石蠟組織切片

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1、石蠟組織切片技術(shù)步驟：殺死與取材、固定、洗滌、脫水、透明、浸蠟與包埋、切片與貼片、染色、封固等。（一）殺死與取材1、動(dòng)物致死的方法（1）麻醉法：乙醚或氯仿；或4%戊巴比妥做靜脈注射，劑量一般按動(dòng)物體重每公斤1ml；或用20%氨基酸乙酯作腹腔注射，劑量一般按動(dòng)物每kg5ml。乙醚麻醉對(duì)丘腦下部神經(jīng)分泌物的染色標(biāo)本不利。（2）空氣栓塞法：不宜用于血管標(biāo)本的制作。（3）擊頭法：（4）斷頭法：（5）放血法：有利于腸系膜鋪片的制作。無論何種致死法，都要求動(dòng)作迅速，因?yàn)閯?dòng)物一旦死亡，其組織與細(xì)胞及開始自溶。2、取材注意事項(xiàng)：（1）速度要快，材料新鮮

2、取材后立即投入固定液中，防止組織會(huì)收縮變形，發(fā)生自溶現(xiàn)象。臟器的上皮組織最易變質(zhì)，應(yīng)爭(zhēng)取在半小時(shí)內(nèi)處理完畢。（2）組織塊力求小而薄組織塊的大小一般為0.5×0.5×0.2cm、1×1×0.3cm或1.5×1.5×0.3-0.5cm，最厚不能超過0.5cm。（3）切取組織應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇所取組織應(yīng)包括臟器或組織的重要結(jié)構(gòu)或全層，同時(shí)考慮好切面方向。病理組織除切取病變部位外，還要切取病變和正常組織交界區(qū)域，以利觀察分析。（4）勿使組織塊受擠壓切取組織，刀要鋒利，動(dòng)作要輕，不可來回切割，也不要擠壓或牽拉組織。夾取組織時(shí)，切勿猛壓。

3、（5）保持材料的清潔組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等，可用生理鹽水沖洗。（6）盡量保持組織的原有形態(tài)柔嫩、薄的材料，有空氣的組織（7）組織塊附加標(biāo)記的方法不同的組織塊，要根據(jù)切片的要求和需要分瓶放入進(jìn)行固定，加標(biāo)簽以示區(qū)別，并注明固定液、名稱、來源、日期等等。（二）固定1、固定的目的（1）迅速阻止組織、細(xì)胞的死后變化，防止自溶與腐敗，使之盡量保持生前的形態(tài)與結(jié)構(gòu)。（2）使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其原有狀態(tài)。（3）使組織內(nèi)各種物質(zhì)成分產(chǎn)生不同的折光率，以便染色后易于鑒別和觀察。（4）使組織塊硬化

4、，使在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞，并便于制作薄片。（5）使組織成分對(duì)染料有不同的親和力，經(jīng)過染色處理后易于辨認(rèn)。（6）防止細(xì)胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)。2、固定的方法（1）蒸汽固定法：比較細(xì)小而薄的標(biāo)本，可用鋨酸或甲醇蒸氣固定。（2）注射、灌注固定法：某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對(duì)整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行固定。這時(shí)宜采用注射固定法，將固定液注入血管，經(jīng)血管分枝到達(dá)整個(gè)組織和全身，從而得到充分的固定。局部灌注固定全身灌注固定無論那種灌注固定，在灌注完成時(shí)，必須將組織塊、器官或整個(gè)動(dòng)物再放入同樣的固定液中進(jìn)行固

5、定。（3）小塊組織固定法：取下的小塊組織，立即置入液態(tài)固定劑中進(jìn)行固定，這是應(yīng)用最廣泛最經(jīng)常的方法。3、固定的注意事項(xiàng)及影響因素u固定液的用量應(yīng)充足，一般為組織塊體積的10~20倍左右。瓶底墊上脫脂棉或幾層濾紙更好，以便固定液能從上下左右前后滲入組織塊。軟組織或較大塊組織可先經(jīng)2～3小時(shí)固定后，再修整成小塊重投入新配制的固定液內(nèi)繼續(xù)固定。u固定時(shí)間應(yīng)根據(jù)組織的種類、性質(zhì)、大小，固定液的種類、性質(zhì)、滲透力的強(qiáng)弱而定。如：一般組織，以10％福爾馬林固定24h左右，波恩(Bouin)氏固定液12至24h，卡諾氏(Carnoy)固定液1h內(nèi)。適

6、當(dāng)?shù)卦黾訙囟瓤煽s短固定時(shí)間。4、常用固定液：固定液特點(diǎn)：①有較強(qiáng)的滲透力，能迅速的滲入組織內(nèi)部②不使組織過度收縮或膨脹，并能使組織內(nèi)待觀察的成分凝固為不溶性物質(zhì)③能使組織達(dá)到一定的硬度，并獲得較佳的折光率和對(duì)某種染料具有較強(qiáng)的親和力。（1）單純固定液10%福爾馬林固定液：甲醛10ml蒸餾水90ml優(yōu)點(diǎn)：透滲能力強(qiáng)，固定均勻，組織收縮小。缺點(diǎn)：但經(jīng)乙醇脫水后收縮較大。酒精固定液：優(yōu)點(diǎn)：有固定兼脫水作用，固定后可直接放入85％－95％酒精中脫水。對(duì)糖原、纖維蛋白和彈性纖維等固定效果好。缺點(diǎn)：但固定速度較慢，易使組織變脆。一般先用85％酒精固

7、定數(shù)小時(shí)再放入95％酒精繼續(xù)固定?？辔端峁潭ㄒ海簝?yōu)點(diǎn)：1、苦味酸固定的組織并不硬化，經(jīng)酒精脫水后，其硬化程度增加不大。2、苦味酸有軟化皮膚和溶化肌腱粘蛋白的作用，適宜制作毛皮和肌腱切片。缺點(diǎn)：1、固定后，細(xì)胞收縮明顯，經(jīng)酒精脫水和浸蠟包埋后收縮加劇，其收縮程度可達(dá)50%左右。2、固定組織不宜超過24小時(shí)，時(shí)間過長對(duì)堿性染料染色不利。固定后應(yīng)即轉(zhuǎn)入70%酒精中，經(jīng)一定時(shí)間洗去苦味酸.重鉻酸鉀：PH在4.2以下時(shí)可固定染色體，使細(xì)胞質(zhì)和染色質(zhì)沉淀成網(wǎng)狀，但線粒體被破壞。PH在4.2以上時(shí)，染色體被溶解，細(xì)胞質(zhì)得到良好的固定，且能固定類脂，使

8、之不溶于脂溶劑，故能保存高爾基復(fù)合體及線粒體。升汞：能較好的顯示細(xì)胞核。醋酸：對(duì)染色質(zhì)和染色體的固定與染色都很好。但它既不能保存糖，又不能固定脂肪及類脂，因此，在固定線粒體及高爾基體時(shí)忌用高濃度醋酸。丙酮：