植物組織石蠟切片的制作

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1、植物組織石蠟切片的制作一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．熟練掌握石蠟切片的方法。2．掌握永久制片的制作過(guò)程，為研究植物的內(nèi)部結(jié)構(gòu)奠定基礎(chǔ)。3．學(xué)會(huì)植物內(nèi)部結(jié)構(gòu)的比較研究方法。二、實(shí)驗(yàn)器具與試劑1．器具石蠟切片機(jī)、烘箱、顯微鏡、染色缸、小培養(yǎng)皿、鑷子、毛筆、吸水紙、紗布、載玻片、蓋玻片等。2．試劑10%番紅水溶液、0.5%固綠（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸餾水、甘油、中性樹(shù)膠等。三、實(shí)驗(yàn)材料幼嫩植物各部分，根據(jù)季節(jié)選擇材料。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法石蠟切片法是顯微技術(shù)上最重要、最常用的一種方法。它是把材料封埋在石蠟里面，用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)切片，可以切出

2、很薄的切片。凡是精細(xì)的工結(jié)構(gòu)，大都用石蠟切片。全都過(guò)程如下：1．固定2．洗滌3．脫水與硬化4．脫酒精2．封埋6．切片7．粘片8．脫蠟9．染色10．脫水11.透明12．膠封（一）固定1．固定的意義：固定就是用藥品把細(xì)胞殺死，使細(xì)胞的原生質(zhì)凝固，死后不發(fā)生變化，盡可能保持原來(lái)的結(jié)構(gòu)以供我們觀察。良好的固定劑，應(yīng)是穿透力強(qiáng)，使細(xì)胞立刻致死，原生質(zhì)全部凝固；不發(fā)生任何變形，增強(qiáng)折光率，并且不妨礙染色。2．固定液的種類(lèi)：固定液的種類(lèi)很多，根據(jù)配制成分可劃分為：(1)簡(jiǎn)單固定液：以一種化學(xué)藥品配制的固定液。常用的簡(jiǎn)單固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用純酒精或95％酒精。酒精穿透

3、力強(qiáng)，固定時(shí)間常在1小時(shí)以?xún)?nèi)。高濃度酒精有使材料收縮的作用。70％的酒精可作保存液。配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，絕不可用純酒精。酒精為還原劑，不能與鉻酸、鋨酸、重鉻酸鉀等氧化劑配合。酒精可使核酸，蛋白質(zhì)及肝醣等發(fā)生沉淀，但能溶解脂肪及擬脂。B．福爾馬林即甲醛，具強(qiáng)烈刺激性的氣味，純凈的甲醛，為無(wú)色透明液體。固定用的濃度為4-10％甲醛也是強(qiáng)還原劑。不能與鉻酸、鋨酸等氧化劑配合。經(jīng)固定后，材料變硬，通常不引起皺縮，但隨后經(jīng)過(guò)他種藥劑處理時(shí)，就每每出現(xiàn)皺縮。所以甲醛一般不單獨(dú)作固定，而與其他液體混合使用。C．醋酸：為無(wú)色透明的液體，刺激性極強(qiáng)，冷則凝結(jié)成冰，故又

4、叫冰醋酸。醋酸以與水和酒精配成各種比例的溶液，所用濃度為0.2～5％，也常與其他固定劑配合使用。醋酸穿透性很強(qiáng)，單獨(dú)使用，有使原生質(zhì)膨脹的作用，故常與酒精，甲醛等合用，醋酸為固定染色體的優(yōu)良固定液，因此固定染色體的固定液中，幾乎都含有醋酸。(2)混合固定液：由幾種藥劑，適量配制而成。常用的有下列幾種：A、F.A.A固定液(又稱(chēng)萬(wàn)能固定液)：[用途]這個(gè)固定液在植物研究上，應(yīng)用最多，為植物組織最常用的固定液。固定時(shí)間，不受限制，短為24小時(shí)，長(zhǎng)可延至數(shù)月或數(shù)年。野外工作，非常便利。并且固定的材料，不妨礙染色，但對(duì)染色體的固定不佳。材料固定后，用50％酒精洗滌數(shù)次。[配法]50

5、％或70％酒精90毫升冰醋酸5毫升福爾馬林5毫升柔軟材料用50％酒精，堅(jiān)硬材料用70％酒精配制。B、卡爾諾氏(Carnoy's)固定液[用途]此液作組織細(xì)胞的固定，有極快的滲透力，固定根尖和花藥只需40-60分鐘。固定后用95％酒精沖洗，在組織不能立即處理時(shí)，需轉(zhuǎn)入70％酒精中保存。配法有兩種：C．納瓦興(Navaschjn's)固定液[用途]此液在植物制片上應(yīng)用甚廣，是細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)上一種優(yōu)良的固定液。此液原來(lái)的配方已很少應(yīng)用，現(xiàn)所用的都是改良液，且種類(lèi)很多，如材料較柔嫩，含水量較多，可用配方I、Ⅱ；材料較堅(jiān)硬，含水量較少，可用Ⅳ、V配方，其中配方Ⅱ?qū)χ参锱咛W(xué)制片特別適

6、用。為了使用方便，常分別配成甲、乙兩種基液，用時(shí)臨時(shí)等量配合。固定時(shí)間為12-24小時(shí)，固定后用70％酒精洗滌數(shù)次。(二)洗滌材料固定后，藥劑繼續(xù)留在組織中，易使組織破壞，必須用水或酒精洗去。用什么去洗，可根據(jù)三條原則：1．凡用水溶液配制的固定液，特別是含有鉻酸、重鉻酸鉀的固定液，一律用水洗。2．凡用酒精配制的固定液，一律用同濃度的酒清洗。3．如固定液中含有苦味酸．在70％酒清中停留稍久時(shí)，可除去黃色。如用升汞固定的材料，在洗滌時(shí)，須加碘液，可除去汞的結(jié)晶。（三）脫水與硬化材料洗滌后，其中含水，水與石蠟不能混合，必須洗去。去水用酒精，材料由水入酒精中，不能操之過(guò)急，須由低度

7、酒精漸至高度酒精。通常由30％、50％、70％、80％、90％，每次須經(jīng)半小時(shí)，材料大的，時(shí)間須延長(zhǎng)。若暫時(shí)不能埋蠟、材料可放在70％酒精中保存，經(jīng)久不壞。在高度酒精中，不能過(guò)久．因酒精能使材料硬化，過(guò)久則材料由硬而脆，切時(shí)易于粉碎。（四）脫酒精材料脫水后，材料中全含酒精，酒精與蠟也不能混合，仍須除去。脫酒精通常用二甲苯，材料由酒精入二甲苯，最好也漸次進(jìn)行，先經(jīng)純酒精二甲苯混合液，再入純二甲苯中，純二甲苯須換一、二次才行。時(shí)間每次約半小時(shí)。二甲苯不僅脫去酒精，并且透明，所以又叫透明劑。（五）埋蠟埋蠟是把材料封埋在石