色譜分析樣品前處理技術(shù)-spe固相萃取法原理與選擇

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1、樣品前處理技術(shù)固相萃取技術(shù)盧志浩奧秘科技有限公司luzh@aumigrp.com客服：0531-8856-3956前言試樣的前處理是樣品分析中至關(guān)重要的一環(huán)，傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理方法往往手續(xù)復(fù)雜、耗時。具有溶劑消耗量少、對樣品污染少、預(yù)處理時間短等優(yōu)點的固相萃取技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于環(huán)境的監(jiān)測與分析中，成為一種常規(guī)分析方法。固相萃取(SPE)概念SPE：SolidPhaseExtraction是一種液相色譜分離，利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物與干擾化合物分離，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。HPLC與SPE比較為什么用SPE？從基質(zhì)中消除干擾物保護(hù)色譜柱

2、減少樣品與溶劑使用量縮短處理時間提高回收率固相萃取使用要點1.準(zhǔn)確了解樣品物理及化學(xué)特性2.選擇合適的樣品凈化機理-保留被分析物，洗脫污染物-保留污染物，洗脫被分析物3.選擇適當(dāng)?shù)腟PE產(chǎn)品-填料類型、柱容量、配套附件4.選擇老化及洗脫溶劑流動相①②固相萃取的模式及原理①陰離子交換②陽離子交換反相固相萃取正相固相萃取離子交換固相萃取固相萃取的分類正相固相萃取所用的吸附劑都是極性的．取決于目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)與吸附劑表面的極性官能團(tuán)之間相互作用，其中包括了氫鍵，π—π鍵相互作用，偶極－偶極相互作用和偶極－誘導(dǎo)偶極相互作用以及其他的極性－極性作用。固相萃取

3、的分類反相固相萃取所用的吸附劑和目標(biāo)化合物通常是非極性的或極性較弱的，主要是靠非極性－非極性相互作用，是范德華力或色散力。離子交換固相萃取是靠目標(biāo)化合物與吸附劑之間的相互作用是靜電吸引力。固相萃取選擇分離模式和吸附劑時還要考慮以下幾點：1.目標(biāo)化合物在極性或非極性溶劑中的溶解度，這主要涉及淋洗液的選擇。2.目標(biāo)化合物有無可能離子化（可用調(diào)節(jié)pH值實現(xiàn)離子化），從而決定是否采用離子交換固相萃取。3.目標(biāo)化合物有無可能與吸附劑形成共價鍵，如形成共價鍵，在洗脫時可能會遇到麻煩。4.非目標(biāo)化合物與目標(biāo)化合物在吸附劑上吸附點上的競爭程度，這關(guān)系到目標(biāo)化合物與干擾化

4、合物是否能很好分離。SPE產(chǎn)品選擇指導(dǎo)反相固相萃取流動相：極性（水溶液）或中等極性固定相：非極性分離對象：中等到非極性物質(zhì)反相固相萃取原理分析物中的CH鍵+硅膠表面官能團(tuán)→吸附→極性溶液中的弱有機分析物→保留在SPE。用非極性溶劑解吸吸附在固定相中的目標(biāo)物質(zhì)。常用反相固相萃取柱BauloTMSPE小柱50um球形高效硅膠，顆粒分布窄，傳質(zhì)均勻99.9％高純硅膠，雜質(zhì)干擾小單層C18鍵合填料，全封尾，更好的重現(xiàn)性正相固相萃取流動相：非極性、中等極性固定相：極性。分析物質(zhì)：極性、中等極性、非極性正相固相萃取原理保留取決于分析物的極性官能團(tuán)與吸附劑表面的極性官

5、能團(tuán)之間的相互作用。用比樣品本身更強極性的溶劑洗脫吸附的分析物質(zhì)。常用正相固相萃取柱①極性官能團(tuán)鍵合硅膠-CN，-NH2，-Diol②極性吸附物質(zhì)BauloTM-Silica，BauloTM-Florisil，BauloTM-Alumina溶劑極性圖己烷異辛烷四氯化碳氯仿二氯甲烷四氫呋喃乙醚乙酸乙酯丙酮乙腈異丙醇甲醇水反相溶劑洗脫強度正相溶劑洗脫強度離子交換固相萃取適用于帶有電荷的化合物（水溶液、有機溶液）。原理：靜電吸引，化合物上的帶電荷基團(tuán)與鍵合硅膠上的帶電荷基團(tuán)之間的吸引。分為：陰離子交換和陽離子交換。陰離子（負(fù)電荷）交換SAX、NH2：脂肪族季銨

6、類鹽+硅膠陽離子交換SCX：磺酸基；WCX：羧酸基團(tuán)離子交換固相萃取法的要求通用SPE萃取程序反相填料A.老化1.用3-5ml甲醇沖洗填料2.用3-5ml水或緩沖液沖洗，上樣前勿讓填料流干。B.上樣3.樣品加到柱床上，以1-5ml/min.低流速通過填料。若所需樣品不會被保留，此時應(yīng)收集樣品作分析。C.沖洗4.如果樣品被保留，使用約5ml極性溶劑(如水、緩沖液或有機溶劑/水混合液)將弱保留干擾物洗出。D.用1-2ml非極性溶劑將所需物質(zhì)洗脫，收集用于分析。通用SPE萃取程序正相填料A.老化1.用3-5ml非極性溶劑沖洗填料B.上樣2.樣品加到柱床上，以1

7、-5ml/min.低流速通過填料。若所需樣品不會被保留，此時應(yīng)收集樣品作分析。C.沖洗4.如果樣品被保留，使用約5ml非極性溶劑將弱保留干擾物洗出。D.用1-2ml極性溶劑將所需物質(zhì)洗脫，收集用于分析。通用SPE萃取程序離子交換填料A.老化1。用5ml去離子水或低離子強度緩沖液(0.001M-0.01M)沖洗填料B.上樣2.樣品加到柱床上，以1-5ml/min.低流速通過填料。若所需樣品不會被保留，此時應(yīng)收集樣品作分析。C.沖洗3.如果樣品被保留，使用約5ml去離子水或低離子強度緩沖液將弱保留干擾物洗出。D.用1-5ml高濃度緩沖液(0.1-0.5M)，

8、或以緩沖液改變pH，使得樣品不再離子化，將所需物質(zhì)洗脫，收集用于分析。操作程序活