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1、感染性疾病實驗室診斷LaboratoryDiagnosisofInfectiousDiseases目的要求1．掌握感染性疾病常用的實驗室檢測項目及其臨床意義和評價2．熟悉引起血流、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、胃腸道、泌尿系統(tǒng)感染的常見病原體與常見疾病及病原學檢查3．了解當今感染病的特點、感染類型第一節(jié)概述感染性疾?。翰≡w宿主疾病病原體（細菌、真菌、病毒、寄生蟲）一、當今感染病的特點1感染性病原體的種類不斷發(fā)生變遷2宿主的免疫防御能力下降3內(nèi)源性感染與條件致病菌的感染增加二、感染類型（一）按病原體分類1
2、.傳統(tǒng)病原體感染細菌：病毒：真菌：寄生蟲2.新發(fā)病原體：SARS冠狀病毒新甲型H1N1流感病毒高致病性禽流感病毒(二）按疾病特征分類1.病原體被清除2.隱性感染(covertinfection)，亦稱亞臨床感染一般占人群的90％或以上3.顯性感染(overtinfection)又稱為臨床感染發(fā)病快慢和病程長短：急性感染和慢性感染感染部位及性質(zhì)：局部感染和全身感染全身感染：①菌血癥②敗血癥③毒血癥④膿毒血癥(三）按病原體來源外源性感染內(nèi)源性感染三、感染性疾病的實驗診斷（一）一般實驗檢測WBC常規(guī)檢查C
3、-反應蛋白（CRP）血清降鈣素原（PCT）器官功能改變的檢測（二）病原學實驗診斷臨床病原體檢查目的明確感染病原體指導治療，預防，判斷預后第二節(jié)感染性疾病的常用病原學檢測病原學檢測基本程序①正確、規(guī)范采集和運送標本②顯微鏡對標本或組織中的病原體的形態(tài)學檢查③病原體的分離培養(yǎng)和鑒定④用免疫學技術(shù)對病原體抗原或相應抗體的檢測⑤用分子生物學方法對病原體特異性基因的檢測一、臨床標本的采集與處理（一）標本采集的一般原則1.早期病程早期、急性期或癥狀典型時使用抗生素前2.無菌采集應無污染，嚴格進行無菌操作采集的標
4、本均應盛于無菌容器內(nèi)3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集4.適量標本,不同病程采集不同部位標本5.安全采集做好標記（二）標本的處理原則：保持病原體活力，保持標本不被污染，也不污染環(huán)境1.盡快送檢對環(huán)境敏感的細菌應保溫立即送檢,其他所有采集后最好在2小時內(nèi)送檢,不能及時送檢,應注意保存2.必須注意安全防護,切勿污染環(huán)境3.厭氧性標本應放在專門的運送瓶或試管內(nèi)運送，有時可直接用抽取標本的注射器運送二、檢驗方法查病原體：形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查分離培養(yǎng)和鑒定檢測病原體成分（抗原和核酸）檢測患者血清中特異性抗體代謝產(chǎn)
5、物（生化試驗）毒素：外毒素、內(nèi)毒素（一）直接顯微鏡檢查（形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查）1.染色標本檢查法染色標本：了解病原體的形態(tài)、染色性或觀察宿主細胞內(nèi)包涵體臨床意義：1.鏡檢可以了解有無病原體及大致的量2.根據(jù)細菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對病原體的初步識別和分類3.通過形態(tài)學檢查可得到初步診斷，對臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義如CSF找到抗酸桿菌，應初步考慮結(jié)核分枝桿菌感染革蘭陽性革蘭陰性抗酸染色培養(yǎng)在McCoy細胞的沙眼衣原體吉姆薩染色的McCoy細胞，含大衣原體包涵體，使部分細胞核不清楚。（吉姆薩
6、染色,放大1000倍）狂犬病毒可于細胞漿中可形成嗜酸性包涵體新生隱球菌假絲酵母菌（白色念珠菌）革蘭染色墨汁負染2.不染色標本1)檢查生活狀態(tài)下細菌的動力及運動狀況2）螺旋體由于不易著色并有形態(tài)特征對某些病原菌作出初步鑒定，如霍亂弧菌常用方法壓片法(壓滴法)或懸滴法暗視野顯微鏡或相差顯微鏡檢查體癬皮屑可見關(guān)節(jié)孢子HAVparticlesfoundinfecalextractsbyimmunoelectronmicroscopyHAV形態(tài)電鏡圖 糞便標本負染X2000003.直接電鏡檢測EM免疫電鏡技術(shù)
7、IEM（二）分離培養(yǎng)和鑒定分離培養(yǎng)是微生物學診斷的金標準，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術(shù)臨床意義：1.明確感染病原體2.為臨床提供體外抗微生物藥物敏感試驗結(jié)果藥物敏感試驗標本培養(yǎng)特征形態(tài)特征生化試驗血清學試驗毒力試驗普通瓊脂平板？血平板？選擇培養(yǎng)基？1.細菌的分離培養(yǎng)和鑒定培養(yǎng)特征細菌學診斷形態(tài)特征血清學鑒定大腸埃希菌對照-吲哚試驗枸椽酸鹽利用試驗大腸埃希菌甲基紅試驗VP試驗大腸埃希菌大腸埃希菌對照-對照+對照+生化試驗一）病毒分離培養(yǎng)1．動物接種（二）病毒的分離與鑒定2．雞胚培養(yǎng)卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種
8、尿囊接種及羊膜腔接種敏感動物合適部位3．組織細胞培養(yǎng)：目前培養(yǎng)病毒應用最廣的方法（1）原代和次代細胞培養(yǎng)（2）二倍體細胞培養(yǎng)（3）傳代細胞培養(yǎng)識別病毒在培養(yǎng)細胞中增殖病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標1）細胞病變:細胞病變效應（CPE）、包涵體2）紅細胞吸附（hemadsorption）細胞病變效應（CPE）：病毒感染細胞后引起的細胞病變，可出現(xiàn)細胞圓縮、裂解或細胞腫大、數(shù)個細胞融合成多核巨細胞等。二）病毒鑒定Cytopathiceffect(CPE)ofprimarysev
