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1、黃霉素產(chǎn)生菌的菌種選育和發(fā)酵工藝的研究StudiesonStrainBreedingandFermentationProcessofFlavomycin領(lǐng)域U制藥工程研究生U王洛菊指導(dǎo)教師U黃鶴副教授企業(yè)導(dǎo)師U徐延禮高級工程師天津大學(xué)研究生院2012年4月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝之處外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得U天津大學(xué)U或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢
2、獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解U天津大學(xué)U有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。特授權(quán)U天津大學(xué)U可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)說明）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日0B中文摘要本論文通過研究黃霉素產(chǎn)生菌株的選育及其發(fā)酵工藝條件優(yōu)化，所得研究結(jié)果與
3、我公司2010年初黃霉素菌株的效價水平相比，搖瓶效價提高了2355u/mL，50L中試發(fā)酵罐效價水平提高了1647u/mL（連續(xù)三批中試產(chǎn)品的平均值），顯著降低了我公司黃霉素產(chǎn)品的生產(chǎn)成本。首先，通過氮離子注入誘變法確定黃霉素產(chǎn)生菌耐自身代謝產(chǎn)物的濃度。通過比較不同劑量氮離子注入誘發(fā)的黃霉素產(chǎn)生菌株的致死率和正突變率結(jié)果，確定出最佳氮離子注入劑量。黃霉素產(chǎn)生菌經(jīng)誘變，其單菌形態(tài)發(fā)生了很大變化。經(jīng)實(shí)驗(yàn)得出，發(fā)酵產(chǎn)素能力高的菌株呈表面光滑，邊緣無皺褶或少量皺褶。經(jīng)過大量的初篩和復(fù)篩后，得到一株黃霉素高產(chǎn)菌株，且遺傳穩(wěn)定性良好
4、。其次，對高產(chǎn)菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基配方，如碳源、氮源、無機(jī)鹽、表面活性劑等原材料進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳培養(yǎng)基配方為：葡萄糖濃度4%，玉米漿濃度3%，黃豆餅粉濃度1%，K2HPO4濃度0.20%，NaCl濃度0.3%，MgSO4濃度0.06%，CaCO3濃度0.03%，有機(jī)硅消泡劑濃度0.12%；經(jīng)過PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)，得出影響黃霉素發(fā)酵效價的三個重要因素及其濃度，葡萄糖：濃度5.56%，玉米漿：濃度1.15%，黃豆餅粉：濃度2.56%。再次，對所得高產(chǎn)菌株的發(fā)酵條件，如溫度、pH、裝液量、接種量、種齡、轉(zhuǎn)速等進(jìn)行了優(yōu)
5、化研究，得到最佳發(fā)酵條件為：溫度37℃，裝液量100mL，pH5.0，種齡26h，接重量10﹪，轉(zhuǎn)速210rpm；經(jīng)過PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)，得出影響黃霉素發(fā)酵的三個重要工藝條件，溫度：37℃，種齡：29h，接種量：12.5%。最后，將所得高產(chǎn)菌株放大到中試50L罐，研究通氣量、攪拌對溶氧和發(fā)-1酵效價的影響。通過優(yōu)化得到，通氣量為2vvm，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm。關(guān)鍵詞：菌種選育氮離子注入培養(yǎng)基條件優(yōu)化發(fā)酵工藝條件優(yōu)化1BAbstractStrainbreedingandfermentationprocesso
6、fflavomycinwerestudiedinthisarticle.Comparedtoflavomycinpotencylevelsin2010,thesestudiesachievedmeaningfulresults:potencyinshakingflaskphaseisincreasedby2355u/mL;potencyin50-Lfermentationtankphaseisincreasedby1647u/mL.Firstly,aconcentrationisestablishedinwhichfla
7、vomycinstrainsareresistanttotheirmetaboliticproducts.Studythemutageniceffectofparentstrainsvianitrogenionimplantationmethod.Anappropriatenitrogenionimplantationdosageischosenviastudythefatalityrateandpositivemutationratecausedbydifferentdosageofnitrogenionimplant
8、ation.Bymeansofpreliminaryscreeningandsecondscreening,ahigh-yieldstrainisachieved,whichpossessesgoodgeneticstability.Secondly,themediumformulapreparedforabovea
