ELISA(雙抗體夾心法)—檢測HBsAg.pdf

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1、ELISA（雙抗體夾心法）—檢測HBsAg摘要：以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標本加入，共同孵育后，抗原結合于包被抗體上，再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs)，酶標抗體連接到抗原上，最后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應來判定抗原含量?！静牧稀縃BsAg試劑盒，本試劑盒含:1、包被抗-HBs反應條1瓶2、酶結合物1瓶3、HBsAg陽性對照1瓶4、HBsAg陰性對照1瓶5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋1瓶6、顯色劑（找產(chǎn)品，上生物幫>>>>相關專題ELISA免疫實驗技術以已知抗體(抗

2、HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標本加入，共同孵育后，抗原結合于包被抗體上，再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs)，酶標抗體連接到抗原上，最后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應來判定抗原含量。【材料】HBsAg試劑盒，本試劑盒含:1、包被抗-HBs反應條1瓶2、酶結合物1瓶3、HBsAg陽性對照1瓶4、HBsAg陰性對照1瓶5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋1瓶6、顯色劑(TMB)A1瓶7、顯色劑(TMB)B1瓶8、終止液1瓶【方法】1、加入待測標本每孔0.05ml，并設HBsAg陽性對照2孔，HBs

3、Ag陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。2、洗板:棄去反應條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復五次后拍干。3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml)，混勻，37℃孵育10分鐘。4、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻。【結果】比色法:波長450nm，先用空白孔校零點，然后讀取各孔光密度值。樣品OD值/陰性對照平均OD值≥2.1判斷為陽性，否則為陰性。備注

4、：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8，實驗結果有效?！咀⒁馐马棥?、試劑盒置2℃～8℃保存。2、使用前試劑應搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔條，置室溫平衡30分鐘后再行測試，余者應及時封存于冰箱中以備后用。4、待測標本不可用NaN3防腐。5、不同批號試劑請勿通用。6、結果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶時，請置37℃至溶解。（注：專業(yè)文檔是經(jīng)驗性極強的領域，無法

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