中華絨螯蟹幼蟹對(duì)leu和ile的需要量研究

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1、中華絨螯蟹幼蟹對(duì)Leu和Ile的需要量研究　　亮氨酸(Leu)和異亮氨酸(Ile)是水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)不能合成而必須從飼糧中獲取的氨基酸,即必需氨基酸(EAA),都屬于脂肪族氨基酸,同時(shí)也都是支鏈氨基酸(BCAA)。它們特殊的結(jié)構(gòu)和功能在生命代謝中占有特別重要的地位。亮氨酸是BCAA中唯一的生酮氨基酸,刺激胰島細(xì)胞釋放胰島素,和纈氨酸、異亮氨酸一起可以起到保護(hù)肌肉的作用。亮氨酸的主要氧化部位在肌肉,是合成機(jī)體蛋白質(zhì)的原料,可以抑制蛋白降解和促進(jìn)肌肉蛋白合成;對(duì)血紅蛋白合成和維持血糖水平以及激素的增加有重要作用;亮氨酸的缺乏可

2、能引起嚴(yán)重的缺乏癥狀如生長(zhǎng)的阻滯。而異亮氨酸是合成動(dòng)物體激素和酶類的原料,具有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和抑制其分解的作用。目前,國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)開(kāi)展了一些水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)Leu和Ile營(yíng)養(yǎng)需求的研究,確定了虱目魚(yú)(ChanoschanosForsskal)、斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon)、印度鯪(Cirrhinusmrigala)、草魚(yú)(Ce-nopharyngodonidellus)、建鯉(Cyprinuscarpiovar.Jian)、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)等多種魚(yú)蝦的亮氨酸和異亮氨酸需求量。

3、　　中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis),俗稱河蟹、大閘蟹,屬節(jié)肢動(dòng)物門甲殼綱,是我國(guó)特有的淡水珍品。　　目前,關(guān)于中華絨螯蟹對(duì)氨基酸需求的研究?jī)H限于賴氨酸、蛋氨酸和精氨酸。本試驗(yàn)以中華絨螯蟹幼蟹為研究對(duì)象,以幼蟹的生長(zhǎng)性能及肌肉必需氨基酸含量等為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究飼料中不同水平的Leu或Ile對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)的影響,旨在獲得中華絨螯蟹幼蟹對(duì)Leu和Ile的需要量,以期完善中華絨螯蟹對(duì)十種必需氨基酸需要量的數(shù)據(jù)庫(kù),為研制中華絨螯蟹營(yíng)養(yǎng)平衡的人工配合飼料提供理論依據(jù)。　　1材料與方法　　1.1試驗(yàn)用蟹　　試驗(yàn)蟹苗

4、購(gòu)自上海市崇明島長(zhǎng)江口中華絨螯蟹養(yǎng)殖基地,采用經(jīng)過(guò)沉淀、過(guò)濾后的天然池塘水進(jìn)行養(yǎng)殖。水泥池中暫養(yǎng)一周,挑取體重均一、附肢完整的幼蟹作為試驗(yàn)對(duì)象。采用底面為長(zhǎng)方形(60cm85cm,水容量300L)的白色塑料水箱,箱內(nèi)水深約30cm,每箱40只幼蟹,初始體重為(0.90±0.02)g,水箱內(nèi)放置足夠數(shù)量的X片及圓形PVC管作為隱蔽物?！　?.2試驗(yàn)飼料　　采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,為了使基礎(chǔ)飼料中目標(biāo)氨基酸(Leu或Ile)含量盡可能低,因此分別采用不同的飼料配方,以酪蛋白、明膠、魚(yú)粉為蛋白源,糊精、玉米淀粉

5、為糖源,魚(yú)油、豆油、卵磷脂為脂肪源制成基礎(chǔ)飼料。基礎(chǔ)飼料配方和營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表1,氨基酸組成模式參照王樹(shù)英和陳輝測(cè)定的河蟹肌肉氨基酸含量(表2)。每個(gè)試驗(yàn)分別設(shè)6個(gè)氨基酸濃度梯度,每個(gè)濃度3重復(fù)。飼料中Leu添加梯度為0、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%、2.0%,實(shí)測(cè)各組飼料Leu含量為0.87%、1.26%、1.64%、2.03%、2.39%和2.81%;飼料中Ile添加梯度為0、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%,實(shí)測(cè)各組飼料Ile含量為0.69%、1.21%、1.70%、2.19%、2.70%和

6、3.21%(表3)。　　在試驗(yàn)飼料制作時(shí),先將原料粉碎,使原料粉末能全部通過(guò)60目試驗(yàn)篩,再按比例充分混勻后加適量水?dāng)嚢?通過(guò)絞肉機(jī)擠成直徑1.5mm的長(zhǎng)條,風(fēng)干后,破碎成粒徑為(12)mm的破碎料,置于4℃冰箱內(nèi)密封保存?zhèn)溆?。　　　?.3飼養(yǎng)管理　　采用表觀飽食投喂法,每天于上午八點(diǎn)和下午五點(diǎn)投喂兩次,次日吸污并補(bǔ)充養(yǎng)殖用水。此外,每周定期測(cè)定水質(zhì)情況,水溫(2832)℃、溶解氧>5mg/L、氨氮<0.1mg/L、pH6.87.2,連續(xù)充氣增氧,實(shí)驗(yàn)周期60d?！　?.4樣品采集與分析　　試驗(yàn)期間,河蟹

7、因脫殼或相互殘殺死亡后及時(shí)撈出,并精確稱重,其增重部分不計(jì)入試驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)束后,停食24h,撈出全部河蟹,盡量瀝干水分,稱重。一部分烘干后作全蟹樣品,用于常規(guī)生化分析;一部分提取肌肉樣品,濾紙吸干水分后用于氨基酸含量的測(cè)定。測(cè)定指標(biāo)包括水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、灰分以及氨基酸含量,分別采用105℃恒重法、凱式定氮法、索氏抽提法、550℃馬福爐灼燒法以及氨基酸自動(dòng)分析儀?！　∮?jì)算公式:特定生長(zhǎng)率(SGR,%/d)＝(Ln結(jié)束時(shí)平均體重–Ln開(kāi)始時(shí)平均體重)/試驗(yàn)天數(shù)100;成活率(SR,%)=實(shí)驗(yàn)結(jié)束后試驗(yàn)蟹

8、數(shù)目/實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)試驗(yàn)蟹數(shù)目100。　　1.5數(shù)據(jù)分析　　試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,采用SPSS20.0軟件包對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-;EAA)、非必需氨基酸總量(∑NEAA)、氨基酸總量(TAA)有顯著性影響(P<0.05),對(duì)其他氨基酸影響不顯著(P