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1、三、核酸電泳相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法50×TAEBuffer(pH8.5)組份濃度2MTris-醋酸，100mMEDTA配制量1L配制方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris242gNa2EDTA·2H2O37.2g2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.加入57.1ml的乙酸，充分?jǐn)嚢琛?.加去離子水將溶液定容至lL后，室溫保存。10×TBEBuffer(pH8.3)組份濃度890mMTris-硼酸，20mMEDTA配制量1L配制方法l.稱量下列試劑，置于lL燒杯中。Tris108gNa2EDTA·2H2O7.
2、44g硼酸55g2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶液定容至lL后，室溫保存。10×MOPS(3-嗎啉基丙磺酸)Buffer組份濃度200rnMMOPS，20mMNaOAc，10mMEDTA配制量1L配制方法1.稱41.8gMOPS，置于1L燒杯中。2.加約700mlDEPC處理水，攪拌溶解。3.使用2NNaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。4.再向溶液中加入下列試劑。1MNaOAc(DEPC處理)20ml0.5MEDTA(pH8.0)(DEPC處理)20ml5.用DEPC處理水將溶液定容至1L。6.用0.45m
3、濾膜過(guò)濾除去雜質(zhì)。7.室溫避光保存。注：溶液見(jiàn)光或高溫滅菌后會(huì)變黃。變黃時(shí)也可使用，但變黑時(shí)不要使用。溴乙錠(10mg/ml)組份濃度10mg/ml溴乙錠配制量100ml配制方法1.稱量1g溴乙錠，加入到100ml容器中。2.加入去離子水100ml，充分?jǐn)嚢钄?shù)h完全溶解溴乙錠。3.將溶液轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，室溫避光保存。4.溴乙錠的工作濃度為0.5g/ml。注意：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)，必須小心操作。Agarose凝膠配制方法1.配制適量的電泳及制膠用的緩沖液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。2.根椐制膠量及凝膠濃度，準(zhǔn)確稱量瓊脂糖粉，加入
4、適當(dāng)?shù)腻F形瓶中。3.加入一定量的電泳緩沖液(總液體量不宜超過(guò)錐形瓶的50%容量)。注：用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須統(tǒng)一。4.在錐形瓶的瓶封上保鮮膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波爐中加熱熔化瓊脂糖。加熱過(guò)程中，當(dāng)溶液沸騰后，請(qǐng)戴上防熱手套。小心搖動(dòng)錐形瓶。使瓊脂糖充分均勻熔化。此操作重復(fù)數(shù)次，直至瓊脂糖完全熔化。必須注意，在微波爐中加熱時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，每次當(dāng)溶液起泡沸騰時(shí)停止加熱，否則會(huì)引起溶液過(guò)熱暴沸，造成瓊脂糖凝膠濃度不準(zhǔn)，也會(huì)損壞微波爐。熔化瓊脂糖時(shí)，必須保證瓊脂糖充分完全熔化，否則，會(huì)造成電泳圖像模糊不清。5.使溶液冷卻至6
5、0℃左右，如需要可在此時(shí)加入溴乙錠溶液(終濃度0.5μg/ml)。并充分混勻。注：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)。使用含有溴乙錠的溶液時(shí)，請(qǐng)戴好手套。6.將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然后在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度一般在3~5min之間。7.在室溫下使膠凝固(大約30min~1h)，然后放置于電泳槽中進(jìn)行電泳。注：凝膠不立即使用時(shí)，請(qǐng)用保鮮膜將凝膠包好后在4℃下保存，一般可保存2~5天。瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的最佳分辨范圍瓊脂糖濃度最佳線形DNA分辨范圍(bp)0.5%0.7%1.0%1.2%1.5%2.0%1,000~30,000800~12
6、,000500~10,000400~7,000200~3,00050~2,0006×LoadingBuffer(DNA電泳用)組份濃度30mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)XyleneCyanolFF0.05%(W/V)BromophenolBlue配制量500ml配制方法1.稱量下列試劑，置于500ml燒杯中。EDTA4.4gBromophenolBlue250mgXyleneCyanolFF250mg2.向燒杯中加入約200ml的去離子水后，加熱攪拌充分溶解。3.加入180ml的甘油(Glycerol)后
7、，使用2NNaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。4.用去離子水定容至500ml后，室溫保存。10×LoadlngBuffer(RNA電泳用)組份濃度10mMEDTA50%(V/V)Glycerol0.25%(W/V)XyleneCyanolFF0.25%(W/V)BromophenolBlue配制置10ml配制方法1.稱量下列試劑，置于10ml離心管中。0.5MEDTA(pH8.0)200μlBromophenolBlue25mgXyleneCyanolFF25mg2.向離心管中加入約4ml的DEPC處理水后，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.加入5ml的甘油(G
8、lycerol)后，充分混勻。4.用DEPC處理水定容至10ml后，室溫保存。四、核酸、蛋白質(zhì)雜交用相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法20×SSC組份濃度3.0MNaCl，0.3MNa3citrate
