動(dòng)物組織石蠟切片制作

《動(dòng)物組織石蠟切片制作》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、動(dòng)物組織石蠟切片制作科研儀器管理中心實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹谱鲗?shí)驗(yàn)動(dòng)物的組織切片并染色，掌握動(dòng)物組織制片技術(shù)實(shí)驗(yàn)用品1．動(dòng)物的組織。2．器材和儀器：切片機(jī)、展片儀、毛筆、載玻片、蓋玻片、烤箱、顯微鏡。3．試劑：60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇、二甲苯、石蠟、中性樹(shù)膠。方案一:病理石蠟切片的制作（一）石蠟組織塊制作1．取材。2．固定。3．脫水、透明及浸蠟（具體步驟見(jiàn)表）。4．包埋步驟操作項(xiàng)目小鼠大鼠家兔（1）60%乙醇15min20min30min（2）70%乙醇15min20min30min（3）80%乙醇20min30min40min（4）90%乙醇2

2、0min30min40min（5）95%乙醇Ⅰ20min30min40min（6）95%乙醇Ⅱ20min20min30min（7）無(wú)水乙醇Ⅰ20min30min40min（8）無(wú)水乙醇Ⅱ20min30min40min（9）二甲苯Ⅰ5min8min10min（10）二甲苯Ⅱ3min5min5min（11）石蠟Ⅰ10min15min20min（12）石蠟Ⅱ20min25min30min（13）石蠟Ⅲ30min30min40min注意事項(xiàng)一般實(shí)質(zhì)性臟器的組織及腫瘤組織應(yīng)把最大切面朝下包埋；食管、胃、腸等組織須將管壁橫斷面朝下包埋，若在同一蠟塊中包埋數(shù)塊管壁組織時(shí)，應(yīng)平行橫埋且黏膜面

3、（內(nèi)膜）的方向應(yīng)一致，以便切片及觀察。△同一蠟塊包埋多個(gè)組織塊時(shí)，組織的性質(zhì)應(yīng)相同，方向要一致，不能把大小、厚薄差別懸殊的組織包埋在一起，組織塊間的距離不能太大。△皮膚、骨等難切組織及需要連續(xù)切片的組織都應(yīng)單獨(dú)包埋。△神經(jīng)、脊髓及需要定向包埋的組織應(yīng)注意組織塊的相互關(guān)系。△包埋（尤其在室溫較低的情況下）操作應(yīng)迅速，防止組織塊變涼、蠟液凝結(jié)及出現(xiàn)氣泡，組織塊與蠟液不能很好凝固定在一起，導(dǎo)致組織與蠟分離。△遇有管腔或空洞標(biāo)本與小標(biāo)本同埋一個(gè)蠟塊時(shí)，不能將小標(biāo)本放入其他標(biāo)本的管腔或空洞內(nèi)。（二）石蠟切片制作用切片機(jī)將石蠟包埋的組織塊（蠟塊）制成適宜厚度的切片，是目前在病理

4、學(xué)科中最常用的一種制片方法。切片厚度為一般4~6μm。【切片前的準(zhǔn)備】1、修切蠟塊切片前應(yīng)先修塊，即切去組織周?chē)^(guò)多的石蠟，一般留下約2mm寬度的蠟邊為宜。注意蠟塊不能留得太窄，在切片時(shí)易損壞組織；蠟邊不能留得太多，否則影響展片。室溫過(guò)高時(shí)，可將修好的蠟塊放到冰箱中冷卻一定時(shí)間。2、切片用品準(zhǔn)備（1）切片刀：預(yù)先磨好切片刀備用或切片前更換新的一次性切片。（2）載物片：載物片經(jīng)清潔液、95%乙醇處理后備用。（3）展片儀：加入溫水，接通電源，調(diào)整溫度。（4）其他用品：準(zhǔn)備好毛筆、記號(hào)筆、鑷子、冰塊等?！厩衅谱鬟^(guò)程】以使用旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)石蠟切片為例：1．將切片刀裝在刀架上，

5、后將蠟塊裝在切片機(jī)固定裝置上。調(diào)整蠟塊與刀至合適位置（刀刃與蠟塊切面呈5°夾角）旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)切取組織，是由下向上切，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端（如皮膚組織，應(yīng)將表皮部分向上。而胃腸等組織，應(yīng)將漿膜面朝上）。2．左手執(zhí)手筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)旋轉(zhuǎn)輪。先粗切標(biāo)本，直到暴露出組織最大切面（但對(duì)小標(biāo)本不要修切得太多，以免將整個(gè)組織塊修切掉）。再連續(xù)旋轉(zhuǎn)切出蠟帶，左手持毛筆將蠟片帶下端輕輕托起，右手用鑷子夾起蠟帶上端，正面向上放入展片儀水盒內(nèi)，展片溫度根據(jù)使用的石蠟熔點(diǎn)進(jìn)行調(diào)整，一般水溫為45℃左右，待蠟片帶中的組織展平后，即可進(jìn)行分片和撈片。對(duì)

6、于展片困難的切片經(jīng)30%的乙醇初展后，再用載玻片撈起蠟帶放人展片儀水盒內(nèi)可使切片更易展平。在夏季切片時(shí)可用冰塊冷卻切片刀和組織塊，減少切片刀與組織塊在切片過(guò)程中產(chǎn)生的熱時(shí)，使石蠟保持合適的硬度以利于切片。3．撈起切片后，寫(xiě)上編號(hào)。撈片時(shí)注意切片的位置，一般切片的中心位于載物片右側(cè)1/3與2/3交界處為佳，并注意整齊美觀。4．烤箱60℃左右烘烤切片30min，對(duì)血凝塊和皮膚組織應(yīng)及時(shí)烤片，烤片溫度應(yīng)稍低；腦組織切片撈出后直立晾干，再烤片，否則產(chǎn)生氣泡。方案二石蠟切片的制作1—6微米。制作大批的或是連續(xù)的切片。長(zhǎng)期保存。一、切片前的準(zhǔn)備：1、恒溫水浴鍋首先預(yù)熱至35℃—40℃。2

7、、蠟塊整修，暴露組織并修平，減少刀的磨。3．載玻片應(yīng)事先洗滌干凈，無(wú)油膩和不透明現(xiàn)象。涂粘片劑。4、將鋒利的刀片，調(diào)整角度和位置，以20°-30°為佳。5、備用小型毛筆、小型無(wú)鉤鑷子、鉛筆。方案二石蠟切片的制作二、切片的步驟：1、將蠟塊固定于切片機(jī)頭上的夾座內(nèi)，2、調(diào)整蠟塊組織切面恰好與刀口接觸，旋緊刀架3、根據(jù)需要調(diào)整切片厚度。4、修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，再行切制。5、切下的切片帶，用毛筆從刀口向上挑起，拉下切片帶方案二石蠟切片的制作三、切片的注意事項(xiàng)1、切片質(zhì)量的好壞，與技術(shù)熟練程度