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1、金銀花中總黃酮超聲波提取工藝優(yōu)化 摘要：采用超聲波法提取了金銀花中的總黃酮，通過單因素試驗(yàn)研究了乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度、超聲時(shí)間、料液比和超聲頻率等因素對(duì)提取效率的影響。在此基礎(chǔ)上，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度、料液比和超聲時(shí)間進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，得出了總黃酮的最佳提取工藝參數(shù)：乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，超聲溫度為50℃，料液比為1∶25（g·mL1），超聲時(shí)間為2.0h，超聲功率為900W，最大提取率達(dá)到9.37%。關(guān)鍵詞：超聲波法；金銀花；總黃酮；正交試驗(yàn)中圖分類號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文
2、章編號(hào)：1674-9944（2013）10-0014-041引言金銀花為忍冬科多年生半常綠纏繞植物忍冬（LonicerajaponicaThumb.）、紅腺忍冬（L.hypoglaucamiq）、山銀花（L.con-fusaDC）或毛花柱忍冬（L.dasystyla9Rehd）的干燥花蕾或帶初開的花[1，2]。金銀花為臨床常用中藥，具有清熱解毒，涼散風(fēng)熱之功效，主治癰腫療瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)勢(shì)等[3～5]。而黃酮類化合物是金銀花的主要成分[6]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，黃酮類化合物具有
3、降低心肌耗氧量，使冠脈、腦血管流量增加、抗心律失常、軟化血管、降血糖、血脂等作用[7，8]。本文采用超聲波提取法對(duì)金銀花中的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行提取，通過單因素試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，研究金銀花中總黃酮的最佳提取工藝，為金銀花中有效成分的提取提供理論基礎(chǔ)。2材料與方法2.1主要儀器和設(shè)備UV-2550型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津）；FA1104N型電子天平（上海菁海）；FW-135型中草藥粉碎機(jī)（上海超億）；TG20-WS型離心機(jī)（鄭州宏朗）；HN-1000D型超聲波萃取儀（上海汗諾）；101-2AB型電熱鼓風(fēng)干
4、燥箱（天津市泰斯特）；60目的篩子。2.2主要材料和試劑金銀花（四川達(dá)州產(chǎn)）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（上海試劑二廠）；無水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水均為二次蒸餾水。2.3試驗(yàn)方法2.3.1對(duì)照品溶液的制備準(zhǔn)確稱取經(jīng)干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20.0mg，用適量體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇充分溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇定容至刻度，搖勻做對(duì)照品儲(chǔ)備試液。此試液中蘆丁的濃度為0.2mg/mL。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制9分別精確移取蘆丁對(duì)照品溶液0、10、20、40、60、8
5、0、100mL于7個(gè)25mL容量瓶中，分別向其中首先加入30%乙醇溶液至約125mL，再加入5%的NaNO2水溶液07mL，搖勻，放置6min，加入10%的Al（NO3）3水溶液07mL，搖勻，放置6min，后加入1mol·L-1的NaOH水溶液5mL混勻，最后用30%的乙醇定容至刻度，搖勻，放置10min。以第1瓶作空白對(duì)照，在最大吸收波長(zhǎng)510nm處測(cè)定吸光度，用最小二乘法得線性回歸方程[9～11]。233樣品中總黃酮的提取及測(cè)定將金銀花于40℃下恒溫干燥24h后，冷卻至室溫，然后用粉碎機(jī)粉碎（過
6、60目篩）。準(zhǔn)確稱取05g金銀花粉末，加入適量的30%乙醇進(jìn)行超聲提取，將提取液離心，取上層清液于25mL容量瓶中，重復(fù)多次，用30%乙醇定容至刻度，再精確移取其溶液5mL于25mL容量瓶中，按232章節(jié)中所述方法處理并測(cè)定其吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算提取液濃度，再按下式計(jì)算總黃酮提取率[12]。黃酮提取率（%）=C×V0×V1V2M×100其中：C表示標(biāo)準(zhǔn)曲線線形方程得提取液樣品的總黃酮的濃度（g/L1）；V0表示提取液定容后的體積（L）；V1表示量取提取液樣品測(cè)定定容的體積（L）；V2表示量取提取液
7、樣品測(cè)定的體積（L）；M表示所稱取的金銀花的質(zhì)量（g）。2.3.4金銀花總黃酮提取單因素試驗(yàn)9精確稱取金銀花粉末05g，利用超聲波法進(jìn)行提取，離心分離后，測(cè)定其吸光度，得到金銀花中總黃酮的提取率。試驗(yàn)中通過調(diào)整乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度、超聲時(shí)間、料液比和超聲頻率等因素來分析不同因素對(duì)總黃酮提取效率的影響[13～16]。2.3.5金銀花總黃酮提取正交試驗(yàn)根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果選用超聲功率900W固定的情況下，對(duì)其余4個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，L9（34）即三水平四因素模式。其中4個(gè)因素分別為乙醇體積分?jǐn)?shù)（A）、超聲
8、溫度（B）、料液比（C）和超聲時(shí)間（D）。以總黃酮提取率為指標(biāo)，進(jìn)行正交試驗(yàn)，其因素水平見表1。2.3.6工藝驗(yàn)證試驗(yàn)準(zhǔn)確稱取0.5g金銀花粉末，依據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果的最佳工藝條件，按本文的研究方法，提取金銀花中的總黃酮，平行實(shí)驗(yàn)3次，測(cè)定其吸光度，求得金銀花中總黃酮的提取率。3結(jié)果與討論3.1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制由圖1可知，用最小二乘法得線性回歸方程，吸光度與金銀花質(zhì)量濃度之間的關(guān)系為：Y=12307X+00035，r=09999。3.2單因素試驗(yàn)結(jié)果分析3
