《脫毒苗培養(yǎng)》PPT課件.ppt

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1、第二節(jié)脫毒種苗生產(chǎn)及病毒檢測技術(shù)一、脫毒的意義：無性繁殖作物長期營養(yǎng)繁殖，易受病毒侵染，而使病毒在體內(nèi)積累，導(dǎo)致種性退化，造成產(chǎn)量下降或品質(zhì)降低甚至死亡，給農(nóng)業(yè)造成巨大損失。通過莖尖培養(yǎng)獲得無病毒種苗，對退化品種進行提純復(fù)壯。提高產(chǎn)量和品質(zhì)，如馬鈴薯脫毒可提高產(chǎn)量30-60%,提高了經(jīng)濟效益。此外，由于減少農(nóng)藥使用，可以保護生態(tài)環(huán)境。脫毒技術(shù)主要應(yīng)用于各種無性繁殖植物，如草莓、馬鈴薯、甘薯、蘋果、香蕉、甘蔗等。二、脫毒方法：（一）莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒：1.脫毒原理：病毒在植物體內(nèi)的分布不均勻，越靠近頂端區(qū)域，帶毒越少，頂端分生組織（0.2-0.5mm）不帶病毒或含病毒量極低。因此，分離分生組織

2、細胞進行培養(yǎng)，可以獲得無病毒種苗。2.莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒的基本程序：一般包括培養(yǎng)基選擇和制備、帶脫毒材料的表面、滅菌、莖尖分生組織分離、接種和培養(yǎng)、誘導(dǎo)芽分化和小植株增殖、誘導(dǎo)生根、馴化移栽等環(huán)節(jié)。莖尖分生組織的分離需要在超凈工作臺上借助體視顯微鏡進行。莖尖放在培養(yǎng)皿內(nèi)進行解剖，一只手用鑷子固定，另一手用解剖針將葉片和葉原基層層剝掉，當(dāng)露出半圓形頂端分生組織時，將分生組織切下，接種與培養(yǎng)基上。virus-freetissuevirusparticlesfoundhere3.脫毒效果與莖尖大小的關(guān)系：脫毒效果和莖尖分生組織大小直接相關(guān)，莖尖分生組織越小，脫毒率越高，但生長速度慢。如草莓莖尖切取

3、0.2-0.3mm時，脫毒率達到100%，而切取1.0mm時，脫毒率為50%。因此，脫毒培養(yǎng)時，需要兼顧脫毒率、成活率及莖尖發(fā)育成完整植株的能力。既要脫除病毒，也要使莖尖分生組織迅速生長發(fā)育。一般莖尖分生組織大小以0.2-0.5mm為適宜。（二）微體嫁接脫毒：微體嫁接是在無菌條件下，將極小(<0.2mm）的莖尖嫁接到試管內(nèi)的無菌實生苗砧木上，經(jīng)培養(yǎng)，待接口愈合發(fā)育為完整植株而達到脫毒的效果。該方法已在柑橘、蘋果、葡萄、山茶等園藝植物中應(yīng)用。微體嫁接微體嫁接的方法：（1）試管砧木的準(zhǔn)備:將無病毒種子表面滅菌后接種與MS培養(yǎng)基，黑暗條件下培養(yǎng)15d使其發(fā)芽。（2）莖尖嫁接：在超凈工作臺上，將幼苗的

4、上胚軸和子葉去掉，根系截短，在離上胚軸頂端越0.5cm處斜向下切一深達木質(zhì)部，長2-3cm的切口，在斜切口末端橫切一刀，用去掉切下部分。在體視顯微鏡下，從待脫毒樣品上切取0.2mm的莖尖分生組織，小心放于切口的水平面上，切面向下并與砧木切口形成層組織緊密貼合，然后接于培養(yǎng)基上。（3）嫁接苗培養(yǎng)：將嫁接苗置于光下培養(yǎng)，光照時數(shù)16h，嫁接1周后形成愈傷組織，2-3周愈合，5-6周后接穗發(fā)育為新梢。2.微體嫁接脫毒的關(guān)鍵：影響微體嫁接成活率的主要因素為接穗大小和取樣時間。與接穗大小呈正相關(guān)，而無病毒植株獲得與接穗莖尖的大小呈負相關(guān)。莖尖分生組織小于0.2mm可以脫除多數(shù)病毒，春季取材嫁接的成活率高

5、于其他季節(jié)。（3）熱處理脫毒：通過熱處理可以由受病毒侵染的個體得到無病毒植株，其原理是利用病毒與植物的耐熱性不同，在高于常溫的環(huán)境下，植物組織中的病毒受熱后可被部分或全部鈍化或失去活性，而寄主植物組織很少或不會受到傷害?；蚋邷叵轮参锷L快，而病毒增殖慢而使植物新生部分不帶病毒。1.熱處理脫毒方法：可以通過溫湯浸漬或熱空氣處理法脫毒，前者對休眠芽效果較好，后者對活躍生長的莖尖效果較好。熱空氣處理即把旺盛生長的植物移入熱療室，在35-40℃下處理一定時間（幾分鐘到數(shù)周）熱處理后將莖尖切下嫁接于無病毒砧木或進行組織培養(yǎng)。熱處理溫度應(yīng)逐步升高，直到要求溫度。溫湯浸漬的材料常用50-55℃處理10-50

6、min或35℃溫水處理30-40min。2.熱處理脫毒條件：（1）溫度和持續(xù)時間：因病毒種類而異，有些33-34℃處理28-33d即可脫毒，而有些必須在39-42℃處理50-60d，耐熱桿狀病毒熱處理脫毒效果差。在植物的耐熱范圍內(nèi)，溫度越高，脫毒效果越好。一般采用35-38℃.尤其37℃恒溫處理30±2天為普遍。也可采用高低溫處理減少對植物的損傷。如馬鈴薯40℃（4h）+16-20℃（20h）。（2）濕度和光照：濕度以70-80%為適宜。光照以自然光最好。（3）前處理：27-35℃1-2周。（四）其他脫毒方法：花器官培養(yǎng)脫毒：由植物的花器官培養(yǎng)脫分化形成愈傷組織，然后再分化不定芽，可以獲得無毒

7、苗。如草莓花藥培養(yǎng)。2.珠心胚培養(yǎng)脫毒：柑橘類珠心胚與微管組織沒有聯(lián)系，一般不帶毒，可以利用珠心胚進行培養(yǎng)獲得。3.化學(xué)脫毒:采用病毒唑等試劑處理材料或添加到培養(yǎng)基中可以鈍化病毒，達到一定的脫毒效果。4.超低溫處理脫毒:經(jīng)過冷凍保護劑處理過的莖尖材料，采用液氮處理（-196℃）可以鈍化病毒，達到脫毒效果，該方法已在香蕉等果樹中成功應(yīng)用。5.合并熱處理、莖尖培養(yǎng)或微嫁接脫毒：采用多種方法同時處理可以