ki67蛋白在人皮膚血管瘤組織中的表達(dá)及意義

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1、Ki67蛋白在人皮膚血管瘤組織中的表達(dá)及意義【摘要】目的：探討Ki67蛋白在人皮膚血管瘤組織中的表達(dá)及在血管瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的意義。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了血管瘤增生期、退化期以及正常皮膚組織中Ki67蛋白的表達(dá)水平,采用HPIAS1000圖文報(bào)告管理系統(tǒng)對(duì)Ki67蛋白的表達(dá)進(jìn)行定量分析，并用SPSS11.5軟件對(duì)各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽(yáng)性顆粒平均光密度、陽(yáng)性面積率做單因素方差分析和SNK(q)檢驗(yàn)。結(jié)果：Ki67蛋白在增生期血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞呈高表達(dá),退化期呈低表達(dá)，增生期血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞與退化期比較,Ki67蛋白的表達(dá)差異有顯著性(P<0.05);

2、退化期血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞Ki67蛋白表達(dá)水平與正常組織相比，差異無(wú)顯著性(P>0.01)。結(jié)論：Ki67可作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。【關(guān)鍵詞】皮膚血管瘤;Ki67蛋白;免疫組織化學(xué);統(tǒng)計(jì)分析12血管瘤是嬰幼兒中發(fā)病率最高的一種以內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖為組織學(xué)特征的腫瘤。新生兒患病率為1.1%～3.8%，至1歲時(shí)可高達(dá)10%。雖然部分血管瘤可以自行消退，但仍有部分未退化的血管瘤可持續(xù)發(fā)展或其生長(zhǎng)部位特殊而具有一定的危險(xiǎn)性，如果位于顏面、顱內(nèi)及口腔可引起明顯的畸形及功能障礙，如持續(xù)發(fā)展可產(chǎn)生潰瘍、出血、感染等一系列并發(fā)癥;位于顏面及口腔的血管瘤可引起明顯的外觀畸形

3、及功能障礙，嚴(yán)重影響患者的身心健康[1～3]。臨床治療尤其對(duì)于大面積血管瘤的治療尚缺乏確切、迅速有效的方法。目前為止，關(guān)于血管瘤發(fā)生、發(fā)展及退化的機(jī)制尚未完全明了,因此給血管瘤的診斷和治療帶來(lái)許多困難。我們?cè)噲D尋找引起皮膚血管瘤持續(xù)發(fā)展和增生的相關(guān)因子和因素，為治療血管瘤提供理論依據(jù)?！　∧壳把芯勘砻?，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡抑制和增殖能力的增強(qiáng)密切相關(guān)。Ki67是一種與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原,是近年來(lái)研究最多、最具有前途的細(xì)胞增生標(biāo)記。其功能被認(rèn)為與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)Ki67抗原是一種表達(dá)于細(xì)胞的增殖期核抗原,是一種核內(nèi)蛋白質(zhì),與細(xì)胞增殖有關(guān),靜止

4、期細(xì)胞表達(dá)很少,因此可作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)[4～6]?！　”狙芯客ㄟ^(guò)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和圖像分析技術(shù)檢測(cè)血管瘤增生期、退化期以及正常皮膚織中Ki67蛋白的表達(dá)水平，探討Ki67蛋白在血管瘤增生過(guò)程中的作用機(jī)制，為臨床上治療血管瘤提供理論依據(jù)?！　?材料和方法　　1.1材料　　1.1.1材料來(lái)源12收集武漢大學(xué)人民醫(yī)院病理科及武漢大學(xué)人民整形外科2000～2007年皮膚血管瘤存檔蠟塊50例，其中男性26例，女性24例。所有切片經(jīng)病理學(xué)專家診斷為血管瘤。這些血管瘤所在的部位有頭皮、前額、眼瞼、耳背、頸部、背部、上臂、大腿、手和足的皮膚等?；颊咝g(shù)前均未做任

5、何輔助性治療?！　?.1.2材料分組常規(guī)HE染色，按Mulliken分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分組：增生期血管瘤27例，退化期血管瘤23例，另取瘤組織周圍正常皮膚組織5例作對(duì)照?！　?.2主要試劑和儀器　　1.2.1主要試劑①即用型鼠抗人Ki67單克隆抗體(北京中山生物技術(shù)有限公司);②超敏即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒(福州邁新公司);③DAB顯色試盒及多聚賴氨酸(北京中山生物技術(shù)有限公司)。　　1.2.2主要儀器①YWY781型醫(yī)用微波儀，250W，50Hz(浙江臨安電子器材廠生產(chǎn));②家用高壓鍋;③電熱恒溫干燥箱(湖北黃石醫(yī)療器械廠生產(chǎn));④顯微鏡成像系統(tǒng)(Olym

6、pus公司)?！　?.3方法12　　1.3.1蠟塊切片厚5μm，貼片于涂有多聚賴氨酸的潔凈載玻片上，置于烤箱烤干待用。常規(guī)HE染色?！　?.3.2免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)Ki67抗原具體步驟：①4μm組織切片常規(guī)脫蠟至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;②抗原修復(fù)(檸檬酸緩沖液微波抗原修復(fù)法)，室溫自然冷卻后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%過(guò)氧化氫，37℃濕盒孵育10min以抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃濕盒孵育10min以減少非特異性背景;⑤甩去多余血清，

7、分別滴加一抗，4℃孵育過(guò)夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素標(biāo)記的二抗37℃濕盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑦滴加鏈霉素抗生物素蛋白過(guò)氧化物復(fù)合物37℃濕盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑧滴加新鮮配置的DAB顯色液顯色，光鏡下控制反應(yīng)時(shí)間(約3～5min)，自來(lái)水沖洗終止反應(yīng);⑨蘇木素復(fù)染，流水沖洗，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，流水沖洗，0.1%氨水返藍(lán);⑩梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢;用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照組，購(gòu)買的陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照組?！　?.

8、3.3免疫組織化學(xué)結(jié)果判