sirna沉默livin基因?qū)盒院谒亓鰈ibr細(xì)胞凋亡、周期及增殖的影響

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1、siRNA沉默livin基因?qū)盒院谒亓鯨iBr細(xì)胞凋亡、周期及增殖的影響：王昊，譚升順，王新陽(yáng)，劉棟華，于春水，白轉(zhuǎn)麗【摘要】　　目的：觀察沉默livin基因?qū)盒院谒亓鯨iBr細(xì)胞凋亡和周期及增值的影響.方法：采用siRNA3轉(zhuǎn)染人惡性黑素瘤LiBr細(xì)胞后分別應(yīng)用TUNEL法和AnnexinVFITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，應(yīng)用PI單染流式細(xì)胞術(shù)分析對(duì)細(xì)胞周期的改變，應(yīng)用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)siRNA對(duì)凋亡效應(yīng)蛋白Caspase3表達(dá)的影響及應(yīng)用MTT法檢測(cè)siRNA對(duì)細(xì)胞增殖的作用.結(jié)果：siRNA3轉(zhuǎn)染LiBr細(xì)胞72h可誘

2、導(dǎo)細(xì)胞凋亡(P<0.05)和引起細(xì)胞G0/G1期阻滯(P<0.05)；可下調(diào)Caspase3蛋白表達(dá)(P<0.05)及抑制細(xì)胞增殖(P<0.05).結(jié)論：Livin可做為應(yīng)用RNA干擾技術(shù)探索惡性黑素瘤基因治療的潛在靶基因.【關(guān)鍵詞】livin；黑色素瘤；RNA干擾；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞周期；細(xì)胞增殖　【Abstract】AIM:ToinvestigateallinterferingRNA(siRNA)leadstoinductionofapoptosis,arrestofcellcycleandinhibitionofproliferatio

3、ninmalignantmelanomaLiBrcells.METHODS:AchemicallysynthesizedsiRNAduplextargetingtolivin,anmalignantmelanomaLiBrcells.ThenTUNELassayandAnnexinVFITC/PIfloetricanalysisedforapoptosis,PIfloetricanalysisforcellcycle,immunofluorescenceanalysisforCaspase3proteinexpression,andMTTassayforcel

4、lproliferation.RESULTS:SilencinglivingenebysiRNAcouldinduceapoptosis(P<0.05)andupregulatecaspase3obviously(P<0.05),arrestcellcycleatG0/G1phasesignificantly(P<0.05),andinhibitcellproliferationremarkably(P<0.05).CONCLUSION:Livincanserveasapotentialmoleculartargettomalignant

5、melanomaingenetherapybysiRNA.【Keyelanoma;RNAinterferenc;apoptosis;cellcycle;cellproliferation　　0引言惡性黑素瘤（malignantmelanoma,MM）近年來(lái)在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率明顯上升,因其高度惡性、易轉(zhuǎn)移且對(duì)化學(xué)及放射療法不敏感，致患者5a生存率不到10％.livin是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的凋亡蛋白抑制因子（inhibitorofapoptosisprotein,IAP）家族的最新成員，其在多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)而在正常細(xì)胞中不、或低表達(dá)的特點(diǎn)開始引起研究人員的關(guān)注［1］

6、.RNA干擾（RNAinterence,RNAi）現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)及小干擾RNA(smallinterferingRNA,siRNA)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生RNA干擾效應(yīng)的技術(shù)建立為腫瘤基因治療探索在方法上開辟了新的途徑［2］.我們以化學(xué)合成的siRNA3序列沉默livin基因后觀察其對(duì)惡性黑素瘤LiBr細(xì)胞凋亡、周期及增殖的影響，為探索惡性黑素瘤的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).1材料和方法1.1材料惡性黑素瘤細(xì)胞株LiBr由第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科高天文教授惠贈(zèng)；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）購(gòu)自Gibco公司；siRNA–3為前期研究中從設(shè)計(jì)的靶向livin（GenBa

7、nkAccessionNo.NM_022161）的3條序列中確定的敲低效應(yīng)最佳的干擾序列（sense5′GAGAGGUCCAGUCUGAAAGdTdT3′,antisense5′CUUUCAGACUGGACCUCUCdTdT3′，與livinmRNA特異結(jié)合位點(diǎn)：790808），siRNANC為與人類基因組序列無(wú)任何匹配的陰性對(duì)照序列（sense5′UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT3′,antisense5′ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT3′），由中國(guó)上海GenePharma公司化學(xué)合成并退火形成雙鏈（siRNAd

8、uplex