尿液蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法及臨床意義

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1、尿液蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法及臨床意義【摘要】正常人尿液中含有微量的蛋白質(zhì),每天排出量在150mg以下,其中以白蛋白占多數(shù),隨不同病種有一定量的球蛋白和其它蛋白。隨著腎病科研工作的開(kāi)展,以觀察患者每天排出蛋白質(zhì)的量以示病情的變化,因此尿液蛋白質(zhì)定量在臨床上有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值,已成為醫(yī)院化驗(yàn)室常規(guī)的檢驗(yàn)項(xiàng)目?！娟P(guān)鍵詞】尿液蛋白質(zhì)檢測(cè)1麗春紅-S法尿液標(biāo)本中的蛋白質(zhì)與麗春紅-S染料混勻后一起被三氯醋酸沉淀，將沉淀物溶解于堿性溶液中，此時(shí)溶液呈紫色，顯色深度與蛋白質(zhì)濃度成正比。1.1試劑三氯乙酸-麗春紅-S試劑原液：稱(chēng)取麗春紅-S1

2、.0g，加入到1000ml300g／L三氯乙酸中溶解。三氯乙酸-麗春紅-S試劑應(yīng)用液：將原液用蒸餾水按1：10稀釋?zhuān)胖檬覝胤€(wěn)定數(shù)月。蛋白定性試劑。0.2mol／L氫氧化鈉溶液。蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：把定值蛋白稀釋成不同的濃度，按操作測(cè)定其吸光度，以吸光度為橫坐標(biāo)，以稀釋后的蛋白濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。1.2操作先做尿蛋白定性試驗(yàn)，以適當(dāng)稀釋標(biāo)本。在試管中加入100μ6l標(biāo)本，再加入1ml三氯乙酸一麗春紅-S應(yīng)用液，混勻后以3000r／min離心15分鐘，吸去上清液，倒置于潔凈濾紙上。在沉淀中加入0．2mol／L氫氧化鈉溶

3、液lml，用560nm波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的蛋白含量。1.3參考值46.5±18．1mg／L1.4注意事項(xiàng)：尿液如被稀釋?xiě)?yīng)乘以稀釋倍數(shù)。尿中血紅蛋白含量>5mg／L時(shí)影響結(jié)果。離心后上清必須全部棄去，若沉淀中夾帶有麗春紅-S影響比色結(jié)果。2雙縮脲比色法以磷鎢酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白質(zhì)，在堿性介質(zhì)中蛋白質(zhì)與銅離子形成紫紅色絡(luò)合物，與標(biāo)準(zhǔn)液比色即可得出尿中蛋白質(zhì)的含量。2.1試劑蛋白沉淀液：稱(chēng)取磷鎢酸7.5g，加入30ml蒸餾水、95％乙醇385ml、濃鹽酸25ml。雙縮脲液：(1)稱(chēng)取枸櫞酸鈉34．6g，

4、無(wú)水碳酸鈉20g，加入120ml蒸餾水使其溶解；(2)稱(chēng)取硫酸銅3．46g，加入20ml蒸餾水使其溶解。將(1)、(2)混合，加入蒸餾水至200ml，備用。0．75mol／L氫氧化鈉溶液。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(1．5g／L)：稱(chēng)取150mg結(jié)晶型凍干人血清白蛋白，加入100ml的3g／L苯甲酸溶液溶解。2.2操作取5ml24小時(shí)混合尿液，2500～3000r／min離心5分鐘，取上清備檢。混勻放入56℃水浴15分鐘，取出后離心，傾上清留沉淀。0．75mol／1NaOH1．51．51．56雙縮脲液0．1　0．1　0．1各管混勻置

5、室溫10分鐘，在540nm波長(zhǎng)，以空白管調(diào)“0”比色。2.3結(jié)果計(jì)算尿蛋白含量(g／L)=測(cè)定管吸光度÷標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×1．52.4參考值<150mg／24h尿、2.5注意事項(xiàng)：記錄24小時(shí)尿量，將尿液混合后再離心。先做尿標(biāo)本蛋白定性試驗(yàn)，若為陽(yáng)性再做本試驗(yàn)。尿蛋白濃度較高時(shí)應(yīng)稀釋標(biāo)本再操作。若疑有藥物干擾時(shí)，可將尿蛋白沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌3次再操作。3考馬斯亮藍(lán)法在酸性介質(zhì)中考馬斯亮藍(lán)與尿液中的蛋白質(zhì)NH3+基團(tuán)結(jié)合，發(fā)生由棕色到藍(lán)色的顏色變化，光譜吸收峰由465nm移至595nm。與標(biāo)準(zhǔn)液相比即可測(cè)出尿蛋白質(zhì)

6、含量。3.1試劑考馬斯亮藍(lán)溶液：(1)稱(chēng)取75mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于40ml甲醇中；(2)加入蒸餾水800ml、85％的濃硫酸100ml、濃鹽酸5ml；(3)稱(chēng)取30mg十二烷基磺酸鈉，溶于(2)中；(4)加蒸餾水至1000ml，用濾紙過(guò)濾至棕色瓶中，室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(1g/L)以3g/L苯甲酸溶液稀釋蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。3.2操作留取24小時(shí)尿標(biāo)本混勻，取5ml尿液離心后取上清備檢。室溫放置5分鐘，以空白管調(diào)“0”，波長(zhǎng)600nm讀取光密度。63.3結(jié)果計(jì)算尿蛋白質(zhì)含量(g／L)=測(cè)定管吸光度÷標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×1．

7、03.4參考值(20．6～172．6)mg／24h3.5注意事項(xiàng)：考馬斯亮藍(lán)溶液要定期新鮮配制，過(guò)濾后才可使用。測(cè)定標(biāo)本時(shí)應(yīng)同時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)管。尿中的水楊酸類(lèi)藥物、麝香草酚和去污劑等可產(chǎn)生顏色干擾。尿標(biāo)本蛋白質(zhì)定性試驗(yàn)在(+++)以上需稀釋后測(cè)定。4微量蛋白檢驗(yàn)?zāi)蛞何⒘康鞍装ɡw維蛋白降解產(chǎn)物、尿α1微球蛋白、尿α2微球蛋白、微量白蛋白等。4.1纖維蛋白降解產(chǎn)物(fibrinogendegradationproducts，F(xiàn)DP)FDP是纖維蛋白(原)經(jīng)纖溶酶作用降解的產(chǎn)物。其檢測(cè)現(xiàn)多用免疫學(xué)方法：免疫膠乳凝集法和

8、ELISA法。正常人尿液無(wú)FDP。當(dāng)腎臟及尿路局部炎癥時(shí)，其滲出的少量纖維蛋白經(jīng)纖維蛋白溶解酶降解，產(chǎn)生FDP。當(dāng)腎小球病變至腎小球?yàn)V過(guò)膜通透性增高時(shí)，F(xiàn)DP碎片排于尿中。血液FDP增高時(shí)，尿液FDP排泄也增多。4.2α1-微球蛋白α1-微球蛋白(α1-microglobulin，α1-M)是一種小分子量糖蛋白，由肝臟與淋巴細(xì)胞合成，廣泛存在于