雷帕霉素菌種選育與發(fā)酵工藝的初步研究碩士論文

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1、沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文雷帕霉素菌種選育與發(fā)酵工藝的初步研究姓名：傅瑤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)指導(dǎo)教師：何建勇20090601沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要摘要雷帕霉素(Rapamycin)又名西羅莫司(Sirolimus)，是從吸水鏈霉菌(Streptomyceshygroscopicus)ATCC29253中分離得到的一種三烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。它是一種新型高效的免疫抑制劑，同時(shí)具有抗真菌和抗腫瘤等多種生物學(xué)活性。本文首先對(duì)雷帕霉素產(chǎn)生菌的菌種特性、培養(yǎng)條件、產(chǎn)物的發(fā)酵工藝、提取工

2、藝及檢測(cè)方法進(jìn)行了初步考察。確定了斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基的組成，確定了初步的發(fā)酵條件、提取方法和檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)還考察了不同誘變劑及誘變劑量對(duì)雷帕霉素產(chǎn)生菌的誘變效果，確定了最佳的誘變劑為紫外線，最適的誘變劑量為UV處理20"-'30s。經(jīng)紫外線誘變育種，篩選得到一株相對(duì)高產(chǎn)的菌株U6．12，效價(jià)可達(dá)128“g／mL，比出發(fā)菌株效價(jià)提高了70．7％左右。為建立理性化篩選模型，本文還考察了慶大霉素、鏈霉素及前體賴氨酸結(jié)構(gòu)類似物S．2(氨基乙基)．半胱氨酸(AEC)的抗性突變株與雷帕霉素產(chǎn)

3、量的關(guān)系。此外，本實(shí)驗(yàn)還考察了不同氨基酸對(duì)雷帕霉素生物合成的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸和谷氨酰胺能夠不同程度地促進(jìn)雷帕霉素產(chǎn)物合成。最后，以得到的高產(chǎn)菌種U6．12為基礎(chǔ)，進(jìn)行了發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽的考察，采用均勻設(shè)計(jì)方法，對(duì)雷帕霉素發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。得到了優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配方。U6．12菌種在此優(yōu)化的培養(yǎng)基上，發(fā)酵單位比在原發(fā)酵培養(yǎng)基中提高了30．3％，實(shí)際效價(jià)可達(dá)180pg／mL左右。關(guān)鍵詞：吸水鏈霉菌；雷帕霉素；西羅莫司；免疫抑制劑；發(fā)

4、酵工藝；均勻設(shè)計(jì)沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractRapamycin，alsoknownasSirolimus，producedbyStreptomyceshygroscopicusATCC29253isatrienemacrolideantibiotic．ItisanewtypeofhighlyeffectiveimmunosuppressanLatthesametimewithanti-fungalandanti-tumorandotherbiologicalactivities．Fir

5、stly,characteristicsandcultureconditionsoftherapamycinproducingstrains，alsowiththefermentationprocess，extractionanddetectionmethodsoftheproduct,werestudiedpreliminarily．Asaresult,thecomponentsofslantmedium，seedmediumandfermentationmediumweredetermined

6、，andtheconditionsoffermentation，extractionandtiterdetectionwereselected．Then,theoptimalmutagenanditsoptimaldosagewereinvestigated．a(chǎn)saresulttheoptimalmutagenWasUv．theoptimaldosagewas20-30s．AftertworoundsofUV-inducedmutagenesisontherapamyein—producingst

7、rain，relativelyhigh-yieldmutantofU6-12Wasobtained謝ththetiterofupto128}tg／mL．whosetiterwasincreasedabout70．7％thantheoriginalstrain．Inordertoestablisharationalscreeningmodel，therapamycinproductionabilitiesofthemutants、析tllgentamycin-resistance．ofthemuta

8、nts、析thstreptomycin-resistantandofthemutantswithAEC—resistantwereinvestigated．Furthermore，theinfluenceofthedifferentaminoacidsonthebiosynthesisofrapamycinwasalsostudiedinthisexperiment．Theresultsshowedthatphenylalanine，tryptophan,tyrosine，lysi