細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)

《細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

生理科學(xué)進(jìn)展２０１４年第４５卷第５期·３７９·倡細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)１１１１，２，△李曉剛蘇楠杜曉蘭陳林１（第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)室，骨代謝與修復(fù)中心，創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；２康復(fù)理療科，重慶４０００４２）摘要細(xì)胞譜系示蹤（ｃｅｌｌｌｉｎｅａｇｅｔｒａｃｉｎｇ）是指利用各種方式標(biāo)記細(xì)胞，并對(duì)包括其后代所有細(xì)胞的增殖、分化以及遷移等活動(dòng)進(jìn)行追蹤觀察。自２０世紀(jì)以來(lái)，譜系示蹤技術(shù)為研究器官發(fā)育、組織損傷修復(fù)以及單細(xì)胞的分化命運(yùn)提供了重要的手段。近些年，隨著基因工程技術(shù)的飛速發(fā)展，細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)也有所突破，尤其是誘導(dǎo)性重組酶Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系統(tǒng)的應(yīng)用，極大地拓寬了細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)的應(yīng)用范圍。本文將結(jié)合細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)在多種研究中的應(yīng)用，對(duì)該技術(shù)的原理、特點(diǎn)以及最新進(jìn)展做一綜述。關(guān)鍵詞譜系示蹤；基因打靶；活體示蹤中圖分類號(hào)Ｑ３３；Ｒ３９４１１１１，２，△１CellLineageTracingＬＩＸｉａｏ-Ｇａｎｇ，ＳＵＮａｎ，ＤＵＸｉａｏ-Ｌａｎ，ＣＨＥＮＬｉｎ（StateKeyLaboratoryofTrauma，BurnsandCombinedInjury，CenterofBoneMetabolismandRepair，InstituteofSurgeryRe-２search；DepartmentofRehabilitationMedcine，DapingHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００４２，Ｃｈｉｎａ）AbstractＣｅｌｌｌｉｎｅａｇｅｔｒａｃｉｎｇｉｓｔｏｔｒａｃｋｃｅｒｔａｉｎｃｅｌｌａｎｄａｌｌｏｆｉｔｓｐｒｏｇｅｎｙ．Ｆｒｏｍｔｈｅ２０ｔｈｃｅｎｔｕｒｙ，ｌｉｎｅ-ａｇｅｔｒａｃｉｎｇｈａｓｐｒｏｖｉｄｅｄａｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｍｅｔｈｏｄｔｏｓｔｕｄｙｏｒｇａｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｔｉｓｓｕｅｒｅｐａｉｒｉａｅｄｃｅｌｌｆａｔｅ-ｄｅ-ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ｔｈｅｒａｐｉｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｇｅｎｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅａｐｐｌｉｃａ-ｔｉｏｎｏｆＣｒｅ／ｌｏｘｐｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅｓｙｓｔｅｍｅｘｐａｎｄｓｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｒａｎｇｅｏｆｌｉｎｅａｇｅｔｒａｃｉｎｇ．Ｈｅｒｅｗｅｄｉｓｃｕｓｓｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｉｎｅａｇｅｔｒａｃｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓ，ａｎｄｓｕｍｍａｒｉｚｅｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｒｅ-ｃｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｆｔｈｉｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Keywordsｌｉｎｅａｇｅｔｒａｃｉｎｇ；ｇｅｎｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ；ｉｎｖｉｖｏｃｅｌｌｔｒａｃｋｉｎｇ多細(xì)胞生物的生長(zhǎng)發(fā)育基于細(xì)胞分裂和分化。程，其根本是發(fā)育問(wèn)題。但細(xì)胞示蹤是一個(gè)較籠統(tǒng)在哺乳動(dòng)物的胚胎發(fā)育早期階段，每個(gè)細(xì)胞就已經(jīng)的概念，指標(biāo)記和追蹤細(xì)胞。被賦予了特定的分化潛能（ｃｅｌｌｔｏｔｉｐｏｔｅｎｃｙ），這種特對(duì)于細(xì)胞示蹤技術(shù)的探索起源于２０世紀(jì)初，早性在后期發(fā)育過(guò)程中才逐漸表現(xiàn)出來(lái)，最終分成為在１９０５年，Ｃｏｎｋｌｉｎ等利用了海鞘胚胎早期分裂球不同的組織、器官類型。另外一方面，某些終末分化著色差異的特性，對(duì)分裂球的分裂過(guò)程進(jìn)行觀察，的成體細(xì)胞在一定的生理或者病理?xiàng)l件下會(huì)發(fā)生去Ｗｅｔｗｅｌ等則應(yīng)用了慢速攝影（ｔｉｍｅ-ｌａｐｓｅｃｉｎｅｍａｔｏｇ-分化（ｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）或者轉(zhuǎn)分化（ｔｒａｎｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ-ｒａｐｈｙ）技術(shù)拍攝活體胚胎的發(fā)育。此后，研究者嘗ｔｉｏｎ），變?yōu)榱硗庖环N細(xì)胞或組織類型，例如腫瘤的試?yán)盟苄匀玖?、脂溶性染料、過(guò)氧化物酶以及熒［１］發(fā)生、心臟成纖維細(xì)胞再編程轉(zhuǎn)分化為心肌細(xì)胞光染料等，通過(guò)物理的方式注入到細(xì)胞內(nèi)對(duì)其進(jìn)行等現(xiàn)象。細(xì)胞的命運(yùn)決定是指單個(gè)細(xì)胞及其所有后標(biāo)記追蹤，盡管這些技術(shù)手段解決了當(dāng)時(shí)的一些問(wèn)代細(xì)胞的分化和發(fā)育活動(dòng)，對(duì)細(xì)胞的命運(yùn)決定進(jìn)行追蹤和觀察稱為細(xì)胞譜系示蹤。細(xì)胞譜系示蹤和廣倡國(guó)家重大科學(xué)計(jì)劃（９７３）（２０１４ＣＢ９４２９０４），國(guó)家自然科學(xué)義上的細(xì)胞示蹤（ｃｅｌｌｔｒａｃｋｉｎｇ）有本質(zhì)區(qū)別，細(xì)胞譜基金項(xiàng)目（８１２７００１２，８１１７０８０９）資助課題△系示蹤所要研究的問(wèn)題是一種細(xì)胞的命運(yùn)改變過(guò)通訊作者

1·３８０·生理科學(xué)進(jìn)展２０１４年第４５卷第５期題，然而在現(xiàn)在看來(lái)還存在許多缺陷。首先通過(guò)物較高能量激發(fā)光激發(fā)時(shí)發(fā)生構(gòu)象改變而引起。理的方法無(wú)法保證精準(zhǔn)地標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞；其次，在細(xì)熒光蛋白由于熒光信號(hào)強(qiáng)，便于觀察追蹤，現(xiàn)已胞的分裂過(guò)程中標(biāo)記染料會(huì)被逐漸稀釋直至消失，廣泛應(yīng)用示蹤研究中，其中最常用的熒光蛋白為綠傳統(tǒng)的標(biāo)記手段也無(wú)法有效的對(duì)單個(gè)細(xì)胞及其后代色熒光蛋白，盡管其熒光強(qiáng)度較紅色熒光蛋白稍弱，細(xì)胞進(jìn)行永久的標(biāo)記。但它對(duì)細(xì)胞毒性最小。另外，串聯(lián)型二聚體ｔｄＴｏｍａ-隨著基因工程技術(shù)的成熟，利用基因打靶技術(shù)ｔｏ也是一種常用的熒光蛋白，它是紅色熒光蛋白的的細(xì)胞譜系示蹤逐漸發(fā)展起來(lái)。首先，在示蹤標(biāo)記變異體，具有強(qiáng)于綠色熒光蛋白的熒光強(qiáng)度，并且能物的應(yīng)用方面，內(nèi)源性遺傳標(biāo)記物取代外源性標(biāo)記很快降解成單體減少對(duì)細(xì)胞毒性作用。然而，熒光物，該類標(biāo)記發(fā)生于基因水平，能夠克服傳統(tǒng)標(biāo)記物蛋白的局限在于熒光發(fā)光必須依賴于激發(fā)光，因此的局限和缺點(diǎn)；其次，在標(biāo)記的方式上也有很大突熒光信號(hào)極易受到周?chē)M織干擾。最近Ｓａｉｔｏ等人［４］破，由“宏觀”的物理標(biāo)記法逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)椤拔⒂^”的基研究了一種新型自主發(fā)光蛋白Ｎａｎｏ-ｌａｎｔｅｒｎ，這種因打靶標(biāo)記，這從根本上解決了物理標(biāo)記過(guò)程造成新型蛋白是由海腎熒光素酶和一種具有高效生物發(fā)細(xì)胞損傷以及隨著傳代標(biāo)記會(huì)被稀釋的問(wèn)題；最后，光共振能量轉(zhuǎn)移性的熒光蛋白融合而成，它能夠在在追蹤手段上，通過(guò)借助光學(xué)顯微鏡，可在活體內(nèi)對(duì)活動(dòng)小鼠體內(nèi)顯示清晰地顯示熒光信號(hào)，以觀察體細(xì)胞進(jìn)行追蹤和觀察。內(nèi)單細(xì)胞、或者特定組織器官的生理活動(dòng)情況。除一、細(xì)胞示蹤標(biāo)記方法及應(yīng)用此之外，利用Ｃｒｅ／Ｌｏｘｐ位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)構(gòu)建的［５］（一）遺傳性標(biāo)記物遺傳性標(biāo)記物是指由基雙熒光mT／mG小鼠也基于熒光蛋白的特性，它因編碼的可以穩(wěn)定遺傳的，并且其本身具有易識(shí)別能夠在Ｃｒｅ的作用下改變熒光顏色，從而提高了細(xì)性的標(biāo)志分子。除此之外，還具備無(wú)毒性、不影響細(xì)胞在組織內(nèi)分辨率。胞本身代謝和結(jié)構(gòu)的優(yōu)勢(shì)。３．β-半乳糖苷酶（β-ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ，β-ｇａｌ）：β-半１．熒光素酶：將熒光素酶基因整合入細(xì)胞，表達(dá)乳糖苷酶是ＬａｃＺ基因的表達(dá)產(chǎn)物，已廣泛應(yīng)用于基熒光素酶，通過(guò)控制底物，可以觀察到被標(biāo)記細(xì)胞發(fā)因表達(dá)調(diào)控研究。β-半乳糖苷酶可催化乳糖水解，光現(xiàn)象，波長(zhǎng)范圍在５００～７００ｎｍ，其發(fā)光本質(zhì)為酶用Ｘ-Ｇａｌ為底物進(jìn)行染色時(shí)呈藍(lán)色，這一特性使其催化底物的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。目前常用的熒光素酶有易于觀察和檢測(cè)。但是它最大的缺點(diǎn)為不能在活體北美螢火蟲(chóng)螢光素酶（Ｎｏｒｔｈａｍｅｒｉｃａｆｉｒｅｆｌｙｌｕｃｉｆｅｒ-內(nèi)觀察。［２］ａｓｅ）和海腎螢光素酶（ｒｅｎｉｌｌａｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ），熒光波綜上所述，遺傳性標(biāo)記物與以往傳統(tǒng)的細(xì)胞標(biāo)長(zhǎng)分別為５４０～６００ｎｍ和４６０～５４０ｎｍ。由熒光素酶記物最大的區(qū)別在于它不會(huì)向臨近細(xì)胞污染擴(kuò)散，催化底物發(fā)光的方式不需要激發(fā)光，光能來(lái)源于酶能夠穩(wěn)定的表達(dá)，并且隨著細(xì)胞的分裂，標(biāo)記也會(huì)遺催化反應(yīng)，因此發(fā)光只發(fā)生在活體細(xì)胞內(nèi)，它很大程傳給子代細(xì)胞。在研究中，除上述三種最常見(jiàn)遺傳度上避免了激發(fā)光造成的光噪現(xiàn)象。這種發(fā)光方式標(biāo)記物之外，還有很多其他類型遺傳標(biāo)記物，例如堿［６，７］具有一定的組織穿透性，Ｙｉ等在體外利用攜帶熒光性磷酸酶、ｃ-ｍｙｃ等。然而，不同的遺傳性標(biāo)記素酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染神經(jīng)祖細(xì)胞，之后移植到裸鼠物都有其各自的特點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)研究目的選擇合適的大腦內(nèi)，通過(guò)應(yīng)用熒光素酶底物結(jié)合成像設(shè)備觀標(biāo)記物，另外還需考慮標(biāo)記物對(duì)細(xì)胞本身的影響，研［３］察到神經(jīng)祖細(xì)胞向膠質(zhì)瘤的遷移活動(dòng)。然而，究的組織類型以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等因素。熒光素酶的缺點(diǎn)是其催化發(fā)光極易淬滅，同時(shí)底（二）標(biāo)記方式物也具有免疫原性，并且不適用于固定的標(biāo)本中１．轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)的應(yīng)用：轉(zhuǎn)染（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）發(fā)光。指真核細(xì)胞由于外源ＤＮＡ摻入而獲得新的遺傳標(biāo)２．熒光蛋白：最早的熒光蛋白由Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ等志的過(guò)程。外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法，包（１９６２）在Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ水母體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，隨后相繼括電擊法、磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導(dǎo)法以及病毒介導(dǎo)發(fā)現(xiàn)了３０多種波長(zhǎng)不同的熒光蛋白，包括綠色熒光法。Ｈｏｌｔ等（１９９０）利用脂質(zhì)體將熒光素酶ｃＤＮＡ轉(zhuǎn)蛋白、黃色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及橙色熒光蛋白染到爪蟾胚胎的腦神經(jīng)元中，觀察視網(wǎng)膜發(fā)育過(guò)程等。與熒光素酶催化底物發(fā)光的方式不同，熒光蛋中神經(jīng)元分化命運(yùn)。Ｉｔａｓａｋｉ等（１９９９）則運(yùn)用電轉(zhuǎn)的白不需要注射底物，發(fā)光的原理是自身蛋白構(gòu)象在方式將外源標(biāo)志基因轉(zhuǎn)入禽類胚胎中。盡管目前轉(zhuǎn)

2生理科學(xué)進(jìn)展２０１４年第４５卷第５期·３８１·染技術(shù)越來(lái)越成熟，但由于轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞傷害性較大，上更高。Ｃｒｅ重組酶由Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ等在Ｐ１噬菌體中會(huì)影響細(xì)胞正常的生長(zhǎng)發(fā)育，加之遺傳標(biāo)記在細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，是一種特異性重組酶，能夠介導(dǎo)由３４ｂｐ的內(nèi)表達(dá)效率及穩(wěn)定性等問(wèn)題，導(dǎo)致該種方式應(yīng)用“Ｌｏｘｐ”鉚定的基因序列特異性重組，完成對(duì)同向較少。“Ｌｏｘｐ”序列所鉚定基因片段的切除以及對(duì)向［１１，１２］運(yùn)用病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）是將外源基因整合“Ｌｏｘｐ”鉚釘基因的倒位。入目的細(xì)胞的另外一種方式。這種源于細(xì)菌遺傳學(xué)Ｊｏｙｎｅｒ等人最早將Ｃｒｅ／Ｌｏｘｐ系統(tǒng)應(yīng)用于體內(nèi)［１３，１４］的研究手段已經(jīng)應(yīng)用于哺乳動(dòng)物的細(xì)胞示蹤。Ｌｅ-細(xì)胞譜系示蹤研究。他們?cè)谘芯看竽X發(fā)育過(guò)ｍｉｓｃｈｋａ等在體外利用逆轉(zhuǎn)錄病毒將ｃ-ｍｙｃ基因轉(zhuǎn)程中構(gòu)建了兩種轉(zhuǎn)基因小鼠，一種是在β-ａｃｔｉｎ基因?qū)胄∈笤煅杉?xì)胞，然后將其注射給受大劑量射的啟動(dòng)子后插入標(biāo)志基因ＬａｃＺ，該標(biāo)志基因的表達(dá)線輻照的小鼠，進(jìn)而追蹤被標(biāo)記的外源造血干細(xì)胞被一段由同向“Ｌｏｘｐ”鉚釘?shù)摹埃樱裕希小毙蛄兴蓴_，［７］在體內(nèi)的活動(dòng)情況。然而這種傳統(tǒng)的逆轉(zhuǎn)錄病另外一種小鼠則是在Ｅｎｇｒａｉｌｅｄ２（Ｅｎ２）啟動(dòng)子后插毒轉(zhuǎn)導(dǎo)方式只能是在體外進(jìn)行操作。入Ｃｒｅ基因。當(dāng)這兩種轉(zhuǎn)基因品系的小鼠雜交后，ＲＣＡＳ（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ-ｃｏｍｐｅｔｅｎｔａｖｉａｎｓａｒｃｏｍａ-ｌｅｕ-表達(dá)Ｅｎ２的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生Ｃｒｅ酶，進(jìn)而切除“ＳＴＯＰ”序ｋｏｓｉｓｖｉｒｕｓｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔｗｉｔｈｓｐｌｉｃｅａｃｃｅｐｔｏｒ）系列，標(biāo)志基因ＬａｃＺ就能成功表達(dá)。利用該方法，統(tǒng)可以在體內(nèi)指定時(shí)間和特定部位控制逆轉(zhuǎn)錄病毒Ｊｏｙｎｅｒ等人證實(shí)了Ｅｎ２陽(yáng)性的細(xì)胞在小鼠中腦發(fā)育［１５］將外源基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，它的主要原理為Ｒｏｕｓ中的重要作用。此后，Ｓｏｒｉａｎｏ等構(gòu)建了在ＲＯ-ｓａｒｃｏｍａｖｉｒｕｓＡ（ＲＳＶ-Ａ）病毒只能感染表達(dá)禽類ＳＡ２６位點(diǎn)插入ＬａｃＺ報(bào)告基因的基因定點(diǎn)敲入?。裕郑潦荏w的細(xì)胞，通過(guò)控制病毒感染時(shí)間和應(yīng)用組鼠，該小鼠基于ＲＯＳＡβｇｅｏ２６基因捕獲（Ｇｅｎｅ-ｔｒａｐ）［８～１０］［１６］織特異性表達(dá)ＴＶＡ受體的小鼠品系，能夠?qū)崿F(xiàn)小鼠品系，定點(diǎn)敲入的ＬａｃＺ基因上游插入被同對(duì)轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)空特異性控制。目前，ＲＣＡＳ系統(tǒng)已經(jīng)成向“Ｌｏｘｐ”位點(diǎn)鉚釘“ＳＴＯＰ”序列，從而指示Ｃｒｅ表熟應(yīng)用于細(xì)胞示蹤研究，Ｄｏｅｔｓｃｈ等利用ＲＣＡＳ系統(tǒng)達(dá)。該小鼠與轉(zhuǎn)基因小鼠相比，敲入基因表達(dá)效率將堿性磷酸酶ＡＬＰ整合入小鼠大腦室下帶星形膠更高，并且不會(huì)干擾其他基因的正常表達(dá)。質(zhì)細(xì)胞內(nèi)作為標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)室下帶星形膠質(zhì)細(xì)胞在正與以往的細(xì)胞示蹤手段相比，Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系統(tǒng)的［６］常條件和損傷修復(fù)時(shí)均有神經(jīng)干細(xì)胞的特性。標(biāo)記方式具有良好的靶向性，只會(huì)在表達(dá)組織特異與轉(zhuǎn)染質(zhì)粒相比，逆轉(zhuǎn)錄病毒感染對(duì)細(xì)胞毒性小，但性啟動(dòng)子的細(xì)胞內(nèi)發(fā)生，很大程度上避免了錯(cuò)誤標(biāo)是它主要的問(wèn)題是只能標(biāo)記有分裂能力的細(xì)胞，另記的問(wèn)題。此外，Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系統(tǒng)最大的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)基外一方面，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體也會(huì)發(fā)生表達(dá)沉默的現(xiàn)因組進(jìn)行了修飾，具有遺傳特征，發(fā)育過(guò)程中表達(dá)過(guò)象，且實(shí)驗(yàn)操作難度較大。Ｃｒｅ的細(xì)胞以及其后代所有的細(xì)胞都會(huì)被永久地標(biāo)２．轉(zhuǎn)基因與基因打靶技術(shù)的應(yīng)用：基因打靶技記。然而，這一特點(diǎn)也導(dǎo)致無(wú)法對(duì)標(biāo)記時(shí)間進(jìn)行術(shù)是建立在胚胎干細(xì)胞技術(shù)和同源重組技術(shù)上的一控制。種定向改變活體生物遺傳信息的實(shí)驗(yàn)手段，它能使為了解決標(biāo)記時(shí)間特異性的問(wèn)題，Ｍｅｔｚｇｅｒ等在［１７］修飾后的遺傳信息在生物活體內(nèi)遺傳并且穩(wěn)定表Ｃｒｅ／Ｌｏｘｐ基礎(chǔ)上制作了一種新的小鼠模型，這種達(dá)。自上世紀(jì)８０年代第一例基因剔除小鼠產(chǎn)生以模型利用了雌激素受體為核受體的性質(zhì)，借此調(diào)控來(lái)，基因打靶技術(shù)發(fā)展迅速，給生命科學(xué)領(lǐng)域研究帶Ｃｒｅ入核的時(shí)間。該模型中的Ｃｒｅ與經(jīng)修飾的人類來(lái)革命性的變化。雌激素受體配體結(jié)合域融合在一起表達(dá)（Ｃｒｅ-Ｔ細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)需要體內(nèi)對(duì)特定的組織、細(xì)ＥＲ），該受體不結(jié)合雌二醇，對(duì)他莫昔芬（ｔａｍｏｘ-胞類型在特定的時(shí)間段進(jìn)行標(biāo)記，而基因打靶技術(shù)ｉｆｅｎ）有親和性。在沒(méi)有他莫西芬的狀況下，由于雌中的位點(diǎn)特異性重組酶（ｓｉｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ，激素受體停留在細(xì)胞質(zhì)中，導(dǎo)致Ｃｒｅ也無(wú)法進(jìn)入細(xì)ＳＳＲ）系統(tǒng)可以滿足這種需求。ＳＳＲ主要有兩個(gè)成胞核，只有在外源性他莫西芬的條件下，Ｃｒｅ才能伴員：來(lái)自埃希氏大腸桿菌噬菌體Ｐ１的Ｃｒｅ／Ｌｏｘｐ重隨雌激素受體進(jìn)入細(xì)胞核，實(shí)現(xiàn)對(duì)Ｌｏｘｐ片段的重組組酶系統(tǒng)和來(lái)自酵母的ＦＬＰ／ＦＲＴ系統(tǒng)。兩種系統(tǒng)修飾。因此，只要控制他莫西芬的注射時(shí)間就能實(shí)原理相似，都是在特異性位點(diǎn)切割和連接ＤＮＡ，然現(xiàn)對(duì)敲除事件進(jìn)行時(shí)間上的控制（圖１Ａ）。Ｂａｒｋｅｒ［１８，１９］而兩種系統(tǒng)相比以Ｃｒｅ／Ｌｏｘｐ重組酶系統(tǒng)重組效率等利用Ｌｇｒ５-ＥＧＦＰ-ｃｒｅＥＲＴ２基因敲入小鼠和

3·３８２·生理科學(xué)進(jìn)展２０１４年第４５卷第５期ＲＯＳＡ２６-ＬａｃＺ小鼠交配后（圖１Ｂ），在一定的時(shí)間段ＬｏｘＰ-ＳＴＯＰ-ＬｏｘＰ-ＥＹＦＰ報(bào)告小鼠交配后追蹤神經(jīng)膠內(nèi)注射他莫西芬，使在該時(shí)間段表達(dá)ｌｇｒ５的細(xì)胞被質(zhì)祖細(xì)胞。這種方法很大程度避免了Ｃｒｅ在目的細(xì)ＬａｃＺ永久標(biāo)記。通過(guò)觀察被標(biāo)記細(xì)胞的活動(dòng)情況，胞之外的組織表達(dá)的問(wèn)題，但是目前應(yīng)用還比較少，發(fā)現(xiàn)在６０天內(nèi)表達(dá)ＬａｃＺ的細(xì)胞會(huì)逐漸分化為各種有待進(jìn)一步地研究。類型的腸道上皮細(xì)胞，證明了Ｌｇｒ５基因特異性地在腸道上皮干細(xì)胞中表達(dá)，提示其為腸道干細(xì)胞的標(biāo)志基因。圖2Ｓｐｌｉｔ-Ｃｒｅ示意圖（修改自Ｈｉｒｒｌｉｎｇｅｒ等，ＰＬｏＳＯｎｅ，２００９，４瞷ｅ４２８６）３．復(fù)合式標(biāo)記：相比單一標(biāo)記的基因報(bào)告小鼠，復(fù)合式標(biāo)記方式能更好地指示目的細(xì)胞的位置。最早的復(fù)合式標(biāo)記小鼠包括Ｚ／ＡＰ和Ｚ／ＥＧ，兩者都是基于Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系統(tǒng)建立的。Ｚ／ＡＰ小鼠中由于“Ｌｏｘｐ”鉚釘?shù)摩拢纾澹锘蚋蓴_其后的ＡＬＰ表達(dá)，因此在表達(dá)活性Ｃｒｅ之前所有細(xì)胞呈ＬａｃＺ染色陽(yáng)性，而經(jīng)重組修飾后β半乳糖苷酶停止表達(dá)，目的細(xì)胞［２１］轉(zhuǎn)變?yōu)楸磉_(dá)ＡＬＰ。Ｚ／ＡＰ小鼠的局限在于陽(yáng)性細(xì)胞不能用于流式細(xì)胞檢測(cè)，并且兩種標(biāo)記方式都只能通過(guò)切片染色方式觀察。原理與Ｚ／ＡＰ小鼠相［２２］似，Ｚ／ＥＧ小鼠是由ＬａｃＺ與ＥＧＦＰ組成，它的優(yōu)點(diǎn)在于能夠在活體組織中觀察ＥＧＦＰ熒光，因此更［５］容易追蹤被標(biāo)記的細(xì)胞。雙熒光蛋白mT／mG小鼠是另外一種復(fù)合式標(biāo)記小鼠，在Ｃｒｅ介導(dǎo)重組修飾后，mT／mG小鼠由表達(dá)ｔｄＴｏｍａｔｏ轉(zhuǎn)變?yōu)椋牛牵疲校詧D1Ｃｒｅ-ＥＲ原理及應(yīng)用（圖３）。除此之外，該小鼠所表達(dá)的ｔｄＴｏｍａｔｏ及（修改自Ｂａｒｋｅｒ等．Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４４９瞷１００３～１００７）ＥＧＦＰ都具有細(xì)胞膜靶向性，因此，該小鼠能在激發(fā)光條件下以不同于未標(biāo)記細(xì)胞的熒光顏色顯示被標(biāo)綜上所述，Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系統(tǒng)已經(jīng)成為條件性基因記細(xì)胞，極大地提高了觀察分辨率。Ｂｏｗｍａｎ等利調(diào)控的較理想工具，并且已經(jīng)成熟地應(yīng)用于細(xì)胞示用Ｒｏｓａ２６-ｍＴ／ｍＧ小鼠與Ａｘｉｎ２ＣｒｅＥＲＴ２小鼠證明蹤研究。然而，并不是所有的啟動(dòng)子都能特異性地了Ｗｎｔ／β-ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)通路在整個(gè)發(fā)育過(guò)程中對(duì)神表達(dá)于單一類型的細(xì)胞，示蹤研究中用來(lái)驅(qū)動(dòng)Ｃｒｅ［２３］經(jīng)干細(xì)胞功能及穩(wěn)態(tài)的重要作用。多熒光標(biāo)記表達(dá)的啟動(dòng)子往往會(huì)同時(shí)表達(dá)于多種細(xì)胞或者組織［２４］系統(tǒng)“Ｂｒａｉｎｂｏｗ”是應(yīng)用于斑馬魚(yú)的復(fù)合式標(biāo)記類型，這樣就不利于研究特定細(xì)胞的活動(dòng)。Ｈｉｒ-系統(tǒng)，它能使體內(nèi)不同細(xì)胞顯示不同顏色的熒光信［２０］ｒｌｉｎｇｅｒ等設(shè)計(jì)了“Ｓｐｌｉｔ-ｃｒｅ”系統(tǒng)，在這種系統(tǒng)中號(hào)，Ｐａｎ等發(fā)現(xiàn)在“Ｂｒａｉｎｂｏｗ”系統(tǒng)內(nèi)各種細(xì)胞由于Ｃｒｅ被分做Ｃ端和Ｎ端兩部分，兩者分別由兩種不不同熒光蛋白疊加所產(chǎn)生的多種熒光顏色可以隨著同的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)，當(dāng)兩者同時(shí)出現(xiàn)在同一種細(xì)細(xì)胞傳代而穩(wěn)定遺傳。胞時(shí)，才會(huì)形成有功能的Ｃｒｅ（圖２）。以此為基礎(chǔ)，綜上所述，復(fù)合式標(biāo)記系統(tǒng)極大地提高了被標(biāo)研究者利用神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（gfap）和髓鞘記細(xì)胞的辨識(shí)度，尤其是結(jié)合于影像學(xué)技術(shù)，例如單蛋白脂蛋白１（plp１）啟動(dòng)子分別驅(qū)動(dòng)Ｃｒｅ酶的Ｃ端光子顯微鏡、雙光子顯微鏡及ＩＶＩＳ等設(shè)備時(shí)可以滿和Ｎ端表達(dá)，通過(guò)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠，與ＲＯＳＡ２６-足活體細(xì)胞示蹤的需要。

4生理科學(xué)進(jìn)展２０１４年第４５卷第５期·３８３·有組織穿透力強(qiáng)、熒光信噪比高以及光毒性小等優(yōu)［２８］點(diǎn)。在最初階段，雙光子顯微鏡的應(yīng)用主要集中于斑馬魚(yú)等體型較小、透光性好的動(dòng)物中。另外對(duì)于觀察的組織類型，其在軟組織中成像效果明顯優(yōu)于骨骼等硬組織，這主要是因?yàn)殡p光子顯微鏡穿透深度的限制。隨著技術(shù)設(shè)備的提高，雙光子顯微鏡已經(jīng)能夠用于哺乳動(dòng)物硬組織的研究。最近，Ｋｉｋｕ-ｔａ等人通過(guò)將ＧＦＰ定點(diǎn)基因敲入作為破骨細(xì)胞特異性內(nèi)源性標(biāo)記物，之后利用雙光子顯微鏡直觀地觀察了活體小鼠顱骨骨髓腔中ＲＡＮＫＬ以及Ｔｈ１７［２９］細(xì)胞對(duì)破骨細(xì)胞的調(diào)控作用，為“骨骼動(dòng)態(tài)組織圖3mT／mG復(fù)合式標(biāo)記系統(tǒng)［３０］學(xué)”研究奠定了一定的基礎(chǔ)。綜上所述，雙光子（修改自Ｍｕｚｕｍｄａｒ等，Ｇｅｎｅｓｉｓ，２００７，４５瞷５９３～６０５）顯微鏡系統(tǒng)更著重于精確地顯示局部單個(gè)或者極少數(shù)細(xì)胞細(xì)微的活動(dòng)狀態(tài)，而不能顯示細(xì)胞在整體水（三）內(nèi)源性標(biāo)記的活體示蹤內(nèi)源性標(biāo)記的平大范圍的活動(dòng)情況?；铙w示蹤相比外源性標(biāo)記示蹤更能闡明細(xì)胞在體內(nèi)二、結(jié)語(yǔ)與展望真實(shí)的分化發(fā)育及遷移情況。近些年來(lái)，分子影像細(xì)胞譜系示蹤所關(guān)注的問(wèn)題是細(xì)胞及其所有后學(xué)（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｍａｇｉｎｇ）的發(fā)展為活體細(xì)胞示蹤開(kāi)辟代細(xì)胞分化發(fā)育的最終命運(yùn)及遷移活動(dòng)。在研究對(duì)了新的途徑。利用內(nèi)源性遺傳標(biāo)記物的光學(xué)特性結(jié)象上，細(xì)胞譜系示蹤早期大多以低等動(dòng)物例如海鞘、合分子影像學(xué)技術(shù)手段可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目的細(xì)胞在活體果蠅，斑馬魚(yú)等為主，但隨著技術(shù)的進(jìn)步研究逐漸向內(nèi)進(jìn)行可視化實(shí)時(shí)性追蹤。ＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ成像系統(tǒng)哺乳動(dòng)物之類的高等動(dòng)物轉(zhuǎn)變；在研究方法上，基因和雙光子顯微鏡（ｔｗｏ-ｐｈｏｔｏｎｅｘｃｉｔａｔｉｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）打靶技術(shù)已成為細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)有力的工具，尤是近些年發(fā)展的應(yīng)用于小動(dòng)物活體示蹤研究的成像其是各種基因工程小鼠為細(xì)胞譜系示蹤研究提供了系統(tǒng)。良好模型，另外ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)也有望應(yīng)用于細(xì)ＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ成像系統(tǒng)可用于小動(dòng)物長(zhǎng)期觀胞譜系示蹤研究。然而，在觀測(cè)手段上目前大多數(shù)測(cè)，具有功能性光學(xué)成像和結(jié)構(gòu)性ＣＴ成像功能。的細(xì)胞譜系示蹤局限于傳統(tǒng)的組織形態(tài)學(xué)技術(shù)，不它能夠檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)生物發(fā)光及熒光，結(jié)合ＣＴ掃能觀察細(xì)胞在活體內(nèi)真實(shí)的活動(dòng)情況。因此，借助描，最終以３Ｄ圖形的方式顯示目的細(xì)胞在體內(nèi)活于先進(jìn)光學(xué)設(shè)備的活體細(xì)胞譜系示蹤體現(xiàn)了極大的動(dòng)狀態(tài)。ＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ系統(tǒng)最早常應(yīng)用于腫瘤發(fā)優(yōu)勢(shì)，它允許在活體內(nèi)連續(xù)地對(duì)標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)［２５，２６］生、發(fā)展及治療的研究，通常的實(shí)驗(yàn)方法是在追蹤觀察。體外利用熒光素酶標(biāo)記腫瘤細(xì)胞系，再移植入裸鼠綜上所述，細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)為探究正常發(fā)育、體內(nèi)，利用ＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ系統(tǒng)觀察腫瘤細(xì)胞的活疾病發(fā)生及損傷修復(fù)過(guò)程中細(xì)胞的來(lái)源問(wèn)題提供了動(dòng)。與熒光素酶相比，大多數(shù)熒光蛋白光波長(zhǎng)都低更加直觀有力的研究方法和科學(xué)的研究手段，尤其于６００ｎｍ，位于３５０ｎｍ～５５０ｎｍ之間，因此極易被組是借助于雙光子顯微鏡等先進(jìn)光學(xué)設(shè)備的活體細(xì)胞織吸收，不利于ＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ系統(tǒng)檢測(cè)。Ｋａｔｕｓｈ-譜系示蹤，結(jié)合單細(xì)胞基因組學(xué)等領(lǐng)域?qū)⒂型_(kāi)啟［２７］ｋａ是一種遠(yuǎn)紅光熒光蛋白，其熒光波長(zhǎng)大于發(fā)育生物學(xué)及疾病機(jī)制研究的新篇章。６００ｎｍ，當(dāng)利用Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系統(tǒng)將Ｋａｔｕｓｈｋａ作為目的細(xì)胞內(nèi)源性標(biāo)記時(shí)，可以利用ＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ系統(tǒng)進(jìn)參考文獻(xiàn)行活體檢測(cè)。ＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ成像系統(tǒng)適用于小動(dòng)物整體水平的示蹤研究，能較好地顯示目的細(xì)胞在體１ＱｉａｎＬ，ＨｕａｎｇＹ，ＳｐｅｎｃｅｒＣＩ，ｅｔａｌ．Ｉｎｖｉｖｏｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇｏｆ內(nèi)所處的解剖位置。然而，它對(duì)于單個(gè)細(xì)胞具體的ｍｕｒｉｎｅｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎｔｏｉｎｄｕｃｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ．Ｎａ-活動(dòng)狀態(tài)不能精確顯示，例如細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量與運(yùn)ｔｕｒｅ，２０１２，４８５瞷５９３～５９８．動(dòng)等。２ＭｃＣａｆｆｒｅｙＡ，ＫａｙＭＡ，ＣｏｎｔａｇＣＨ．Ａｄｖａｎｃｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌａｒ雙光子激發(fā)顯微鏡與普通激光顯微鏡相比，具ｔｈｅｒａｐｉｅｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｖｉｖｏｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｉｍａｇｉｎｇ．ＭｏｌＩｍａ-

5·３８４·生理科學(xué)進(jìn)展２０１４年第４５卷第５期ｇｉｎｇ，２００３，２瞷７５～８６．ＳｃｉＵＳＡ，１９９７，９４瞷３７８９～３７９４．３ＴａｎｇＹ，ＳｈａｈＫ，ＭｅｓｓｅｒｌｉＳＭ，ｅｔａｌ．Ｉｎｖｉｖｏｔｒａｃｋｉｎｇｏｆ１７ＭｅｔｚｇｅｒＤ，ＣｈａｍｂｏｎＰ．Ｓｉｔｅ-ａｎｄｔｉｍｅ-ｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｔａｒｇｅ-ｎｅｕｒａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｔｏｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ．ＨｕｍＧｅｎｅｔｉｎｇｉｎｔｈｅｍｏｕｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２４瞷７１～８０．Ｔｈｅｒ，２００３，１４瞷１２４７～１２５４．１８ＢａｒｋｅｒＮ，ＨｕｃｈＭ，ＫｕｊａｌａＰ，ｅｔａｌ．Ｌｇｒ５（＋ｖｅ）ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ４ＳａｉｔｏＫ，ＣｈａｎｇＹＦ，ＨｏｒｉｋａｗａＫ，ｅｔａｌ．Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｐｒｏ-ｄｒｉｖｅｓｅｌｆ-ｒｅｎｅｗａｌｉｎｔｈｅｓｔｏｍａｃｈａｎｄｂｕｉｌｄｌｏｎｇ-ｌｉｖｅｄｇａｓ-ｔｅｉｎｓｆｏｒｈｉｇｈ-ｓｐｅｅｄｓｉｎｇｌｅ-ｃｅｌｌａｎｄｗｈｏｌｅ-ｂｏｄｙｉｍａｇｉｎｇ．Ｎａｔｔｒｉｃｕｎｉｔｓｉｎｖｉｔｒｏ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ，２０１０，６瞷２５～３６．Ｃｏｍｍｕｎ，２０１２，３瞷１２６２．１９ＢａｒｋｅｒＮ，ｖａｎＥｓＪＨ，ＫｕｉｐｅｒｓＪ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ５ＭｕｚｕｍｄａｒＭＤ，ＴａｓｉｃＢ，ＭｉｙａｍｉｃｈｉＫ，ｅｔａｌ．Ａｇｌｏｂａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅａｎｄｃｏｌｏｎｂｙｍａｒｋｅｒｇｅｎｅｄｏｕｂｌｅ-ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＣｒｅｒｅｐｏｒｔｅｒｍｏｕｓｅ．Ｇｅｎｅｓｉｓ，２００７，４５瞷Ｌｇｒ５．Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４４９瞷１００３～１００７．５９３～６０５．２０ＨｉｒｒｌｉｎｇｅｒＪ，ＳｃｈｅｌｌｅｒＡ，ＨｉｒｒｌｉｎｇｅｒＰＧ，ｅｔａｌ．Ｓｐｌｉｔ-ｃｒｅ６ＤｏｅｔｓｃｈＦ，ＣａｉｌｌｅＩ，ＬｉｍＤＡ，ｅｔａｌ．Ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｚｏｎｅａｓ-ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｄｉｃａｔｅｓｃｏｉｎｃｉｄｅｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒｏｃｙｔｅｓａｒｅｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅａｄｕｌｔｍａｍｍａｌｉａｎｂｒａｉｎ．ｇｅｎｅｓｉｎｖｉｖｏ．ＰＬｏＳＯｎｅ，２００９，４瞷４２８６．Ｃｅｌｌ，１９９９，９７瞷７０３～７１６．２１ＬｏｂｅＣＧ，ＫｏｏｐＫＥ，ＫｒｅｐｐｎｅｒＷ，ｅｔａｌ．Ｚ／ＡＰ，ａｄｏｕｂｌｅ７ＬｅｍｉｓｃｈｋａＩＲ，ＲａｕｌｅｔＤＨ，ＭｕｌｌｉｇａｎＲＣ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｐｏ-ｒｅｐｏｒｔｅｒｆｏｒｃｒｅ-ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ．ＤｅｖＢｉｏｌ，１９９９，ｔｅｎｔｉａｌａｎｄｄｙｎａｍｉｃｂｅｈａｖｉｏｒｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．２０８瞷２８１～２９２．Ｃｅｌｌ，１９８６，４５瞷９１７～９２７．２２ＮｏｖａｋＡ，ＧｕｏＣ，ＹａｎｇＷ，ｅｔａｌ．Ｚ／ＥＧ，ａｄｏｕｂｌｅｒｅｐｏｒｔｅｒ８ＨｕｇｈｅｓＳＨ，ＧｒｅｅｎｈｏｕｓｅＪＪ，ＰｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓＣＪ，ｅｔａｌ．Ａｄａｐｔｏｒｍｏｕｓｅｌｉｎｅｔｈａｔｅｘｐｒｅｓｓｅｓｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏ-ｐｌａｓｍｉｄｓｓｉｍｐｌｉｆｙｔｈｅｉｎｓｅｒｔｉｏｎｏｆｆｏｒｅｉｇｎＤＮＡｉｎｔｏｈｅｌｐｅｒ-ｔｅｉｎｕｐｏｎＣｒｅ-ｍｅｄｉａｔｅｄｅｘｃｉｓｉｏｎ．Ｇｅｎｅｓｉｓ，２０００，２８瞷ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｓ．ＪＶｉｒｏｌ，１９８７，６１瞷３００４～１４７～１５５．３０１２．２３ＢｏｗｍａｎＡＮ，ｖａｎＡｍｅｒｏｎｇｅｎＲ，ＰａｌｍｅｒＴＤ，ｅｔａｌ．Ｌｉｎｅ-９ＶｏｎＷｅｒｄｅｒＡ，ＳｅｉｄｌｅｒＢ，ＳｃｈｍｉｄＲＭ，ｅｔａｌ．ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｇｅｔｒａｃｉｎｇｗｉｔｈＡｘｉｎ２ｒｅｖｅａｌｓｄｉｓｔｉｎｃｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌａｎｄａ-ａｖｉａｎｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓａｎｄｔｉｓｓｕｅ-ｓｐｅｃｉｆｉｃｓｏｍａｔｉｃｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｇｅｎｅｄｕｌｔｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｏｆＷｎｔ／ｂｅｔａ-ｃａｔｅｎｉｎ-ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｕｒａｌｔｒａｎｓｆｅｒｉｎｖｉｖｏｕｓｉｎｇｔｈｅＲＣＡＳ／ＴＶＡｓｙｓｔｅｍ．ＮａｔＰｒｏｔｏｃ，ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２０１３，１１０瞷７３２４～２０１２，７瞷１１６７～１１８３．７３２９．１０ＰｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓＣＪ，ＨｕｇｈｅｓＳＨ．Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ-ｃｏｍｐｅｔｅｎｔｒｅｔｒｏ-２４ＬｉｖｅｔＪ，ＷｅｉｓｓｍａｎＴＡ，ＫａｎｇＨ，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｓｆｏｒｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｅｎｅｃａｓ-ｆｏｒｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｈｅｓｅｔｔｅｓｉｎａｖｉａｎｃｅｌｌｓ．ＪＶｉｒｏｌ，１９９１，６５瞷３７２８～３７３７．ｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ．Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４５０瞷５６～６２．１１ＳｔｅｒｎｂｅｒｇＮ，ＨａｍｉｌｔｏｎＤ．ＢａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅＰ１ｓｉｔｅ-ｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅ-２５ＫｉｍＪＢ，ＵｒｂａｎＫ，ＣｏｃｈｒａｎＥ，ｅｔａｌ．Ｎｏｎ-ｉｎｖａｓｉｖｅｄｅｔｅｃ-ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ．Ｉ．ＲｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｌｏｘＰｓｉｔｅｓ．ＪＭｏｌｔｉｏｎｏｆａｓｍａｌｌｎｕｍｂｅｒｏｆｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｉｎｖｉ-Ｂｉｏｌ，１９８１，１５０瞷４６７～４８６．ｖｏ．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１０，５瞷９３６４．１２ＮａｇｙＡ．Ｃｒｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ：ｔｈｅｕｎｉｖｅｒｓａｌｒｅａｇｅｎｔｆｏｒｇｅｎｏｍｅ２６ＬｉｍＥ，ＭｏｄｉＫＤ，ＫｉｍＪ．Ｉｎｖｉｖｏｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｉｍａｇｉｎｇｏｆｔａｉｌｏｒｉｎｇ．Ｇｅｎｅｓｉｓ，２０００，２６瞷９９～１０９．ｍａｍｍａｒｙｔｕｍｏｒｓｕｓｉｎｇＩＶＩＳｓｐｅｃｔｒｕｍ．ＪＶｉｓＥｘｐ，２００９，１３ＳｏｎｇＤＬ，ＣｈａｌｅｐａｋｉｓＧ，ＧｒｕｓｓＰ，ｅｔａｌ．ＴｗｏＰａｘ-ｂｉｎｄｉｎｇＡｐｒ２９；（２６）．ｐｉｉ：１２１０．ｄｏｉ：１０．３７９１／１２１０．ｓｉｔｅｓａｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｅａｒｌｙｅｍｂｒｙｏｎｉｃｂｒａｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎ２７Ｄｉｅｇｕｅｚ-ＨｕｒｔａｄｏＲ，ＭａｒｔｉｎＪ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ-ＣｏｒｒａｌＩ，ｅｔａｌ．ＡＥｎｇｒａｉｌｅｄ-２ｔｒａｎｓｇｅｎｅ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９６，１２２瞷６２７～Ｃｒｅ-ｒｅｐｏｒｔｅｒｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｏｕｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｆａｒ-ｒｅｄｆｌｕｏ-６３５．ｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎＫａｔｕｓｈｋａ．Ｇｅｎｅｓｉｓ，２０１１，４９瞷３６～４５．１４ＺｉｎｙｋＤＬ，ＭｅｒｃｅｒＥＨ，ＨａｒｒｉｓＥ，ｅｔａｌ．Ｆａｔｅｍａｐｐｉｎｇｏｆｔｈｅ２８ＢｅｗｅｒｓｄｏｒｆＪ，ＰｉｃｋＲ，ＨｅｌｌＳＷ．Ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎｍｉ-ｍｏｕｓｅｍｉｄｂｒａｉｎ-ｈｉｎｄｂｒａｉｎｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎｕｓｉｎｇａｓｉｔｅ-ｓｐｅｃｉｆｉｃｃｒｏｓｃｏｐｙ．ＯｐｔＬｅｔｔ，１９９８，２３瞷６５５～６５７．ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＣｕｒｒＢｉｏｌ，１９９８，８瞷６６５～６６８．２９ＫｉｋｕｔａＪ，ＷａｄａＹ，ＫｏｗａｄａＴ，ｅｔａｌ．Ｄｙｎａｍｉｃｖｉｓｕａｌｉｚａ-１５ＳｏｒｉａｎｏＰ．ＧｅｎｅｒａｌｉｚｅｄｌａｃＺｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅＲＯＳＡ２６ｔｉｏｎｏｆＲＡＮＫＬａｎｄＴｈ１７-ｍｅｄｉａｔｅｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＪＣｒｅｒｅｐｏｒｔｅｒｓｔｒａｉｎ．ＮａｔＧｅｎｅｔ，１９９９，２１瞷７０～７１．ＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２０１３，１２３瞷８６６～８７３．１６ＺａｍｂｒｏｗｉｃｚＢＰ，ＩｍａｍｏｔｏＡ，ＦｉｅｒｉｎｇＳ，ｅｔａｌ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｏｆ３０ＩｓｈｉｉＭ，ＦｕｊｉｍｏｒｉＳ，ＫａｎｅｋｏＴ，ｅｔａｌ．Ｄｙｎａｍｉｃｌｉｖｅｉｍａ-ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓｉｎｔｈｅＲＯＳＡｂｅｔａｇｅｏ２６ｇｅｎｅｔｒａｐｇｉｎｇｏｆｂｏｎｅ：ｏｐｅｎｉｎｇａｎｅｗｅｒａｗｉｔｈ＇ｂｏｎｅｈｉｓｔｏｄｙｎａｍｅｔｒｙ＇．ｓｔｒａｉｎｌｅａｄｓｔｏｗｉｄｅｓｐｒｅａｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｅｔａ-ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅＪＢｏｎｅＭｉｎｅｒＭｅｔａｂ，２０１３，３１瞷５０７～５１１．ｉｎｍｏｕｓｅｅｍｂｒｙｏｓａｎｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄ

6細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)作者：李曉剛，蘇楠，杜曉蘭，陳林，LIXiao-Gang，SUNan，DUXiao-Lan，CHENLin作者單位：李曉剛,蘇楠,杜曉蘭,LIXiao-Gang,SUNan,DUXiao-Lan(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)室，骨代謝與修復(fù)中心，創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)，陳林,CHENLin(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)室，骨代謝與修復(fù)中心，創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院康復(fù)理療科，重慶400042)刊名：生理科學(xué)進(jìn)展英文刊名：ProgressinPhysiologicalSciences年，卷(期)：2014(5)參考文獻(xiàn)(30條)1.QianL;HuangY;SpencerCIInvivoreprogrammingofmurinecardiacfibroblastsintoinducedcardiomyocytes20122.McCaffreyA;KayMA;ContagCHAdvancingmoleculartherapiesthroughinvivobioluminescentimaging20033.TangY;ShahK;MesserliSMInvivotrackingofneuralprogenitorcellmigrationtoglioblastomas20034.SaitoK;ChangYF;HorikawaKLuminescentpro-teinsforhigh-speedsingle-cellandwhole-bodyimaging20125.MuzumdarMD;TasicB;MiyamichiKAglobaldouble-fluorescentCrereportermouse20076.DoetschF;CailleI;LimDASubventricularzoneas-trocytesareneuralstemcellsintheadultmammalianbrain19997.LemischkaIR;RauletDH;MulliganRCDevelopmentalpo-tentialanddynamicbehaviorofhematopoieticstemcells19868.HughesSH;GreenhouseJJ;PetropoulosCJAdaptorplasmidssimplifytheinsertionofforeignDNAintohelper-independentretroviralvectors19879.VonWerderA;SeidlerB;SchmidRMProductionofavianretrovirusesandtissue-specificsomaticretroviralgenetransferinvivousingtheRCAS/TVAsystem201210.PetropoulosCJ;HughesSHReplication-competentretro-virusvectorsforthetransferandexpressionofgenecas-settesinaviancells199111.SternbergN;HamiltonDBacteriophageP1site-specificre-combination.I.RecombinationbetweenloxPsites198112.NagyACrerecombinase:theuniversalreagentforgenometailoring200013.SongDL;ChalepakisG;GrussPTwoPax-bindingsitesarerequiredforearlyembryonicbrainexpressionofanEngrailed-2transgene199614.ZinykDL;MercerEH;HarrisEFatemappingofthemousemidbrain-hindbrainconstrictionusingasite-specificrecombinationsystem199815.SorianoPGeneralizedlacZexpressionwiththeROSA26Crereporterstrain199916.ZambrowiczBP;ImamotoA;FieringSDisruptionofoverlappingtranscriptsintheROSAbetageo26genetrapstrainleadstowidespreadexpressionofbeta-galactosidaseinmouseembryosandhematopoieticcells1997

717.MetzgerD;ChambonPSite-andtime-specificgenetarge-tinginthemouse200118.BarkerN;HuchM;KujalaPLgr5(+ve)stemcellsdriveself-renewalinthestomachandbuildlong-livedgas-tricunitsinvitro201019.BarkerN;vanEsJH;KuipersJIdentificationofstemcellsinsmallintestineandcolonbymarkergeneLgr5200720.HirrlingerJ;SchellerA;HirrlingerPGSplit-crecomplementationindicatescoincidentactivityofdifferentgenesinvivo200921.LobeCG;KoopKE;KreppnerWZ/AP,adoublereporterforcre-mediatedrecombination199922.NovakA;GuoC;YangWZ/EG,adoublereportermouselinethatexpressesenhancedgreenfluorescentpro-teinuponCre-mediatedexcision200023.BowmanAN;vanAmerongenR;PalmerTDLine-agetracingwithAxin2revealsdistinctdevelopmentalanda-dultpopulationsofWnt/beta-catenin-responsiveneuralstemcells201324.LivetJ;WeissmanTA;KangHTransgenicstrategiesforcombinatorialexpressionoffluorescentproteinsinthenervoussystem200725.KimJB;UrbanK;CochranENon-invasivedetec-tionofasmallnumberofbioluminescentcancercellsinvi-vo201026.LimE;ModiKD;KimJInvivobioluminescentimagingofmammarytumorsusingIVISspectrum2009(26)27.Dieguez-HurtadoR;MartinJ;Martinez-CorralIACre-reportertransgenicmouseexpressingthefar-redfluo-rescentproteinKatushka201128.BewersdorfJ;PickR;HellSWMultifocalmultiphotonmi-croscopy199829.KikutaJ;WadaY;KowadaTDynamicvisualiza-tionofRANKLandTh17-mediatedosteoclastfunction201330.IshiiM;FujimoriS;KanekoTDynamicliveima-gingofbone:openinganewerawith'bonehistodynametry'2013引用本文格式：李曉剛.蘇楠.杜曉蘭.陳林.LIXiao-Gang.SUNan.DUXiao-Lan.CHENLin細(xì)胞譜系示蹤技術(shù)[期刊論文]-生理科學(xué)進(jìn)展2014(5)