單克隆抗體制備簡要流程.docx

《單克隆抗體制備簡要流程.docx》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在教育資源-天天文庫。

1、制備單克隆抗體是復雜而費時的工作，整個技術流程如圖：單克隆抗體制備（免疫2-3月，總周期4-6月）準備抗原動物免疫選擇免疫動物Elisa測抗血清分離脾細胞骨髓瘤細胞細胞融合（融合劑:PEJ）HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞篩選陽性細胞（三天內做完流式）陽性克隆并擴大培養(yǎng)細胞凍存擴大培養(yǎng)收集上清動物接種收集腹水單克隆抗體純化保存1、抗原提純與動物免疫：選擇BALB/c健康小鼠。如為細胞抗原，可取1×107個細胞作腹腔免疫；可溶性抗原需加完全福氏佐劑并經充分乳化，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用以動物免疫。免疫3～4只小鼠，間隔一般2～3周，末次免疫后

2、3～4天，分離脾細胞。2、骨髓瘤細胞及飼養(yǎng)細胞的制備選擇Sp2/0細胞株，將昆明鼠的腹腔細胞作為飼養(yǎng)細胞3、細胞融合將兩種細胞混合后加入PEG（融合劑）使細胞彼此融合。其后用培養(yǎng)液稀釋PEG，消除PEG的作用。注意：細胞比例、培養(yǎng)液成分、反應時間4、有限稀釋法篩選陽性株篩選陽性株一般選用的骨髓瘤細胞為HAT敏感細胞株（一般稀釋至0.8個細胞/孔）細胞培養(yǎng)至覆蓋0％～20％孔底時，吸取培養(yǎng)上清用ELISA檢測抗體含量。首先依抗體的分泌情況篩選出高抗體分泌孔，將孔中細胞再行克隆化，爾后進行抗原特異的ELISA測定，選高分泌特異性細胞株擴大培養(yǎng)或凍存。5、

3、單克隆抗體的制備與保存篩選出的陽性細胞株應及早進行抗體制備，最普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠，先用液體石蠟進行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，凍存。6、單克隆抗體的純化硫酸銨沉淀法