BJS 202206 苦丁茶中孔雀石綠的測定

《BJS 202206 苦丁茶中孔雀石綠的測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

食品補充檢驗方法BJS202206苦丁茶中孔雀石綠的測定2022-09-10發(fā)布國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

1BJS202206苦丁茶中孔雀石綠的測定1范圍本方法規(guī)定了苦丁茶中孔雀石綠的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本方法適用于苦丁茶中孔雀石綠的測定。2原理試樣用酸化乙腈提取,提取液經(jīng)分散固相萃取凈化,采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測,內(nèi)標法定量。3試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1試劑3.1.1乙腈(CH3CN):色譜純。3.1.2冰乙酸(CH3COOH)。3.1.3乙酸銨(CH3COONH4):優(yōu)級純。3.1.4甲酸(HCOOH):優(yōu)級純。3.1.5無水硫酸鎂(MgSO4)。3.1.6無水乙酸鈉(CH3COONa)。3.2試劑配制3.2.1乙酸-乙腈溶液(1+99):量取10mL冰乙酸(3.1.2)加入990mL乙腈(3.1.1)中混勻。3.2.2含0.1%(體積分數(shù))甲酸的5mmol/L乙酸銨溶液:稱取0.385g乙酸銨(3.1.3),加入1mL甲酸(3.1.4),用水溶解稀釋至1000mL。3.3標準品孔雀石綠草酸鹽、隱色孔雀石綠、孔雀石綠-D5苦味酸鹽、隱色孔雀石綠-D6的中文名稱、英文名稱、CAS編號、分子式、相對分子質(zhì)量和折算系數(shù)見附錄A中表A.1,純度≥98%。3.4標準溶液配制3.4.1孔雀石綠、隱色孔雀石綠標準儲備液:分別準確稱取孔雀石綠草酸鹽標準品(3.3)14.1mg(精確至0.1mg)(孔雀石綠草酸鹽折算為孔雀石綠的換算系數(shù)為0.711)和隱色孔雀石綠標準品(3.3)10mg(精確至0.1mg),分別置于100mL棕色容量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度,配制成質(zhì)量濃度均為100μg/mL的標準儲備液。-18℃避光保存,有效期6個月。3.4.2孔雀石綠-D5、隱色孔雀石綠-D6內(nèi)標儲備液:分別準確稱取孔雀石綠-D5苦味酸鹽標準品(3.3)16.9mg(孔雀石綠-D5苦味酸鹽折算為孔雀石綠-D5的換算系數(shù)為0.595)和隱色孔雀石綠-D6標準品(3.3)10mg(精確至0.1mg),分別置于100mL棕色容量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度,配制成質(zhì)量1

2BJS202206濃度均為100μg/mL的內(nèi)標儲備液。-18℃避光保存,有效期6個月。3.4.3混合標準中間液:分別準確移取孔雀石綠、隱色孔雀石綠標準儲備液(3.4.1)各1.00mL置100mL棕色容量瓶中,用乙酸-乙腈溶液(3.2.1)配制成質(zhì)量濃度均為1.00μg/mL的混合標準中間液。-18℃避光保存,有效期1個月。3.4.4混合內(nèi)標中間液:分別準確移取孔雀石綠-D5、隱色孔雀石綠-D6內(nèi)標儲備液(3.4.2)各1.00mL,用乙酸-乙腈溶液(3.2.1)配制成質(zhì)量濃度均為1.00μg/mL的混合內(nèi)標標準液。-18℃避光保存,有效期1個月。3.4.5混合標準系列工作液:分別準確吸取混合標準中間液(3.4.3)和混合內(nèi)標中間液(3.4.4)適量,用乙酸-乙腈溶液(3.2.1)稀釋,搖勻,作為系列混合標準工作液,各待測組分質(zhì)量濃度依次為1.00ng/mL、2.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL,混合標準系列工作液中孔雀石綠-D5和隱色孔雀石綠-D6質(zhì)量濃度均為8.00ng/mL。臨用新制或依儀器響應(yīng)情況配制適當濃度的混合標準系列工作液。3.5材料3.5.1乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠(PSA):40μm~60μm。3.5.2十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18):40μm~60μm。3.5.3微孔濾膜:0.22μm,有機系。4儀器和設(shè)備4.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:帶電噴霧離子源。4.2分析天平:感量分別為1mg和0.1mg。4.3渦旋混合器。4.4離心機:≥4000r/min。5分析步驟5.1試樣制備和保存取適量樣品,粉碎后充分混勻,放入潔凈容器中,于室溫避光保存。5.2試樣前處理稱取2g試樣(精確至0.001g)于50mL聚丙烯離心管中,準確加入120μL混合內(nèi)標中間液(3.4.4),再加入10mL水,渦旋混勻30s,浸泡30min。加入15mL乙酸-乙腈溶液(3.2.1),渦旋提取1min,再加入5g無水硫酸鎂(3.1.5)、7.5g無水乙酸鈉(3.1.6),蓋上離心管蓋,劇烈震搖1min,4000r/min離心5min,吸取2mL上清液加到內(nèi)置300mg無水硫酸鎂(3.1.5)、100mgPSA(3.5.1)、100mgC18(3.5.2)的15mL離心管中,渦旋混勻1min,4000r/min離心5min,取上清液過0.22μm有機相微孔濾膜,濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。上述處理中凈化前的上清液吸取量可根據(jù)需要調(diào)整,凈化材料(無水硫酸鎂、PSA、C18)用量按比例增減。5.3儀器參考條件5.3.1液相色譜參考條件如下。a)液相色譜柱:C18色譜柱(4.6mm×150mm,5.0μm),或性能相當色譜柱。b)流動相:(A)含0.1%甲酸的5mmol/L乙酸銨溶液;(B)乙腈。洗脫梯度參考條件見表1。2

3BJS202206c)流速:0.8mL/min。d)柱溫:30℃。e)進樣量:10μL。表1色譜洗脫梯度參考條件時間/min流動相A/%流動相B/%流速/(mL/min)0.009550.83.005950.89.005950.89.109550.812.09550.85.3.2質(zhì)譜參考條件如下:a)離子源:電噴霧離子源(ESI);b)檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);c)掃描方式:正離子模式;d)電噴霧電壓:5.5kV;e)霧化氣壓力:344.7kPa(50psi);f)離子源溫度:550℃;g)氣簾氣壓力:241.3kPa(35psi);h)輔助加熱氣壓力:413.7kPa(60psi);i)碰撞氣:中等;j)定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞能量見表2。表2各化合物的定性離子、定量離子、去簇電壓和碰撞能量化合物名稱母離子(m/z)子離子(m/z)去簇電壓/V碰撞能量/eVa313.14046孔雀石綠329.2208.24042a316.19035隱色孔雀石綠331.2239.09030孔雀石綠-Da5334.2318.310048隱色孔雀石綠-Da6337.1322.19528a定量離子。質(zhì)譜條件僅供參考,當采用不同質(zhì)譜儀器時,儀器參數(shù)可能存在差異,測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。5.4標準曲線的制作將混合標準系列工作液(3.4.5)分別注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中,測定相應(yīng)的被測組分,以被測組分濃度與對應(yīng)內(nèi)標濃度比值為橫坐標,被測組分色譜峰面積與對應(yīng)內(nèi)標色譜峰面積比值為縱坐標,繪制標準曲線,得到線性回歸方程。3

4BJS2022065.5測定5.5.1定性測定將混合標準系列工作液(3.4.5)和試樣溶液(5.2)分別注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中測定,試樣中目標化合物色譜峰的保留時間與混合標準系列工作液色譜峰的保留時間相比較,變化范圍應(yīng)在±2.5%之內(nèi),且其定性離子與濃度相當?shù)臉藴嗜芤褐邢鄳?yīng)的定性離子相對豐度相比,偏差不超過表3規(guī)定的范圍。表3相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%>50>20~50>10~20≤10最大允許偏差/%±20±25±30±505.5.2定量測定將試樣溶液同混合標準系列工作液進樣測定,根據(jù)標準曲線得到試樣溶液中待測物的濃度,計算樣品中待測物的含量。待測物的MRM色譜圖參見附錄B。5.6空白試驗不稱取試樣,均按試樣同法處理。應(yīng)確認不含有干擾待測組分的物質(zhì)。6結(jié)果計算試樣中目標化合物的含量按公式(1)計算:X=ρ×V×1000…………………………(1)m×1000式中:X———試樣中待測組分的含量,單位為微克每千克(μg/kg);ρ———由標準曲線計算所得的試樣溶液中待測組分的質(zhì)量濃度,單位為納克每毫升(ng/mL);V———提取液體積,單位為毫升(mL);m———試樣的稱樣量,單位為克(g);1000———換算系數(shù)。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。本方法孔雀石綠的測定結(jié)果系指孔雀石綠和它的代謝物隱色孔雀石綠之和,以孔雀石綠表示。7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的15%。8其他本方法孔雀石綠和隱色孔雀石綠的檢出限均為3.0μg/kg;定量限均為10μg/kg。4

5BJS202206附錄A(資料性)標準品及內(nèi)標的中文名稱、英文名稱、CAS編號、分子式、相對分子質(zhì)量和折算系數(shù)標準品及內(nèi)標的中文名稱、英文名稱、CAS編號、分子式、相對分子質(zhì)量和折算系數(shù)見表A.1。表A.1標準品及內(nèi)標的中文名稱、英文名稱、CAS編號、分子式和相對分子質(zhì)量序號中文名稱英文名稱CAS編號分子式相對分子質(zhì)量折算系數(shù)Malachitegreen1孔雀石綠草酸鹽2437-29-8C52H54N4O12927.020.711oxalatesalt2隱色孔雀石綠Leucomalachitegreen129-73-7C23H26N2330.481.00孔雀石綠-D5Malachitegreen-D531258668-21-1C29H22D5N5O7562.590.595苦味酸鹽picrate4隱色孔雀石綠-D6Leucomalachitegreen-D61173021-13-0C23H20D6N2336.501.005

6BJS202206附錄B(資料性)孔雀石綠、隱色孔雀石綠標準溶液及孔雀石綠-D5、隱色孔雀石綠-D6內(nèi)標溶液MRM色譜圖孔雀石綠、隱色孔雀石綠標準溶液及孔雀石綠-D5、隱色孔雀石綠-D6內(nèi)標溶液MRM色譜圖見圖B.1。圖B.1孔雀石綠、隱色孔雀石綠標準溶液及孔雀石綠-D5、隱色孔雀石綠-D6內(nèi)標溶液MRM色譜圖6

7BJS202206本方法負責起草單位:宜賓市食品藥品檢驗檢測中心。本方法驗證單位:福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院、中國檢驗認證集團湖南有限公司、成都海關(guān)技術(shù)中心、樂山市食品藥品檢驗檢測中心、四川賽納斯分析檢測有限公司。本方法主要起草人:聶立、劉燕、彭章明、陳紅霞、蘭瑞容、陳代宏、蔣雨、范志平、黃霞、兌靖冬、祝曉艷、王明、范子瑋。7