豬血纖維連接蛋白在大鼠燒傷創(chuàng)面愈合中的作用

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1、感染.炎癥.修復(fù)2008年9月第9卷第3期·研究報告·豬血纖維連接蛋白在大鼠燒傷創(chuàng)面愈合中的作用吳學(xué)軍1　王　斌1　劉　棟2　劉興堯1　章靜波31.鄭州德福恩生物技術(shù)有限公司,河南　鄭州　450001;2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科,河南　鄭州　450052;3.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,北京　100005)　　纖維連接蛋白(FN)廣泛存在于動物組織和組織液中,參與細(xì)胞的黏附、增殖、遷移和胚胎發(fā)育,也參與許多病理過程,如傷口愈合、炎癥、纖維變性以及腫瘤的生成與轉(zhuǎn)移。由于FN具有多種生物活性,所以國內(nèi)外對基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究是都十分關(guān)注的領(lǐng)域。但人血資源的缺乏和昂貴限制了

2、FN的廣泛應(yīng)用。為了探索動物血FN能否作為有效的治療劑,我們觀察了豬血FN對大鼠燒傷創(chuàng)面愈合的效果,報告如下。1　材料和方法1.1　動物分組及處理　實(shí)驗(yàn)用SD大鼠36只,體重(250.4±6.1)g,雌雄各半,購自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心。隨機(jī)分為3組:FN組、祛腐生肌散組和對照組,每組12只。實(shí)驗(yàn)前1d背部脫毛,用自動控溫的圓形電烙鐵于大鼠背部制備面積約6cm2的深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面(80℃,10s)。各組于傷后2h開始創(chuàng)面給藥。治療組每天用含豬血漿FN(0.5mg/ml)的制劑(鄭州德福恩生物技術(shù)有限公司,批號20061226)涂擦,每日1次,每次1ml,無菌敷料包扎;祛腐生肌散組外涂祛

3、腐生肌散(濱州藍(lán)海中醫(yī)藥科技研究中心生產(chǎn),批號20070309),無菌敷料包扎,每日換藥1次;對照組用無菌敷料包扎,創(chuàng)面不給藥,每日換藥1次。1.2　觀察指標(biāo)1.2.1　創(chuàng)面愈合率　按Nagelschmidt等[1]的方法觀察創(chuàng)面愈合情況,按下列公式計算創(chuàng)面愈合率:愈合率=(原始創(chuàng)面面積—未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積×100%。1.2.2　組織中蛋白質(zhì)、DNA以及羥脯氨酸含量測定　傷后7d、14d分別取創(chuàng)面組織勻漿,分別采用Bradford法和Hoechest33258染料熒光法檢測組織中蛋白質(zhì)、DNA以及羥脯氨酸含量。1.3　統(tǒng)計學(xué)分析　用SPSS10.0統(tǒng)計軟件,各組數(shù)據(jù)均以x±s

4、表示,采用χ2檢驗(yàn)、方差分析及t檢驗(yàn),P<0.05為差異有顯著性。2　結(jié)　果2.1　創(chuàng)面一般情況　3組動物于模型建立之后1~3d,均表現(xiàn)為創(chuàng)面明顯紅腫,滲出液較多。FN組于第4日開始滲出減少,紅腫消退;第8日可見肉芽組織開始生長。祛腐生肌散組發(fā)生上述變化的時間分別為傷后6d和12d,而對照組發(fā)生上述變化的時間分別為10和14d。與祛腐生肌散、對照組比較,FN組炎癥反應(yīng)輕,創(chuàng)周炎癥消退快。2.2　創(chuàng)面愈合時間　FN組、祛腐生肌散組創(chuàng)面愈合時間較對照組明顯縮短(P<0.01);且FN組較祛腐生肌散組明顯縮短(P<0.01)。見表1。2.3　創(chuàng)面愈合率　傷后各時間點(diǎn)FN組和祛腐生肌散組的創(chuàng)面愈

5、合率均明顯高于對照組(P<0.01),FN組較祛腐生肌散組創(chuàng)面愈合率明顯升高(P<0.01)。見表1。表1　兩組動物創(chuàng)面愈合時間和創(chuàng)面率的比較（x±s）組別動物數(shù)（只）創(chuàng)面愈合時間（d）創(chuàng)面愈合率（%）傷后7d傷后14d傷后21dFN組1219.21±2.5058±22*^87±0.13*^96±3*^祛腐生肌組1223.91±2.3529±13*61±0.12*81±21*對照組1226.33±3.2419±632±0.2066±11注：與對照組比較：*P<0.01,與祛腐生肌散組比較：^P<0.01　　注:與對照組比較:*P<0.01;與祛腐生肌散組比較:△P<0.012.4　羥脯氨

6、酸、總蛋白質(zhì)和DNA含量　FN組創(chuàng)面組織中羥脯氨酸和DNA含量在傷后7d時明顯高于祛腐生肌散組,而蛋白質(zhì)含量則在傷后14d時高于祛腐生肌散組。FN組、祛腐生肌散組創(chuàng)面組織中蛋白質(zhì)、羥脯氨酸、DNA含量在傷后7d、14d均高于對照組。見表2。3組動物創(chuàng)面組織中蛋白質(zhì)、羥脯氨酸和DNA含量的比較（x±s.n=12）組別蛋白質(zhì)（μg/mg）羥脯氨酸（μg/mg）DNA（μg/mg）7d14d7d14d7d14dFN組115.7±78.6*259.1±69.6*^8.5±3.6*^14.1±3.9*^26.1±9.3*^57.5±27.5*祛腐生肌散組93.1±54.5*148.2±81.3*4

7、.7±1.6*6.6±3.0*2.4±5.9*42.1±14.9*對照組36.2±16.6103.3±55.62.1±0.53.9±1.86.1±2.722.4±8.23　討　論FN是體內(nèi)正常存在的一種糖蛋白,參與創(chuàng)傷修復(fù)的全過程。FN在傷口愈合中主要起以下作用:①作為趨化因子誘導(dǎo)外周血中的單核細(xì)胞及其他吞噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞向傷口處運(yùn)動(由于FN分子上有細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn))。②作為一種非特異調(diào)理素調(diào)動吞噬系統(tǒng)清除病菌及組織碎片,