vegf單克隆抗體對胰腺缺血再灌注損傷中細胞凋亡的影響

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1、VEGF單克隆抗體對胰腺缺血再灌注損傷中細胞凋亡的影響：楊家紅謝嶸王瑩范昕【摘要】目的：從胰腺腺泡細胞凋亡的角度探討血管內皮生長因子（VEGF）單克隆抗體在胰腺缺血再灌注損傷中保護作用。方法：采用鉗閉大鼠腹腔干、腸系膜上動脈制備胰腺缺血再灌注損傷模型，并應用細胞凋亡原位標記法(TUNEL)、免疫組化技術等檢測VEGF單克隆抗體干預后對胰腺細胞凋亡及Bax,Bcl2蛋白表達的影響。結果：干預組15，30，60min胰腺細胞凋亡指數顯著低于缺血再灌注組(P<0.01)。正常胰腺組織未見凋亡調控基因Bcl2的表達,VEGF單克隆抗體干預后15，30，60min胰腺細胞Bcl2染色

2、陽性率明顯高于缺血再灌注組(P<0.01)；正常胰腺組織見較弱的凋亡調控基因Bax的表達，而VEGF單克隆抗體干預后15，30，60min胰腺細胞Bax染色陽性率明顯低于缺血再灌注組(P<0.01)。結論：VEGF單克隆抗體能夠通過抑制胰腺腺泡細胞的過度凋亡減輕胰腺炎的嚴重程度，該作用可能是通過促進抗凋亡Bcl2基因表達，抑制促進凋亡基因Bax表達來實現的?！娟P鍵詞】胰腺；缺血再灌注；細胞凋亡；VEGF單克隆抗體；Bax；Bcl2［Abstract］Objective:ToinvestigatetheeffectofVEGFMcAbprotectingonpancrea

3、sinjuryduringexperimentalischemic/reperfusioninrats.Methods：Ischemic/reperfusionmodelsadebyligatedboththeanteriormensenericarteryandthecelicaarteryof70rats.ApoptosisofpancreaticacinarcellsinaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPbiotinnickendlabeling(TUNEL)method,andtheexpressionofapoptosisreg

4、ulatedgeneBaxandBcl2munohistochemicaltechnique.Results：Theindexofapoptosisincreasedsignificantlyinpancreatictissuesafterpancreaticischemia/reperfusioninjurybutoffsetbyadministrationofVEGFMcAb.Immunohistochemicalanalysisshoalpancreatictissues.ThepositiverateofBcl2proteininVEGFMcAbgroupic/reperf

5、usiongroupentalleviatedpancreaticischemia/reperfusioninjurybyrestrainingexcessiveapoptosis.Thiseffectmightberelatedic/reperfusion;apoptosis;VEGFMcAb;Bax;Bcl2缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷是一種常見的臨床病理生理過程，在急性胰腺炎(AP)的發(fā)病機理中起著重要作用。近年的研究發(fā)現，I/R損傷與細胞凋亡有著密切的聯系［1］，現已證實，AP大鼠的發(fā)病過程中胰腺存在細胞凋亡的改變，且與其病變的嚴重程度有

6、關［2］。本實驗旨在探討血管內皮生長因子(VEGF)單克隆抗體在I/R損傷后對胰腺細胞凋亡的影響及其可能的機制，以探討AP治療的新途徑。1材料與方法1.1動物及主要試劑清潔級SD大鼠共70只，雌雄不限（江蘇大學醫(yī)學院實驗動物中心提供），VEGF單克隆抗體（SantaCruz公司），鼠抗Bcl2單克隆抗體（北京中山生物技術有限公司）、兔抗Bax單克隆抗體（SantaCruz公司），鏈霉素親生物素過氧化物酶標(SP)免疫組化試劑盒(Biotech公司產品)。1.2方法1.2.1動物分組成年anheim公司試劑盒說明操作，光鏡下觀察計算凋亡指數。凋亡指數(apoptosisindex，A

7、I)計算方法:數4個高倍視野，分別計算凋亡細胞數和總細胞數，AI=凋亡細胞數/總細胞數×100%1.3.2免疫組化SP法檢測胰腺組織細胞凋亡基因胰腺組織常規(guī)石蠟切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，胰蛋白酶液消化，室溫20min。以下步驟按SP試劑盒說明操作，光鏡下計算胰腺細胞Bax,Bcl2染色陽性率。結果判斷:細胞染色呈棕褐色或棕黃色為陽性，Bax,Bcl2免疫陽性反應定位于細胞核。胰腺細胞染色陽性率計算方法:數4個高倍視野，分別計算陽性細胞