奧曲肽-紫杉醇偶聯(lián)物靶向逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞紫杉醇耐藥性的體外實(shí)驗(yàn)研究

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1、隸I初大·堅(jiān)碩士學(xué)位論文萬方數(shù)據(jù)奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物靶向逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞紫杉醇耐藥性的體外實(shí)驗(yàn)研究注：本研究為江蘇省衛(wèi)生廳青年基金項(xiàng)目(Q201305)，南京市科技基金項(xiàng)目(201201054)，東南大學(xué)重大科學(xué)研究引導(dǎo)基金項(xiàng)目(KJ20100493)資助。萬方數(shù)據(jù)STUDIESOFOCTREOTIDE．PACLITAXELCONJUGATEREVERSETHEPACLITAXELRESISTANCEINHUMANoVARIANCANCERCELLSINVITROAThesisSubmittedtoSou

2、theastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYZHANGXiaoyuSupervisedbyProfessorSHENYangCollegeofClinicalMedicineSoutheastUniversityMay2014萬方數(shù)據(jù)東南大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得

3、東南大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：彳蛆日期：汪叢生』心東南大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明東南大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。除在保密期內(nèi)的保密論文外，允許論文被查閱和借閱，可以公布(包括以電子信息形式刊登)論文的全部內(nèi)容或中、英文摘要等部分內(nèi)容。論文的公布(包括以電子信

4、息形式刊登)授權(quán)東南大學(xué)研究生院辦理。研究生簽名：越導(dǎo)師簽名：睜日期：一；J萬方數(shù)據(jù)中文捅要奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物靶向逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞紫杉醇耐藥性的體外實(shí)驗(yàn)研究碩士研究生：張嘯宇導(dǎo)師：沈楊副教授東南大學(xué)中文摘要第一部分奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物的合成目的：合成純化的奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物。方法：與江蘇省藥物研究所進(jìn)行藥物合作合成，采用二苯基N．琥珀酰亞胺磷酸酯(SDPP)作為催化劑，先合成N一羥基丁二酰亞胺紫杉醇丁二酸酯，再與游離奧曲肽偶聯(lián)得到奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物。結(jié)果：成功合成得到純化的奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物，收率

5、60％，純度為98％，其結(jié)構(gòu)經(jīng)MS確證，ESI·MS(毗)：1954[M+H】+。結(jié)論：采用SPDD作為催化劑，能有效合成紫杉醇丁二酸NHS偶聯(lián)物，并可以用于與奧曲肽偶聯(lián)，這可作為奧曲肽一紫杉醇偶聯(lián)物合成的新方法。第二部分奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物抑帶i]A2780／Taxol細(xì)胞生長的體外實(shí)驗(yàn)研究目的：體外環(huán)境下研究奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物對人耐紫杉醇卵巢癌細(xì)胞A2780／Taxol的生長抑制作用，及對細(xì)胞凋亡的影響。方法：11外購A2780／Taxol細(xì)胞并傳代培養(yǎng)，采用細(xì)胞免疫化學(xué)法鑒定細(xì)胞表面生長抑素受體2

6、亞型(somatostatinreceptor2，SSTR2)的表達(dá)；2)奧曲肽一紫杉醇偶聯(lián)物以0、2．5、5．0、10．0、20．0、40．Oug／n[1l6種濃度分別加入A2780／Taxol細(xì)胞培養(yǎng)液中，用CCK，8法分析各種濃度藥物作用24、48、72dx時對卵巢癌細(xì)胞增殖的影響；3)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測偶聯(lián)物(10．0ug／m1)對A2780FFaxol細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果：1、)細(xì)胞免疫化學(xué)法結(jié)果顯示A2780／Taxol細(xì)胞表面表達(dá)SSTR2；2)奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物對A2780／Taxol細(xì)

7、胞增殖的影響：偶聯(lián)物在2．5刪濃度時即對A2780／Taxol細(xì)胞有增殖抑制作用，抑制作用隨濃度的增加呈增強(qiáng)趨勢，在濃度>lO“g／ml時，作用時萬方數(shù)據(jù)鑾里奎蘭堡主堂堡堡苧間在0-72h內(nèi)，出現(xiàn)明顯的時間依賴性(P．／o．05)；3)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡：結(jié)果顯示偶聯(lián)物具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，不同濃度組與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，偶聯(lián)物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用明顯高于紫杉醇及奧曲肽單獨(dú)作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。結(jié)論：1)體外環(huán)境下，奧曲肽具有促進(jìn)A2780／Taxol細(xì)胞凋亡的作用。2)奧

8、曲肽一紫杉醇偶聯(lián)物可抑制A2780／Taxol細(xì)胞的增殖，作用呈時間劑量依賴性。第三部分奧曲肽．紫杉醇偶聯(lián)物對A2780／T奴ol細(xì)胞株耐藥基因和蛋白表達(dá)的影響目的-在第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物在體外環(huán)境下對A2780／Taxol細(xì)胞SSTR2、MDRl、VEGFmRNA表達(dá)的影響，探討偶聯(lián)物體外增加紫杉醇敏感性，逆轉(zhuǎn)A2780／Taxol細(xì)胞耐藥性的可能機(jī)制。方法：1)根據(jù)CCK-8結(jié)果選取中低毒