凍干人用狂犬病疫苗(Vero-細(xì)胞).doc

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1、凍干人用狂犬病疫苗（Vero細(xì)胞）DongganRenyongKuangquanbingYimiao(VeroXibao)RabiesVaccineforHumanUse（Verocell），F(xiàn)reeze-dried本品系用狂犬病病毒固定毒接種于Vero細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、收獲、濃縮、滅活病毒、純化后，加入適宜穩(wěn)定劑凍干后制成，用于預(yù)防狂犬病。1基本要求生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動(dòng)物等應(yīng)符合“凡例”有關(guān)要求。2制造2.1生產(chǎn)用細(xì)胞生產(chǎn)用細(xì)胞為Vero細(xì)胞。2.1.1細(xì)胞管理及檢定應(yīng)符合“

2、生物制品生產(chǎn)和檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”規(guī)定。各種子批代次應(yīng)不超過(guò)批準(zhǔn)的限定代次。取自同批工作細(xì)胞庫(kù)的1支或多支細(xì)胞管，經(jīng)復(fù)蘇擴(kuò)增后的細(xì)胞僅用于一批疫苗的生產(chǎn)。2.1.2細(xì)胞制備取工作細(xì)胞庫(kù)中的1支或幾支細(xì)胞管，細(xì)胞復(fù)蘇、擴(kuò)增至接種病毒的細(xì)胞為一批。將復(fù)蘇后的單層細(xì)胞用胰蛋白酶或其他適宜的消化液進(jìn)行消化，分散成均勻的細(xì)胞，加入適宜的培養(yǎng)液混合均勻，置37℃培養(yǎng)成均勻單層細(xì)胞。2.2毒種2.2.1名稱及來(lái)源生產(chǎn)用毒種為狂犬病病毒固定毒CTN-1V、aGV株或其他經(jīng)Vero細(xì)胞適應(yīng)的狂犬病病毒

3、固定毒株。2.2.2種子批的建立應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)和檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。各種子批傳代應(yīng)不超過(guò)批準(zhǔn)的限定代次。狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在Vero細(xì)胞上傳代，至工作種子批傳代次數(shù)應(yīng)不超過(guò)35代，aGV株在Vero細(xì)胞上傳代，至工作種子批傳代次數(shù)應(yīng)不超過(guò)15代。2.2.3種子批的檢定主種子批應(yīng)進(jìn)行以下全面檢定，工作種子批應(yīng)至少進(jìn)行2.2.3.1-2.2.3.4項(xiàng)檢定。2.2.3.1鑒別試驗(yàn)用小鼠腦內(nèi)中和試驗(yàn)鑒定毒種的特異性。將毒種作10倍系列稀釋?zhuān)∵m宜稀釋度病毒液與等量抗狂犬病病毒特異

4、性免疫血清混合，同時(shí)設(shè)立正常血清對(duì)照組，試驗(yàn)組與對(duì)照組的每個(gè)稀釋度分別接種11-13g小鼠6只，每只腦內(nèi)接種0.03ml，觀察14天，中和指數(shù)應(yīng)不低于500。2.2.3.2病毒滴定取毒種作10倍系列稀釋?zhuān)總€(gè)稀釋度腦內(nèi)接種體重為11-13g小鼠至少6只，每只腦內(nèi)接種0.03ml，觀察14天，病毒滴度應(yīng)不低于7.5LgLD50/ml。2.2.3.3無(wú)菌檢查依法檢查（附錄XIIA），應(yīng)符合規(guī)定。2.2.3.4支原體檢查依法檢查（附錄XIIB），應(yīng)符合規(guī)定。2.2.3.5病毒外源因子檢查依法檢查（附錄X

5、IIC），應(yīng)符合規(guī)定。2.2.3.6免疫原性檢查用主種子批毒種制備滅活疫苗，腹腔注射體重為12-14g小鼠，每只0.5ml。7天后重復(fù)接種1次作為試驗(yàn)組，未經(jīng)免疫小鼠做對(duì)照組。第一次免疫后的第14天，試驗(yàn)組和對(duì)照組分別用10倍系列稀釋的CVS病毒腦腔攻擊，每只0.03ml，每個(gè)稀釋度10只小鼠。保護(hù)指數(shù)應(yīng)不低于100。2.2.4毒種保存毒種應(yīng)于-60℃以下保存。2．3原液2．3．1細(xì)胞制備同2.1.2項(xiàng)。2．3．2培養(yǎng)液培養(yǎng)液為含適量滅能新生牛血清的MEM、199或其他適宜培養(yǎng)液。新生牛血清的質(zhì)量

6、應(yīng)符合規(guī)定（附錄XIIID）。2．3．3對(duì)照細(xì)胞外源因子檢查依法檢查（附錄XIIC），應(yīng)符合規(guī)定。2．3．4病毒接種和培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)成致密單層后，毒種按0.01-0.1MOI（同一工作種子批應(yīng)按同一MOI接種）接種，置適宜溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間后，棄去培養(yǎng)液，用PBS沖洗去除牛血清，加入適量維持液，置33-35℃繼續(xù)培養(yǎng)。2．3．5病毒收獲經(jīng)培養(yǎng)適宜時(shí)間，收獲病毒液。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，可換以維持液進(jìn)行多次病毒收獲。同一細(xì)胞批的同一次病毒收獲液檢定合格后可合并為單次病毒收獲物。2．3．6單次病毒收獲液檢定

7、按3.1項(xiàng)進(jìn)行。2．3．7單次病毒收獲液保存于2-8°C保存不超過(guò)30天。2.3.8合并、濃縮同一細(xì)胞批生產(chǎn)的多個(gè)單次病毒收獲液檢定合格后可進(jìn)行合并。合并后的病毒液，經(jīng)超濾或其他適宜方法濃縮至確定的蛋白質(zhì)濃度范圍2．3．9病毒滅活于濃縮后的病毒收獲液中按1：4000的比例加入β—丙內(nèi)酯，置適宜溫度、在一定時(shí)間內(nèi)滅活病毒，并于適宜的溫度放置適宜的時(shí)間，以確保β-丙內(nèi)酯完全水解。病毒滅活到期后，每個(gè)滅活容器應(yīng)立即取樣，分別進(jìn)行病毒滅活驗(yàn)證試驗(yàn)。2.3．10純化滅活后的病毒液采用柱色譜或其他適宜的方法進(jìn)

8、行純化，純化后可加入適量人血白蛋白或其他適宜的穩(wěn)定劑即為原液。2.3．11原液檢定按3.2項(xiàng)進(jìn)行。2.4半成品2．4．1配制用疫苗稀釋液將原液按同一蛋白質(zhì)含量及抗原量進(jìn)行配制，配制后總蛋白質(zhì)含量應(yīng)不高于80μg/劑，并加入適宜的穩(wěn)定劑即為半成品。2.4．2半成品檢定按3.3項(xiàng)進(jìn)行。2．5成品2．5.1分批應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。2．5.2分裝及凍干應(yīng)符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定2．5.3規(guī)格復(fù)溶后每瓶0.5ml。每1次人用劑量為0.5ml，疫苗效價(jià)應(yīng)不低于2.5IU。