ssr 標(biāo)記輔助芥藍(lán)× 甘藍(lán)型油菜種間雜交后代的遺傳背景篩選

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1、研究論文中國(guó)蔬菜CHINAVEGETABLES2015（8）：14-21SSR標(biāo)記輔助芥藍(lán)×甘藍(lán)型油菜種間雜交后代的遺傳背景篩選*于海龍　方智遠(yuǎn)　楊麗梅　劉玉梅　莊　木　李占省　呂紅豪　張揚(yáng)勇（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京100081）摘　要：為篩選芥藍(lán)×甘藍(lán)型油菜種間雜交后代的遺傳背景，加速回交轉(zhuǎn)育進(jìn)程，采用蕾期授粉結(jié)合胚挽救手段進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交，獲得芥藍(lán)和甘藍(lán)型油菜的種間雜種F1和BC1群體。利用已有的220對(duì)SSR引物對(duì)雙親進(jìn)行多態(tài)性篩選，獲得多態(tài)性引物51對(duì)。挑選均勻分布在甘藍(lán)9條染色體上、擴(kuò)增穩(wěn)定、條帶

2、清晰的33對(duì)多態(tài)性SSR引物，對(duì)3株F1單株和35株BC1單株進(jìn)行遺傳背景篩選。NTSYSpc2.11a分析結(jié)果表明：F1植株的遺傳背景與親本甘藍(lán)型油菜更為接近，遺傳相似系數(shù)為0.74；而B(niǎo)C1植株的遺傳背景差異較大，與親本芥藍(lán)的遺傳相似系數(shù)在0.26～0.65之間。在35株BC1植株中，單株14Y1與芥藍(lán)的遺傳背景最為相近，形態(tài)觀察結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了該單株的遺傳背景與回交親本芥藍(lán)更相似，可用于下一步回交轉(zhuǎn)育。關(guān)鍵詞：芥藍(lán)；甘藍(lán)型油菜；種間雜種；遺傳背景；SSR標(biāo)記芥藍(lán)（Brassicaoleraceavar.alb

3、oglabra，CC，的親和性。韓甫（2011）利用芥菜型油菜與芥藍(lán)進(jìn)2n=2x=18）屬十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的一個(gè)變種，行種間雜交，獲得異源三倍體種間雜種，并對(duì)影響以花薹為主要食用器官，是蕓薹屬中重要的蔬菜作種間雜交的因素、雜種性狀特征及種間雜種小孢子物之一。相對(duì)于大白菜和結(jié)球甘藍(lán)，芥藍(lán)種質(zhì)資源培養(yǎng)進(jìn)行了研究。陳洪高（2006）通過(guò)蘿卜與白花較少，遺傳背景比較狹窄。遠(yuǎn)緣雜交是豐富蕓薹屬芥藍(lán)雜交，合成了蘿卜-芥藍(lán)異源四倍體，該異植物種質(zhì)資源的重要手段之一（林超等，2007）。源四倍體可用作向甘藍(lán)型油菜轉(zhuǎn)移蘿卜優(yōu)異性狀的

4、通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交可以打破種、屬間的生殖隔離，有橋梁材料。滿紅等（2007）利用四倍體菜薹和四倍效地進(jìn)行不同種、屬間雜交，創(chuàng)造植物新類型、體芥藍(lán)雜交，獲得了菜薹和芥藍(lán)的異源四倍體種間獲得新種質(zhì)資源，因此遠(yuǎn)緣雜交可以作為拓寬芥藍(lán)雜種。遺傳背景的有效途徑之一。此外，由于芥藍(lán)的生長(zhǎng)甘藍(lán)型油菜（Brassicanapus，AACC）是由甘周期短，1a可繁殖2～3代，因此利用芥藍(lán)進(jìn)行遠(yuǎn)藍(lán)（B.oleracea，CC）和白菜（B.rapa，AA）雜交緣雜交可快速實(shí)現(xiàn)目的性狀的轉(zhuǎn)移和改良。喬海云后自然加倍獲得的，屬于十字花科蕓薹屬，19

5、世（2012）利用蕾期授粉結(jié)合胚挽救技術(shù)獲得了芥藍(lán)紀(jì)30年代從歐洲引進(jìn)，是我國(guó)重要的油料作物之與菜薹的種間雜種，并研究了菜薹與芥藍(lán)種間雜交一。甘藍(lán)型油菜作為甘藍(lán)類蔬菜的近緣種之一，具有一些控制特異性狀的優(yōu)異基因，如抗根腫病基因（季海雯，2013）、Ogura細(xì)胞質(zhì)雄性不育育性恢復(fù)于海龍，男，碩士研究生，專業(yè)方向：蔬菜遺傳育種，E-mail：yuhailongnet@163.com基因（Primard-Brissetetal.，2005）等，這正是甘*通訊作者（Correspondingauthor）：張揚(yáng)勇，男，

6、副研究員，碩士生導(dǎo)藍(lán)類蔬菜所缺乏的。利用芥藍(lán)和甘藍(lán)型油菜遠(yuǎn)緣雜師，專業(yè)方向：蔬菜遺傳育種，E-mail：zhangyangyong@caas.cn交可以有效地拓寬芥藍(lán)的遺傳背景，可作為創(chuàng)制芥收稿日期：2015-03-15；接受日期：2015-04-29藍(lán)新種質(zhì)的一條途徑。但到目前為止，關(guān)于芥藍(lán)和基金項(xiàng)目：國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目（2012AA100202），創(chuàng)新能力專項(xiàng)甘藍(lán)型油菜種間雜交的研究較少，且甘藍(lán)型油菜與資金項(xiàng)目（2014EG134236），農(nóng)業(yè)部大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-25），農(nóng)業(yè)部園藝作物遺傳改良

7、重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目甘藍(lán)類蔬菜遠(yuǎn)緣雜交困難，后代育性低，很難獲得—14—《中國(guó)蔬菜》學(xué)術(shù)論文下載www.cnveg.org中國(guó)蔬菜CHINAVEGETABLES研究論文種間雜種。結(jié)合胚挽救方法獲得BC1群體。21世紀(jì)初，分子標(biāo)記技術(shù)就已經(jīng)應(yīng)用于甘藍(lán)1.3　多態(tài)性SSR標(biāo)記的篩選與背景標(biāo)記的確定類蔬菜的遺傳育種（王曉武和方智遠(yuǎn)，2001），利用王慶彪等（2014）設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的甘藍(lán)20對(duì)隨著甘藍(lán)基因組測(cè)序與重測(cè)序的完成（Liuetal.，指紋圖譜EST-SSR核心引物，以及選取本所甘藍(lán)2014）以及生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)

8、展，越來(lái)越多的分課題組設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的均勻分布在甘藍(lán)9條染色體上的子標(biāo)記得以開(kāi)發(fā)，并用于甘藍(lán)親緣關(guān)系和遺傳背200對(duì)SSR引物，對(duì)雙親（芥藍(lán)、甘藍(lán)型油菜）進(jìn)景多樣性分析（劉基生等，2014），以及品種指紋行多態(tài)性篩選，選取擴(kuò)增穩(wěn)定、條帶清晰、在雙親圖譜構(gòu)建和種子純度鑒定（王慶彪等，2014）等間有多態(tài)性的引物用于雜交