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1、臨床生化檢驗反應(yīng)原理 及報告的審核瀘州市人民醫(yī)院檢驗科潘庭榮主要內(nèi)容常見的生化反應(yīng)原理檢驗報告審核普遍存在的問題檢驗報告審核的建議總結(jié)終點分析法（平衡法）連續(xù)監(jiān)測法比濁測定法一、常見的生化反應(yīng)原理終點分析法是基于反應(yīng)達(dá)到平衡時反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對光吸收強(qiáng)度的大小，對物質(zhì)進(jìn)行定量的一類分析方法。反應(yīng)混合物進(jìn)行一定時間反應(yīng)后，達(dá)到平衡終點，即在顯色反應(yīng)處于穩(wěn)定階段時，監(jiān)測其顏色對光的吸收強(qiáng)度，以此計算待測物濃度。分為一點、兩點終點法終點分析法一點終點法一點終點法：一點終點法的特點是使用一種或兩
2、種試劑。當(dāng)樣品和試劑混合后，待測物與試劑的物理化學(xué)反應(yīng)達(dá)到終點時，測定吸光度，計算待測物質(zhì)的濃度。該法要求試劑本底顏色要深，該法具有代表性的試驗有：總蛋白、白蛋白、鎂測定TP反應(yīng)曲線Mg反應(yīng)曲線二點終點法：一般是用雙試劑，是自動化生化分析儀常用的一種方法。該方法的優(yōu)點是可以消除樣品、試劑的顏色、濁度以及一些干擾物質(zhì)的影響。代表性的試驗有葡萄糖等兩點終點法Cre反應(yīng)曲線測定底物的消耗或產(chǎn)物生成的速度的化學(xué)方法稱為連續(xù)監(jiān)測法（又稱動態(tài)分析法、速率法或動力學(xué)法）。在反應(yīng)速度恒定期（零級反應(yīng)期）來連續(xù)觀察
3、和記錄一定反應(yīng)時間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化。以單位時間酶促反應(yīng)初速度計算酶活力的大小和代謝物的濃度。連續(xù)監(jiān)測法酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線典型酶聯(lián)法反應(yīng)曲線AMY反應(yīng)曲線ALT反應(yīng)曲線通過檢測物質(zhì)對光的散射或透射強(qiáng)度來測定物質(zhì)的方法稱比濁法。比濁法可分為化學(xué)比濁法和免疫比濁法，免疫比濁法又分為透射比濁和散射比濁。全自動生化儀常用透射比濁法，常用于特種蛋白測定。其工作曲線為拋物線。比濁測定法比濁測定法注意事項：抗原或抗體量（測定物）大大過剩，可出現(xiàn)可溶性復(fù)合物，造成誤差。應(yīng)維持反應(yīng)管中抗體蛋白（底物
4、）始終過剩。易受到脂血的影響。二、報告審核中的普遍問題責(zé)任心不強(qiáng)，未對結(jié)果進(jìn)行認(rèn)真審核對檢測儀器或試劑方法學(xué)不夠了解專業(yè)知識欠缺，工作經(jīng)驗不足對儀器檢測的結(jié)果及室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果過于相信三、報告審核的建議結(jié)合臨床資料審核結(jié)合分析項目間的內(nèi)在聯(lián)系審核（專業(yè)知識）結(jié)合影響檢驗結(jié)果因素審核檢驗項目的方法學(xué)和線性檢驗標(biāo)本的影響檢驗儀器性能影響結(jié)合當(dāng)日檢驗結(jié)果總體趨勢審核結(jié)果結(jié)合臨床資料結(jié)合病人的性別、年齡、臨床診斷、其他檢查結(jié)果審核例：某病人檢測的TP為110g/L，該標(biāo)本沒有脂血等影響檢測結(jié)果的因素臨床診斷：
5、多發(fā)性骨髓瘤另：胰島素與低血糖、病人輸注藥物對結(jié)果的影響檢驗項目間的內(nèi)在聯(lián)系各檢測參數(shù)間存在大小、比例、邏輯關(guān)系例：HDL-C+LDL-C﹤TC、Dbil﹤TbilCK-MB﹤CK(M+B)α-HBDH﹤LDH(H+M)原發(fā)性甲亢：T3↑、T4↑、TSH↓等影響檢驗結(jié)果的因素試劑線性范圍：了解檢驗項目試劑的線性范圍，對超過或低于范圍的項目，必須進(jìn)行相應(yīng)的減量稀釋或增量后重新測定。線性范圍在實際工作中，用連續(xù)監(jiān)測法會遇到檢驗結(jié)果為0或者負(fù)值的情況，此時不能盲目相信該結(jié)果低就出具低值報告，應(yīng)查看其反應(yīng)
6、曲線例：某病人的尿液AMY檢測結(jié)果為0U/L其反應(yīng)曲線如下圖：AMY反應(yīng)曲線AMY反應(yīng)曲線分析分析：由于測定物質(zhì)濃度過高處理：對測定物質(zhì)進(jìn)行十倍左右的稀釋再測定，直到反應(yīng)曲線恢復(fù)正常結(jié)果才可靠影響檢驗結(jié)果的因素檢測項目的方法學(xué)：要了解該項目試劑采用的方法學(xué)：例：某病人在測定心肌酶譜時，其CK:246U/L、CK-MB:286U/L，標(biāo)本無溶血等因素影響其結(jié)果中CK-MB﹥CK檢測項目的方法學(xué)分析：CK是由M和B兩類亞基組成的二聚體，其構(gòu)成為CK-MB(心型)約占0-3%、CK-MM(肌型)約占97
7、-100%、CK-BB（腦型）約占0-1%檢測項目的方法學(xué)CK-MB采用的檢測方法為免疫抑制法原理:正常人體中，CK同工酶中CK-MM﹥CK-MB﹥CK-BB,其中CK-BB含量極少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略CK-BB的基礎(chǔ)上。采用抗體抑制其M亞基活性，使CK-MM失去活性，而CK-MB失去一半的活性。單測定B亞基的活性，其結(jié)果×2即為CK-MB活性檢測項目的方法學(xué)原因分析：由于在患輕度或中度腦損傷、腦血管意外及腦手術(shù)后、新生兒產(chǎn)程窒息造成腦組織發(fā)生實質(zhì)性損害的病人中，CK-BB會升高，這
8、時該方法測定的CK-MB的活性相當(dāng)于是CK-MB+2CK-BB的活性之和，造成CK-MB活性假性升高檢測項目的方法學(xué)為什么CK-MB﹥2CK不可能該測定CK-MB活性=CK-MB+2CK-BB,如果CK-BB﹥CK-MM,結(jié)果要乘2，即CK-MB+2CK-BB﹥CK-BB+CK-MB+CK-MM,測定的CK-MB活性﹥CK活性，但CK-MB﹥2CK不可能解決方法：其他方法測定CK-MB的質(zhì)量檢驗標(biāo)本的影響標(biāo)本脂血會使反應(yīng)濁度增加，透光度下降，吸光度增加，從而造成檢驗結(jié)果不準(zhǔn)確。如T
