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1、鐵皮石斛莖節(jié)離體培養(yǎng)的研究【摘要】目的通過無(wú)菌莖段實(shí)現(xiàn)鐵皮石斛快速繁殖。方法將鐵皮石斛試管苗莖節(jié)接種于不同NAA濃度的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)，并在含不同激素配比和有機(jī)添加物的培養(yǎng)基上繼代和誘導(dǎo)生根。結(jié)果NAA0.4mg/L，6-BA5mg/L時(shí)鐵皮石斛腋芽萌發(fā)率達(dá)93.33%；NAA0.3mg/L，6-BA2mg/L時(shí)叢苗的生根率達(dá)96.67%，香蕉汁和土豆汁能夠顯著促進(jìn)叢生芽的增殖和壯苗生根。結(jié)論建立了適合鐵皮石斛莖段離體培養(yǎng)的快速繁殖體系?！娟P(guān)鍵詞】鐵皮石斛無(wú)菌莖節(jié)離體培養(yǎng)激素濃度有機(jī)添加物 Abstract:ObjectiveTodeveloparapidpropagationof
2、Dendrobiumcandidumusingtheasepticnodalsegmentsofshoots.MethodsAxenicnodalsegmentsinatedonMurashigeandSkoog(MS)basalmediumsupplementedediumcontainingdifferentconcentrationhormonesandorganicsusbstance.Results93.33%oftheaxenicnodalsegmentsofDendrobiumcandidumgerminatedonthemediumg/L,6-BA5mg/Land96.67%
3、ofexplantrootedonthemediumcontainingNAA0.3mg/L,6-BA2mg/L.Thegrootedbytheextractofbananaandpotato.ConclusionTheinvitropropagationofDendrobiumcandidumfromaxenicnodalsegmenthasbeenestablished. Keycandidum；Axenicnodalsegments；Invitropropagation；Concentrationofhormone；Organicsusbstance石斛最早見于《山海經(jīng)》，藥用始載于
4、《神農(nóng)本草經(jīng)》，其后，歷代諸家本草均予錄述。在《本草綱目》中被列為上品。至今石斛仍是中醫(yī)常用的滋陰清肺、生津止渴、養(yǎng)胃除煩之要藥，其應(yīng)用范圍更有擴(kuò)大之勢(shì)。近年研究發(fā)現(xiàn)石斛中含有石斛多糖［1］、生物堿［2～4］、鼓槌菲和毛蘭素［5］等化合物，以及7種人體必需氨基酸［6］和多種微量元素?，F(xiàn)代藥理表明石斛具有抗腫瘤［7］、抗衰老、增強(qiáng)免疫力［8］等功能，對(duì)心血管、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和眼科疾病均有明顯的治療作用［9］。鐵皮石斛Dendrobiumcandidum是現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》收載的5種常用石斛之一，是石斛類藥材的上品。鐵皮石斛又名黑節(jié)草、鐵皮吊蘭、鐵皮蘭，屬蘭科石斛屬附生植物。加工后的鐵皮石斛
5、又被稱為鐵皮楓斗，市場(chǎng)價(jià)格昂貴，是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值和醫(yī)用價(jià)值都很高的名貴中藥。然而由于近年來(lái)過度采伐、生態(tài)環(huán)境破壞等原因，鐵皮石斛野生資源日漸匱竭，而其對(duì)生境要求苛刻、自然繁殖率低等因素進(jìn)一步將鐵皮石斛推向滅絕的邊緣，現(xiàn)在已被列為瀕危保護(hù)的中藥品種［10］。利用鐵皮石斛體外快繁是解決目前鐵皮石斛資源與需求矛盾的重要途徑。目前關(guān)于鐵皮石斛的研究主要集中在原球莖增殖、分化等方面［11,12］，以莖節(jié)為材料，實(shí)現(xiàn)鐵皮石斛體外快繁的研究尚鮮見報(bào)道。本研究擬通過無(wú)菌莖段的離體培養(yǎng)，建立適合鐵皮石斛的快速繁殖體系?！ ?材料與方法 1.1材料 選擇與處理以本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)保存的生長(zhǎng)旺盛、莖節(jié)粗壯的鐵皮石斛試
6、管苗為材料，切成長(zhǎng)度為1～1.5cm帶1～2個(gè)腋芽的小莖段?！ ?.2腋芽萌發(fā)將無(wú)菌莖段接種于添加30g·L-1蔗糖、8.0g·L-1瓊脂、pH為5.6的MS培養(yǎng)基上。其中6-BA5mg·L-1，并加入不同濃度的NAA（0～0.8mg·L-1）。培養(yǎng)溫度為25℃，光照強(qiáng)度為2000lux，光照時(shí)間為12h·d-1。定期觀察不同濃度生長(zhǎng)素對(duì)鐵皮石斛腋芽萌發(fā)的作用?！ ?.3叢生芽增殖將已萌發(fā)的腋芽接種于MS+30g·L-1蔗糖+NAA0.4mg·L-1+6-BA5mg·L-1，并添加200g·L-1的香蕉、土豆、西瓜、豆芽的增殖培養(yǎng)基上，并以不加天然添加物的培養(yǎng)基為對(duì)照，pH均為5.6，考察不
7、同提取物對(duì)叢生芽增殖的影響。培養(yǎng)條件同上?！ ?.4壯苗生根將生長(zhǎng)健壯，株高為2cm左右的叢生苗接種于MS+30g·L-1蔗糖+8.0g·L-1瓊脂，激素濃度分別為NAA0.1，0.3，0.5mg·L-1和6-BA2，4mg·L-1或MS+30g·L-1蔗糖+NAA0.3mg·L-1+6-BA2mg·L-1+8.0g·L-1瓊脂，添加200g·L-1不同提取物的生根培養(yǎng)基上，進(jìn)行誘導(dǎo)生根和壯苗試驗(yàn)。培養(yǎng)條件同
