番茄品種ssr 標記鑒定技術(shù)研究

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1、研究論文中國蔬菜CHINAVEGETABLES2015（8）：22-27番茄品種SSR標記鑒定技術(shù)研究*趙海艷　吳明生　宋　歌　?！≤纭√锘鄯迹ū本┦蟹N子管理站，北京100088）摘　要：以16個番茄品種為材料，從200對番茄SSR引物中篩選出20對適合用于番茄品種鑒定的引物，用該20對引物對66個番茄品種進行分析，共檢測出52個等位基因變異，等位基因變異范圍為2～5個，平均每個位點產(chǎn)生2.6個等位基因變異。通過遺傳聚類方法對引物組合的品種鑒別能力進行分析，結(jié)果顯示僅用9對引物構(gòu)成的引物組合就可以對66個番茄品種進行有效鑒別，該9對引物組合構(gòu)建的SSR-DN

2、A指紋圖譜可作為品種的遺傳標簽用于品種真?zhèn)舞b定。關(guān)鍵詞：番茄；SSR；品種鑒定；指紋圖譜番茄（SolanumlycopersicumL.）是我國的主要番茄品種的SSR-DNA指紋，以期為番茄品種分子栽培蔬菜之一，但我國番茄種質(zhì)資源相對匱乏，加鑒定和品種權(quán)保護提供技術(shù)支撐。上消費者對番茄風味的特殊要求，導(dǎo)致育種單位所1　材料與方法采用的育種材料集中在少數(shù)種質(zhì)資源上，育成的品種遺傳差異小。由于親緣關(guān)系相近的品種很難利用1.1　試驗材料外觀形態(tài)加以區(qū)別，容易出現(xiàn)一品多名、一名多品，試驗于2013～2014年在北京市種子管理站種或以劣充好的違法行為。因此，亟須建立一套

3、準確、子檢測室進行。供試番茄材料由本站收集，共計高效的番茄品種鑒定技術(shù)。66個品種，包括櫻桃番茄和普通番茄，其品種名與傳統(tǒng)的品種鑒定方法相比，SSR分子標記稱和主要性狀見表1。具有多態(tài)性高、重復(fù)性和穩(wěn)定性好等優(yōu)點，廣泛用1.2　試驗方法于玉米、水稻等主要農(nóng)作物的品種鑒定和指紋圖譜1.2.1　DNA提取　采用新型植物基因組DNA提構(gòu)建（宋建等，2006），在品種打假維權(quán)方面取得取試劑盒（TIANGEN，北京）提取番茄的基因組很好效果。在番茄方面，Suliman等（2002）利用DNA，于-20℃保存?zhèn)溆?。AFLP、SSR、SNP等技術(shù)對番茄品種進行多態(tài)性分1.

4、2.2　SSR引物　200對SSR引物來自Benor等析，認為SSR標記較適合于種質(zhì)資源多樣性分析。（2008）和番茄基因數(shù)據(jù)庫（http：//www.sgn.cornell.王日升等（2006）比較了SSR標記和形態(tài)標記在番edu），普通引物由北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責任茄栽培品種遺傳多樣性的分析結(jié)果上具有高度一致公司合成，熒光標記引物由上海英駿生物技術(shù)有限性，表明SSR標記可用于番茄品種鑒別。本試驗對公司合成。200對番茄SSR引物進行篩選獲得適合番茄品種鑒1.2.3　PCR擴增　PCR反應(yīng)體系總體積為12μL。-1定的候選引物，通過遺傳相似聚類分析方法

5、確定適包括30ng模板DNA，MgCl22.5mol·L，dNTPs0.15-1-1合66個番茄品種鑒定的SSR引物組合，并構(gòu)建了mol·L，引物0.25μmol·L，Taq聚合酶0.1U，1×TaqBuffer。趙海艷，女，碩士，農(nóng)藝師，專業(yè)方向：種子質(zhì)量檢測，E-mail：PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5min；94℃變性zhaoh_yan@163.com40s，58℃退火35s，72℃延伸45s，共36個循環(huán)；*通訊作者（Correspondingauthor）：吳明生，男，高級農(nóng)藝師，專業(yè)方向：72℃延伸10min，

6、擴增產(chǎn)物4℃保存。種子質(zhì)量檢測，E-mail：chpwcx2010@sina.com1.2.4　PCR產(chǎn)物檢測　普通引物的PCR產(chǎn)物和熒收稿日期：2014-06-06；接受日期：2014-11-15基金項目：北京市科技計劃項目（D131100000413001）光標記引物的PCR產(chǎn)物分別通過生物大分子分析—22—《中國蔬菜》學(xué)術(shù)論文下載www.cnveg.org中國蔬菜CHINAVEGETABLES研究論文表166個番茄品種的名稱及主要性狀序號品種名稱植株及果實性狀序號品種名稱植株及果實性狀1貝蒂無限，卵圓形，小果，紅色34芙蓉無限，圓形，大果，紅色有

7、果尖2佳西娜無限，圓形，中小果，紅色35青研1號有限，圓形，中果，紅色3貝美無限，卵圓形，小果，紅色36迪利奧無限，圓形，中果，紅色4紅玉無限，橢圓形，小果，紅色37維納斯無限，圓形，小果，橙黃色5小皇帝半有限，橢圓形，小果，橙黃色38白果強豐無限，圓形，中果，紅色6櫻莎紅4號無限，卵圓形，小果，紅色39錦繡無限，扁圓形，中果，紅色7喀秋莎無限，圓形，中小果，紅色40佩坦贊無限，扁圓形，中果，紅色8維莎半有限，橢圓形，小果，粉紅色41紅太陽有限，圓形，大果，紅色，9布蘭妮無限，圓形，大果，紅色42格蕾斯無限，卵圓形，小果，紅色10北京櫻桃番茄無限，圓球形，小果，

8、紅色43京丹5號無限，橢