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1、熒光定量PCR技術普通PCR臨床檢測技術的缺點普通PCR臨床檢測技術雖然解決了檢出率低、周期長的問題，但由于假陽性率高，不能正確指導臨床實踐。因此國家衛(wèi)生部曾在1997年行文禁止將普通PCR技術用于臨床診斷。2FQ-PCR與普通PCR的區(qū)別采用閉管檢測，不需PCR后處理，并采用dUTP-UNG酶的防污染系統(tǒng)，擴增和檢測一次同時完成。不需開蓋，不產(chǎn)生污染。避免了假陽性。探針與被檢DNA序列特異雜交，增強了特異性。3FQ-PCR與普通PCR的區(qū)別可定量結果，準確靈敏地反應了病原體的感染和治療恢復情況。光譜分析儀直讀結果，自動分析，增強了靈敏性和客觀性。4熒光基因探針雜交定量PCR
2、技術隨著PCR技術的日臻成熟，已出現(xiàn)的熒光基因探針雜交定量PCR方法把目的基因擴增、特異分子雜交和熒光化學融為一體，使PCR擴增和產(chǎn)物分析的全過程均在單管封閉條件下進行， 并通過微機控制，實現(xiàn)了對擴增產(chǎn)物進行實時 動態(tài)檢測和結果的自動分析。5熒光基因探針雜交定量PCR技術不僅進一步提高了特異性，并從根本上解決了PCR擴增產(chǎn)物污染的難題，保持了PCR技術的快速和高靈敏性，使假陽性率和假陰性率降低到最低限度，而且能定量被檢微生物的核酸拷貝數(shù)，為臨床實踐提供準確的病原微生物的診斷、提供評估藥物臨床治療效果的可靠依據(jù)。因此，熒光基因探針雜交定量PCR技術診斷病原微生物與迄今本院各臨床
3、科室所進行的臨床檢測技術不相重復，它是一種屬不同層次、快速、準確、直接并具有不同臨床指導意義的檢測方法。6熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCRFluorescencequantitativePCR）一種完全閉管式的PCR和熒光探針雜交技術相結合的定量PCR方法PCR的高效擴增特性核酸探針的高特異性光譜技術的高靈敏性和可計量性7熒光基因探針雜交定量PCR技術與臨床在確保特異性的前題下，高質(zhì)的靈敏性使得PCR技術能探測到疾病發(fā)展的初期階段，甚至于臨床癥狀出現(xiàn)前或亞臨床狀態(tài)或機體正在向病態(tài)發(fā)展的早期過程之中，如對于感染性疾病，以往的方法要么間接的檢查機體免疫系統(tǒng)對侵入微生物的反應產(chǎn)物
4、降解產(chǎn)物（如抗原）或直接檢查侵入微生物（如培養(yǎng)，鏡檢），但上述方法的靈敏度都受到方法學上的限制而達不到檢查極微量級（如Pg水平），因而難以在早期對疾病的發(fā)生做出準確，客觀的診斷，但PCR巨大的放大效率卻解決了這一問題。8熒光基因探針雜交定量PCR技術與臨床另外如對像腫瘤等“漸變性”疾病是因多基因積累性突變才能造成正常細胞轉(zhuǎn)變成癌細胞的，那么及時檢測到突變由量變轉(zhuǎn)化為質(zhì)變前期階段則顯得極為重要，只有基因診斷才能完成這一目標。9熒光定量PCR檢測的對象是致病的病因，所以對于鑒別疾病的致病因子非常實用和準確，這對于區(qū)別相近臨床癥狀的不同致病子，以期對因治療極為有用。熒光定量PCR可
5、以對致病因子進行準確的定量，對治療前后及治療過程進行量化監(jiān)控，則可以有效的觀察藥物治療效果。如果用致病子的數(shù)量多少表示治療效果，則可以進行臨床治療方案的評價及治愈標準的確立。10熒光定量PCR檢測的臨床應用范圍用于疾病的早期診斷用于疾病的鑒別診斷用于疾病的病因確定用于藥物療效的評價用于治療效果的評價用于治愈標準的確定11熒光定量PCR技術應用于感染性疾病的診斷12結核桿菌的臨床診斷方法目前結核病確診主要依靠痰片染色，抗酸桿菌和結核桿菌的培養(yǎng)法鑒定。但涂片陽性率不高，且不能確診；培養(yǎng)法需較長時間。ELISA和RIA法敏感性低，尚不能直接檢測臨床標本。近年來國外出現(xiàn)了培養(yǎng)早期進行
6、放射性檢測的BacTec技術，能顯著縮短報告時間，但價格極貴，國內(nèi)很難推廣。基因診斷技術的應用是一大突破，其中包括基因探針技術，染色體指紋技術和熒光定量PCR技術。13.北京胸科醫(yī)院;北京市結核病胸部腫瘤研究所;上海肺科醫(yī)院三家醫(yī)院的考核情況。三家醫(yī)院標本分布醫(yī)院結核組351例對照組160例例數(shù)涂陽培陽北京胸科143364260北京結研所151403150上海肺科57572950結核分枝桿菌(TB)FQ-PCR檢測與常規(guī)檢測比較14FQ-PCR法與涂片法、培養(yǎng)法的檢出率比較組別涂片法培養(yǎng)法FQ-PCR法例數(shù)陽性檢出率陽性檢出率陽性檢出率結核病組35113337.9%10229
7、.1%22062.7%對照組16000%00%00%15熒光定量PCR技術檢測結核桿菌應用評價1.特異性★人型結核桿菌，牛型結核桿菌及卡介菌均可擴增檢測出，其它分支桿菌均否。2.敏感性★可檢測1pgDNA，其相當于30個結核桿菌的染色體DNA量。3.臨床應用★快速★可檢測無法培養(yǎng)的結核桿菌16臨床上，結核性腦膜炎是小兒多發(fā)病，病情兇險，所以早期快速診斷具有重要意義，而熒光定量PCR方法整個過程才4~5小時，遠較細胞培養(yǎng)法為快，而且準確。檢測標本無特殊限制：痰、尿、腹水、胸水、關節(jié)液、血、肺泡灌洗液、腦脊
