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《發(fā)根土壤桿菌介導(dǎo)的大豆發(fā)根轉(zhuǎn)化體系改進(jìn)-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第33卷第2期大豆科學(xué)Vo1．33N0．22014正4月SOYBEANSCIENCEApr．2014發(fā)根土壤桿菌介導(dǎo)的大豆發(fā)根轉(zhuǎn)化體系改進(jìn)徐建美，楊巧，李碩，劉倩，簡恒(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)系，北京100193)摘要：鑒于大豆難以獲得轉(zhuǎn)基因植株的現(xiàn)實(shí)，借鑒Kereszt等建立的發(fā)根土壤桿菌(Agrobacteriumrhizogenes)K599介導(dǎo)的大豆轉(zhuǎn)化體系，并針對實(shí)驗(yàn)中遇到的具體問題，對原體系進(jìn)行了適當(dāng)改進(jìn)。結(jié)果表明：改進(jìn)的體系操作更簡單，對發(fā)根培養(yǎng)條件、人員操作技能要求更低，所形成的植株更具生命力。
2、同時(shí)，應(yīng)用改進(jìn)體系以及RNAi技術(shù)，構(gòu)建了表達(dá)線蟲特異基因dsRNA的轉(zhuǎn)基因發(fā)根植株，可在60d內(nèi)在轉(zhuǎn)基因大豆發(fā)根上對植物線蟲基因的RNAi效果完成驗(yàn)證。改進(jìn)的體系為培育抗大豆胞囊線蟲品種奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：大豆；發(fā)根土壤桿菌(Agrobacteriumrhizogenes)K599；RNA干擾；遺傳轉(zhuǎn)化中圖分類號(hào)：$565．1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000．9841(2014)02-0161-07ImprovementofSoybeanHairy·rootSystemMediatedbyAgrobacter
3、iumRhizogenesXUJian—mei，YANGQiao，LIShuo，LIUQian，JIANHeng(DepartmentofPlantPathology，ChinaAgiculturalUniversity，Beijing100193，China)Abstract：InconsiderationofthefactthatitiSdifficulttoacquiretransgenicsoybeanplants．weestablishedatransformationsystemofsoybeanm
4、ediatedbyAgrobacteriumrhizogenesK599accordingtothemethodofKereszteta1．，andimproveditbe—causeofsomespecificquestionsinexperiment．Theimprovedtransformationsystemandtheoriginalonewerecompared．TakeadvantageoftheimprovedsystemandRNAitechnology，transgenichairy-roo
5、t·plantsthatexpressingnematodedsRNAofspecibiCgeneswereconstructedandtheRNAieffectsofthesegenescouldbetestedwithin60daysonthetransgeniehairyroots．TheresultsindicatethattheimprovedsystemiSeasiertomanipulate，havelessdemandstoenvironmentconditionsandpersonnelski
6、llinglevels，andimprovethevitalityofacquiredplants．Ourresultsestablishedthefoundationforbreedingnewcropcultivarswithhighlyresistanttosoybeancystnematode．Keywords：Soybean；AgrobacteriumrhizogenesK599；RNAinterference(RNAi)；Genetictransformation在研究基因功能和基因工程方面，遺傳轉(zhuǎn)
7、化有著線蟲關(guān)鍵基因可以轉(zhuǎn)入大豆中以得到轉(zhuǎn)基因大豆極其重要的作用。為將目的基因轉(zhuǎn)入植物，在一些物種子進(jìn)行進(jìn)一步研究。種中，發(fā)展了既簡單又快速的發(fā)根土壤桿菌(Agrobac—本文借鑒Kereszt等¨。。的方法，建立了利用發(fā)teriumrhizogenes)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法。該法可以用于生產(chǎn)根土壤桿菌(A．rhizogenes)K599介導(dǎo)的大豆發(fā)根轉(zhuǎn)次級代謝物4。，鑒別啟動(dòng)子J，根據(jù)根的發(fā)育情況分化體系，但在實(shí)驗(yàn)中遇到了發(fā)根形成對濕度要求高析基因功能_6以及重建整個(gè)植株等。但某些植而不利于植株地上部分健壯生長、繼而影
8、響到移栽物，如大豆(GlycineL_Merril1)的轉(zhuǎn)化效率仍較后植株正常生長不能完成線蟲侵染等具體問題。低。近年來新開發(fā)的一種轉(zhuǎn)化方法能夠顯著地減少為此，對原體系進(jìn)行了改進(jìn)，并對改進(jìn)前后兩體系形成轉(zhuǎn)基因植物組織所消耗的時(shí)間，利用此方法形成進(jìn)行了比較，利用改進(jìn)體系以及RNAi技術(shù)構(gòu)建的一種“嵌合體”植株，其由野生型的非轉(zhuǎn)基因莖葉系表達(dá)線蟲特異基因dsRNA的轉(zhuǎn)基因發(fā)根植株，可以統(tǒng)和
