的大多數(shù)脂溶性維生素分析方法的樣品前處理主要包括皂化、萃取、濃縮、凈化等步驟[1l1]，涉及多次蒸發(fā)溶解，操作繁瑣、費時，容易造成待測組分損失，導(dǎo)致測定結(jié)果偏低且重現(xiàn)性不好。近年來，前處理技術(shù)與色譜分離分析的在線聯(lián)用為簡化繁瑣的手工前處理操作．提高復(fù)雜食品基質(zhì)分析效率提供了新的技術(shù)手段H]。本研究利用雙梯度液相色譜系統(tǒng)結(jié)合柱切換技術(shù)，建立了一種同時測定動物源食品中維生素A、E的在線固相萃取與高效液相色譜聯(lián)用方法，具有分析效率高、溶劑消耗少、測定結(jié)果準(zhǔn)確且重現(xiàn)性好等特點。與文獻[15]相比，本方法不僅擴大了動物源食品檢測種類
5、，而且縮短了分析時間，提高了檢測靈敏度，為動物源食品中維生素A、E的測定提供了更為簡便、靈敏、可靠的分析方法。2實驗部分2．1儀器與試劑Ultimate3000雙三元液相色譜系統(tǒng)(ThermoScientific公司)，配備雙三元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱含六通閥、二極管陣列檢測器、變色龍色譜管理軟件；Milli．Q超純水機(Millipore公司)；臺式高速冷凍離心機(ThermoScientific公司)。維生素A(視黃醇)、一維生素E、JB．維生素E、一維生素E和6一維生素E標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司)；KOH、抗壞血酸(分析純，國藥集團北京化學(xué)試劑有限公司)；無水
6、乙醇、甲醇(色譜級，F(xiàn)isher公司)；其它試劑均為分析純；無水乙醇經(jīng)脫醛處理后使用；豬肝、雞蛋和嬰幼兒配方乳粉購自本地超市。2014—05—26收稿；2014．07．21接受本文系中糧集團有限公司年度科技計劃資助項目(No．2013一C2·F001)E—mail：yangongan@coco．com分析化學(xué)第42卷2．2色譜條件分析柱：ZorbaxExtend—C】8(150mm×4．6mm，5Ixm)；固相萃取柱：ZorbaxSB—C8(12．5mmX4．6mm，5m)；進樣量：100txL；柱溫：30℃；在線凈化流動相：甲醇．水溶液(60：40，)，洗脫條件：使
7、用pH7．5甲醇．水溶液，以1mL／min流速上樣并清洗萃取小柱5min，再使用pH3．5甲醇一水溶液清洗萃取小柱5min，分析測定。流動相：甲醇．水溶液(98：2，)，流速：1．7mL／min；紫外檢測波長設(shè)為325和300nm。2．3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取維生素A標(biāo)準(zhǔn)品10．0mg，一維生素E．維生素E、y．維生素E和．維生素E各50．0mg，用脫醛乙醇溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，配制成濃度分別為100mg／L維生素A和500mg／LOt，，和6維生素E標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于一2O℃保存。測定前用紫外分光光度法標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)儲備液準(zhǔn)確濃度，再用脫醛乙醇稀
