發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的菘藍IsatisindigoticaFort遺傳轉(zhuǎn)化及植株再生體系的建立

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1、西南師范大學碩士學位論文發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的菘藍(IsatisindigoticaFort.)遺傳轉(zhuǎn)化及植株再生體系的建立姓名:汪洪申請學位級別:碩士專業(yè):植物學指導(dǎo)教師:孫敏2003.5.1縮寫詞英文名稱2,4一D6一BAbOCefe王A罄DNA蕊VEBEDT丸HPLCIAAKanKTM譬MSNAANPT.IIOD6001)CRPEG孫{玨SDSTE1Ws縮寫詞表中譯名稱2,4-dichlorophenoxyacetic2,4-二氯笨氧乙酸6-benzylaminopurine6-芐基氨蒸嘌呤Ba

2、sepair堿基對cefotaxime頭孢噻腭鈉Cetyltriethylammoniumbromide十六娩基三雩基浚訖胺Deoxyribonucleic脫氧核糖梭酸Dryweight干重EthidiumBromide澳乙錠Ethylenediaminetetraceticacid己二胺豳乙酸Highperformanceliquidchromatogram高效液相恕譜Ind01.3,acteticacid吲哚.3.乙酸Kanamycin卡臻霉蠢6-FurfurylaminopurineMer

3、captoethanolMurashigeandSkoogmediuma—naphthaleneaceticacidNeomycinephosphotransferaseIIOpticaldensityat600nmPolymerasechainreactionPolyethylenglycolRevelationsperminuteSodiumdodecycsulpateTris,EDTAbufferTri(hydroxy—methyl)aminomethaneV6.糠氨基嘌呤巰萋乙醇MS培養(yǎng)

4、然a一萘乙酸糯霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶Il600hm吸光度聚會酶鏈式反應(yīng)聚乙二醇每分鋅轉(zhuǎn)數(shù)十二烷基磺酸鈉三羥甲基氨基甲靛,EDTA緩沖液三羥甲基氮基甲婉糕南螂范大學轍士攀經(jīng)論文發(fā)根農(nóng)稈菌介鼯辨衽藍遺摶轉(zhuǎn)純晟植抹輯生體茉的建立發(fā)撮教稈蘺介導(dǎo)的菘藍遺蔣轉(zhuǎn)純及穗株褥黛體系的建立擎零睪專鼗;越耪學指導(dǎo)教師:孫敏教授騷究騫瘋;攘鐾生餐學每生魏按零研究生:溉j!I;(2000254)摘要蘩藏([scttismdigoticaFort+)不筏麓褰藤馳串藥耱,藤菇龜是工業(yè)艨染籟承重要艨羈之一,用量極大,在全國范圍內(nèi)廣為栽

5、培。本文利用發(fā)椒農(nóng)桿菌RiT-DNA建立并優(yōu)化了籍糖體菘藍翁逡傳轉(zhuǎn)馥薅系,黌對髯釜{妻株的主要彳弋謝產(chǎn)穆靛藍、旋玉霞遺簿了蠢羹鹼測,篩選了謊懿籠往慕,也麓實彩}深藏焱、藏病等藻戮豹簿入葵怒了基磋。1熬溉并篩進丁豳倍棒藉藍穗狀根優(yōu)良纛髖篆}以鰓傣俸菘藏囂瑩麓豹子蛄必努撞饞,疲瘸發(fā)根農(nóng)桴蘸A《窩R1000藏璞逮誘導(dǎo)撼了t。逶揀綴,結(jié)票襲鞠,A毒菌株潞菘藍毛狀裉的誘導(dǎo)優(yōu)予R1000,毛狀糠的誘導(dǎo)頻率贏遮100%,褥裰率麓遮30戳主;添翱0.5rag/l豹IAA能挺藏蘸狡蔽熬誘導(dǎo)鞭率;光照黠嬲髂體菘蘸雹

6、狀根豹誘導(dǎo)極必重要,缺光條{譬下不越誘導(dǎo)出鑣狀攝;提取罨狀輟DNA送行PCR分析,撿溺剽了ro/B、rotC基醫(yī),褒饔嘏妖粳確系轉(zhuǎn)純援+毛竣授能在蠶食經(jīng)簿激索的MS固/液體培養(yǎng)基中快速生長,且表現(xiàn)出多分支,多根濺,失謠向地性嫩長簿熟穗亳狀疆特經(jīng);建立了TRAl,TRA2,TRA3,TRA4疆令秀拔掇無效系。對疆整摶壤狡裰鞠、∥二僚舔亳妖報佟了魄較,疆倍俸菘藍毫姣攝擻長速度大予二嵇髂。y,2麓贏并優(yōu)化丁滋狀擻植株辮生體系,,激進三靜途徑弼獲褥毛羧梭襻生建糠。t(1)扶毛敞檬上直接分化出不定芽幫裰。

7、亳狀根約一個胄濰代一次詹能宣教繡分化斑多爨苓定芽。90d囂絞許不懟努數(shù)量,鼉五穩(wěn)舔30個嘏敬毽葬物主哥馘褥21個不窳筇;添教e.5mg/16-BA戇顯攀遺程避鼉技攝垮定碧豹羚訖,麓食傻趲6-BA靼NAA對毛羧綴不寇努的分佬最為禱效(MS+10trl籪NAA+05nIg鍾6.BA),90d后統(tǒng)計,平均簿30個校段培簿物上可獲穗67個不定芽。(2)通過纛狀綴鑫穆組織途經(jīng)秀燮疆揀。毛凌投襲不會激豢豹臻券基上不縫鑫發(fā)地西商9希鞲大學磺土攀垃淪支攫榱農(nóng)抒落舟譬羽稻蘊遺傳轉(zhuǎn)他及植株再生體累豹建立影或意穗綴綏

8、:2,4.D對毛獲穰惑傷綴媛誘導(dǎo)壤受疆囂,6-BA對愈穆疆緞豹誘警作兩不嘴顯,但2,4.D和6-BA黻合使用對愈傷綴織誘導(dǎo)有裁。愈傷縋織誘導(dǎo)簸健培養(yǎng)蒸為:MS+O5mg/l2,4-I)+o,5m醣6-BA,愈傍組織生妖的最毽培養(yǎng)基為MS÷01rag/12,4一D+0lmg/t6-BA:愈傷組緞能在不食激素的壤養(yǎng)基上囊發(fā)避分化擻不定芽,惶分化頻率較低,掰6-BA辯不定勢熬分純饞蘧鞍鞠顯,瓣套蘞燃6-BA耱NAA慰勞豹誘警及繕勢率較好,不定蒡瀵囂懿疆鹱蝰莠蘩蠢MS+lo氆∥lNAA+§+5mt∥l6

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