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《梭梭cmo基因的克隆與植物表達(dá)載體的構(gòu)建_石磊》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、西北植物學(xué)報,2010,30(8):1514-1519ActaBot.Boreal.-Occident.Sin.文章編號:1000-4025(2010)08-1514-061梭梭CMO基因的克隆與植物表達(dá)載體的構(gòu)建1,213111*石磊,甘曉燕,夏興雷,陳虞超,李苗,宋玉霞(1寧夏農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點實驗室,銀川750002;2寧夏大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,銀川750021;3銀川市園林管理局,銀川750003)摘要:采用RT-PCR、RACE等方法從超旱生耐鹽植物梭梭(Haloxylonammodendron)中擴(kuò)增出甜菜堿合成過程中的限速酶膽堿單加氧酶(CMO)編碼基因的cDNA序列(命
2、名為HaCMO),其開放閱讀框為1344bp,推測的氨基酸序列全長為447個氨基酸殘基.根據(jù)已獲得的開放閱讀框,構(gòu)建重組植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-HaCMO.HaCMO核苷酸序列與藜科幾種鹽生植物如菠菜(Spinaciaoleracea)、山菠菜(Atriplexhortensis)、遼寧堿蓬(Suaedaliaotungensis)、鹽角草(Salicorniaeuropaea)和甜菜(Betavulgaris)等的一致性均在74.5%以上,推導(dǎo)編碼蛋白的氨基酸序列一致性均在73.5%以上,表明CMO編碼基因在藜科植物中是一種比較保守的基因.研究結(jié)果為進(jìn)一步從分子水平
3、探明梭梭的抗旱、耐鹽機(jī)制,挖掘并利用植物抗逆基因奠定了基礎(chǔ).關(guān)鍵詞:梭梭;膽堿單加氧酶;基因克隆;植物表達(dá)載體中圖分類號:Q785文獻(xiàn)標(biāo)識碼:ACloningofCholineMonooxygenaseGenefromHaloxylonammodendronandConstructionofItsPlantExpressionVector1,213111*SHILei,GANxiao-yan,XIAXing-lei,CHENYu-chao,LIMiao,SONGYu-xia(1NingxiaAcademyofAgricultureandForestrySciences,Yinch
4、uan750002,China;2CollegeofLifeScience,NingxiaUniversity,Yinchuan750021,China;3LandscapeBureau,Yinchuan750003,China)Abstract:ThroughRT-PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)andRACE(rapidamplifica-tionofcDNAends),a1344bpfragmentcontainingentirecholinemonooxygenase(CMO)codingregionof44
5、7aminoacids(aa)hasbeenobtained(asnamedHaCMO)fromextremexerophyteandsalt-tolerantplantHaloxylonammodendron.PlantexpressionvectorpCAMBIA2300-HaCMOwithobtainedfragmentwasconstructed.NucleotidesequenceofHaCMOwassimilartothecorrespondingfragmentofCMOcDNAofseveralotherplants,suchasSpinaciaoleracea,
6、Atriplexhortensis,Suaedaliaotungensis,Salicorniaeu-ropaea,Betavulgaris,withasimilarityofmorethan74.5%.EncodedproteinbyHaCMOandCMOpro-teinfromabovementionedplantsalsosharedmorethan73.5%identityattheaminoacidlevel.TheresultshowedCMOgenewasconservedinChenopodiaceae.Thestudyprovidedmaterialforfur
7、therexploringdroughtresistantandsalttolerantmechanismsofH.ammodendroninmolecularlevel,andlaidafoundationforfindingandexploitationofresistantgenesfromstress-tolerantplants.Keywords:Haloxylonammodendron;cholinemonooxygenase(CMO);genecloning;pla
