奧曲肽逆轉(zhuǎn)人耐順鉑卵巢癌細(xì)胞耐藥性及其機(jī)制研究.pdf

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1、中國實用婦科與產(chǎn)科雜志2012年7月第28卷第7期·533·論著文章編號：1005—2216(2012)07—0533—03奧曲肽逆轉(zhuǎn)人耐順鉑卵巢癌細(xì)胞耐藥性及其機(jī)制研究史悅?cè)A，沈楊，張云霞，耿麗琴，任慕蘭摘要：目的觀察奧曲肽(octreotide，OCT)逆轉(zhuǎn)人耐順鉑卵巢癌細(xì)胞SKOV3／DDP耐藥性的作用，并探討其機(jī)制。方法2009年7月至2010年1月于東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院中心實驗室進(jìn)行本實驗。MTY法及流式細(xì)胞術(shù)觀察順鉑、奧曲肽聯(lián)合作用后人卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株SKOV3／DDP增殖與凋亡的變化。實時熒光定量PCR檢測奧曲肽對SK—OV3／DDP細(xì)胞生長抑素受體一2(somatostat

2、inreceptor-2，SSTR2)、多藥耐藥基因一1(multipledrugresistance一1，MDR1)、多藥耐藥相關(guān)蛋白-2(multidrugresistancerelatedprotein-2，MRP2)mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果奧曲肽與順鉑有協(xié)同抗卵巢癌耐順鉑細(xì)胞增殖的效應(yīng)，奧曲肽在質(zhì)量濃度2．5～20mg／L能顯著降低順鉑的IC50(P<0．05)，提高細(xì)胞的凋亡率(P<0．05)。SKOV3／DDP細(xì)胞有SSTR2mRNA表達(dá)，但奧曲肽對SSTR2mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)作用不明顯，奧曲肽顯著降低SKOV3／DDP細(xì)胞MRP2mRNA的表達(dá)(P<0．05)，作用呈劑量

3、依賴性，但對MDR1mRNA的表達(dá)沒有影響。結(jié)論奧曲肽可以與卵巢癌細(xì)胞表面SSTR2結(jié)合，發(fā)揮抗增殖、促凋亡等作用，并可能通過降低卵巢癌細(xì)胞MRP2的表達(dá)逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥性。關(guān)鍵詞：奧曲肽；生長抑素；上皮性卵巢癌；耐藥逆轉(zhuǎn)Keywords：octreotide；somatostatin；epithelialovariancancer；durgresistancereversal中圖分類號：R737．31文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A腫瘤耐藥是卵巢癌治療有效率低的重要原因。因此，5．0、10．0、20．0mg／L，順鉑質(zhì)量濃度為1．0、2．0、4．0、8．0迫切需要新型有效的化療方案。在發(fā)現(xiàn)生長抑素(som

4、a—mg／L，兩種藥物上述各個質(zhì)量濃度分別聯(lián)合，同時設(shè)空白tostatin，SST)及其類似物(somatostatinanalogue，SSTA)具有對照組(加等體積不含藥物培養(yǎng)液)，每組設(shè)3個平行孔，廣泛抑制細(xì)胞增生及對實體瘤生長抑制作用的基礎(chǔ)上，近重復(fù)3次。48h后終止反應(yīng)，每孔加入MTF(5g／L，來有研究表明生長抑素及其類似物，如奧曲肽(OCT)，還可201．tL)，繼續(xù)孵育4h后吸去培養(yǎng)液，每孔加入二甲基亞砜以增強(qiáng)多種耐藥腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性。本實驗旨150p．L，振蕩10rain，酶標(biāo)儀測光吸收值(A)，按以下公式在研究生長抑素類似物——奧曲肽對卵巢癌耐順鉑細(xì)胞的計

5、算：細(xì)胞增殖抑制率=(對照組平均A值一實驗組平均生長抑制作用及耐藥逆轉(zhuǎn)機(jī)制，為臨床治療耐藥卵巢癌提A值)／(對照組平均A值一空白對照組平均A值)X供新的治療途徑。100％。采用Excel軟件加權(quán)線性回歸法計算出50％抑制率時的藥物濃度即IC50，并計算奧曲肽處理前后順鉑IC501材料與方法的變化，繪制奧曲肽對順鉑IC50的影響曲線。根據(jù)文獻(xiàn)計1．1材料人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌耐順鉑細(xì)胞系SK—算聯(lián)合用藥指數(shù)(combinationdragindex，CDI)，CDI=生存OV3／DDP，購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院細(xì)胞庫，該細(xì)胞系對順鉑表現(xiàn)率(A藥+B藥)／[生存率(A藥)x生存率(B藥)]，C

6、DI≤出明顯的耐藥性。其他材料為：胎牛血清，RPMI1640培養(yǎng)基，1提示A、B兩藥合用具有協(xié)同細(xì)胞毒作用。四甲基偶氮哇鹽(methylthiazolyltetrazolium，M'I'T)、二甲基亞1．2．2順鉑、奧曲肽單藥及聯(lián)合對SKOV3／DDP細(xì)胞凋亡砜(DMSO)，順鉑粉劑(eisplatin，DDP)，使用時新鮮配制，醋酸的影響根據(jù)MTI"結(jié)果順鉑質(zhì)量濃度選2．0mg／L，奧曲肽奧曲肽，2～8~C保存，使用時新鮮配制。選10．0mg／L，設(shè)對照、單藥和聯(lián)合共四組。加藥36h后收1．2方法集細(xì)胞，分別按AnnexinV—FITC／PI凋亡試劑盒說明書進(jìn)行1．2．1順鉑、奧曲肽

7、及兩者聯(lián)合對SKOV3／DDP細(xì)胞增殖細(xì)胞染色，上流式細(xì)胞儀分析。的影響收集對數(shù)生長期細(xì)胞，1x10個／孔接種于96孔1．2．3實時熒光定量PCR(realtimeRT-PCR)檢測奧曲肽培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h，貼壁后棄去培養(yǎng)液，加入含不同質(zhì)量濃作用后SKOV3／DDP細(xì)胞生長抑素受體一2(SSTR2)、多藥耐藥度藥物的培養(yǎng)基200p,L，奧曲肽質(zhì)量濃度為1．25、2．5、基因-1(MDR1)、多藥耐藥相關(guān)蛋白-2(MRP2)mRNA表達(dá)的改變不同