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《蕪菁花葉病毒HC-Pro基因的克隆、真核表達及多克隆抗體的制備.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、蕪菁花葉病毒HDP加基因的克隆、真核表達及多克隆抗體的制備論文作者簽名：指導教師簽名：速皇絲論文評閱人1：評閱人2：評閱人3：評閱人4．評閱人5：答辯委員會主席：委員1：委員2：委員3：委員4：委員5：答辯日期：0nandPoIyclonalicVirus胍-．P陽gene杭州師范大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得揎劌堙菹盤塋或其他教育機構的學位
2、或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：簽字日期：年月日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解拭劌墟菹盤堂有權保留并向國家有關部門或機構送交本論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權揎劌豎范盤堂可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)學位論文作者簽名：導師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：’年月日杭州師范大
3、學碩上學位論文致謝三年的時光轉(zhuǎn)瞬即逝，回首過去心中感慨萬千，值得回憶的事情很多，值得感謝的人也很多，感謝這三年來在科研和生活上給我?guī)椭睦蠋?、同學及朋友們，在這里真誠的說聲：謝謝!首先，要感謝我的導師施曼玲教授，本研究從內(nèi)容的選擇到實驗的設計和實施，從論文的撰寫、修改到定稿，都傾注了導師大量的精力和智慧。感謝您對我科研思路上的啟發(fā)及實驗過程中給予的寶貴、中肯的意見和建議，感謝您在生活上給予的無限關心。值此畢業(yè)之際，向?qū)熑陙淼慕陶d和關懷表示衷心的感謝!導師嚴謹求實的科學態(tài)度和淵博的專業(yè)知識給我留下深刻的印
4、象，使我終生受益。感謝唐斌老師在實驗方法及序列分析上的幫助；感謝陳偉老師在實驗過程中給予的諸多便利條件；感謝浙江大學劉舟博士實驗上的指導，是你們的幫助和支持，使我的論文得以完成。感謝師兄李因來在實驗方法上的指導及生活、工作上的關心和幫助；感謝師妹潘熙萍在本論文實施的過程中提出的寶貴建議及實驗過程中給予諸多的無私幫助；同時還要感謝師姐高乃波、師妹張麗莎給予的幫助!感謝舍友朱勝男、吳小燕，是你們的熱情、真誠、幽默，創(chuàng)造了一個充滿快樂的生活及學習氛圍，讓我在這三年的忙綠實驗中痛并快樂著。特別感謝我的家人，感謝你們
5、這么多年來對我學業(yè)的默默支持和理解，感謝你們對我無私的奉獻；感謝男友多年的照顧、關心和幫助，感謝他在我遇到挫折和困難時給予的鼓勵、支持和理解。最后，再次感謝多年來給我關心、支持、理解和幫助的所有老師、同學、朋友及親人們，謝謝你們!衷心的祝福你們一生平安!杭州師范人學碩：L學位論文摘要蕪菁花葉病毒(Tumipmosaicvims，TuMV)是馬鈴薯Y病毒科馬鈴薯Y病毒屬的一個重要成員，是世界各地廣泛分布的重要植物病毒病原之一，主要危害十字花科植物，造成農(nóng)作物嚴重減產(chǎn)。TuM[V基因組所編碼的HC．Pro蛋白不
6、但與蚜蟲傳毒、病毒的胞問移動和病癥表現(xiàn)相關，而且也是一個病毒沉默的抑制子。本研究克隆了TuMV日D尸加基因，構建真核表達載體TI也O腳C-尸陽，并在本氏煙中獲得高效表達，蛋白純化后作為抗原制備多克隆抗體。Hc．Pro多抗的研制為TllMV病毒的檢測，以及HC．Pr0與寄主和病毒的其他蛋白的互作研究打下基礎。根據(jù)已報道的Tl】MV崩om基因序列，設計兩條分別帶有PACI和AvIUI酶切位點的引物，通過ImPCR方法，從感染TllM：V的煙草病葉中擴增獲得了TuMv日DP陽基因，純化PCR產(chǎn)物，連接pMD．18
7、T克隆載體，轉(zhuǎn)化EcD，fDH5a菌株，PCR和雙酶切鑒定陽性重組質(zhì)粒并測序。測序結果表明所克隆的TuMV日om基因的序列為1410個核苷酸，編碼470個氨基酸，與GellBank上登錄的TuMV其他8個分離物((登錄號AM410979，AJ831794，AB093609，AJ831799，AB093605，ABl94802，AJ314826，刖438192)的日GP陽基因的核苷酸和氨基酸進行同源性比較，同源率分別為85％一99％和94％一98％。采用內(nèi)切酶PacI和Aw11分別對重組質(zhì)粒pMD腳C-m和植
8、物表達載體TRBOpJL50進行雙酶切，兩者連接并轉(zhuǎn)化E∞，fDH5Q菌株，卡那霉素篩選抗性菌落，經(jīng)PCR、酶切及測序鑒定，獲得了真核表達載體，并命名為TRBOHc．Pr0．將重組質(zhì)粒TI氌O月D脅導入根癌農(nóng)桿菌，通過農(nóng)桿菌浸潤接種的方法使月G脅基因在本氏煙葉片中進行高效表達。SDS．PAGE和westemblot分析表明，腳Gm基因在本氏煙中表達所產(chǎn)生的蛋白分子量大小約為53l(Da，與預期大小一致，Ni+．N
