熒光分光光度計(分子熒光)

《熒光分光光度計(分子熒光)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、熒光分光光度計（分子熒光）··Fluores_cence·?··1樓1、基本原理???在室溫下分子大都處在基態(tài)的最低振動能級，當受到光的照射時，便吸收與它的特征頻率相一致的光線，其中某些電子由原來的基態(tài)能級躍遷到第一電子激發(fā)態(tài)或更高電子激發(fā)態(tài)中的各個不同振動能級，這就是在分光光度法中所述的吸光現(xiàn)象。躍遷到較高能級的分子，很快通過振動弛豫、內(nèi)轉(zhuǎn)換等方式釋放能量后下降到第一電子激發(fā)態(tài)的最低振動能級，能量的這種轉(zhuǎn)移形式，稱為無輻射躍遷。再由第一電子激發(fā)態(tài)的最低振動能級下降到基態(tài)的任何振動能級，并以光的形式放出它們所吸收的能量，這種光便稱為

2、熒光。???熒光分析法具有靈敏度高、選擇性強、需樣量少和方法簡便等優(yōu)點，它的測定下限通常比分光光度法低2~4個數(shù)量級，在生化分析中的應用較廣泛。???熒光分析法是測定物質(zhì)吸收了一定頻率的光以后，物質(zhì)本身所發(fā)射的光的強度。物質(zhì)吸收的光，稱為激發(fā)光；物質(zhì)受激后所發(fā)射的光，稱為發(fā)射光或熒光。如果將激發(fā)光用單色器分光后，連續(xù)測定相應的熒光的強度所得到的曲線，稱為該熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜（excitationspectrum）。實際上熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜就是它的吸收光譜。在激發(fā)光譜中最大吸收處的波長處，固定波長和強度，檢測物質(zhì)所發(fā)射的熒光的波長和強

3、度，所得到的曲線稱為該物質(zhì)的熒光發(fā)射光譜，簡稱熒光光譜（fluorescencespectrum）。在建立熒光分析法時，需根據(jù)熒光光譜來選擇適當?shù)臏y定波長。激發(fā)光譜和熒光光譜是熒光物質(zhì)定性的依據(jù)。???某些物質(zhì)的分子能吸收能量而發(fā)射出熒光，根據(jù)熒光的光譜和熒光強度，對物質(zhì)進行定性或定量的方法，稱為熒光分析法（fluorescenceanalysis）。???對于某一熒光物質(zhì)的稀溶液，在一定波長和一定強度的入射光照射下，當液層的厚度不變時，所發(fā)生的熒光強度和該溶液的濃度成正比，這是熒光定量分析的基礎。2、檢測熒光的儀器???測定熒光可

4、用熒光計和熒光分光光度計，其二者的結(jié)構(gòu)復雜程度不同，但其基本結(jié)構(gòu)是相似的。???由激發(fā)光源發(fā)出的光，經(jīng)激發(fā)單色器讓特征波長的激發(fā)光通過，照射到樣品杯里的樣品使熒光物質(zhì)發(fā)射出熒光，再經(jīng)發(fā)射單色器對待測物質(zhì)所產(chǎn)生的熒光進行分光或者過濾，使特征熒光照射到檢測器（一般使用光電倍增管）產(chǎn)生光電流，經(jīng)電路放大、AD轉(zhuǎn)換、數(shù)字處理等方式顯示出相應的熒光值。顯示系統(tǒng)儀器的主要部件介紹：???1.激發(fā)光源：連續(xù)氙燈、脈沖氙燈、單波長的

5、LED燈、高壓汞燈、溴鎢燈、特殊專用時也可以使用氘燈。目前市場上的中高端熒光分光光度計一般都使用氙燈，如日立的F4500、F4600、F7000，上海棱光技術(shù)有限公司的F96Pro、F97、F97Pro、F97XP，天津港東的F380、F320、F280等等用的就是連續(xù)氙燈；脈沖氙燈有瓦里安的一款型號在使用；LED燈作為激發(fā)光的主要有上海棱光技術(shù)有限公司的F96S、F95S、F93等熒光分光光度計。其他光源作為激發(fā)光來使用的相對較少。???2.激發(fā)單色器：其作用是帥選出適合樣品的激發(fā)光。激發(fā)單色器主要有濾光片模式和光柵模式：使用濾光

6、片的結(jié)構(gòu)相對簡單，但是可選用的激發(fā)光源稍少；使用光柵模式的單色器結(jié)構(gòu)就比較復雜，但是相應的可選的激發(fā)光就比較多。???3.發(fā)射單色器：其作用是用來分析樣品發(fā)射出來的熒光。發(fā)射單色器也有濾光片模式和光柵模式。使用濾光片模式的儀器可檢測的樣品單一，一般用于專用的熒光儀；使用光柵模式的儀器一般是通用儀器，可以根據(jù)不用樣品發(fā)出的熒光做出相應的分光。光柵結(jié)構(gòu)的儀器一般結(jié)構(gòu)比較復雜，無論是激發(fā)單色器還是發(fā)射單色器，都要求有比較高的精度。頂2·2011-04-1513:45·回復··Fluores_cence·?··2樓???4.接收系統(tǒng)：熒光分

7、光光度計的接收器一般使用光電倍增管來接收樣品發(fā)出的熒光。這是因為熒光的信號一般都很微弱，使用其他的如光電池接收器來接收熒光效果比較差。熒光的一個重要指標就是信噪比，使用其他的接收器會對這項指標產(chǎn)生比較大的影響。????5.顯示系統(tǒng)：以前有指針式，現(xiàn)在主要有LED數(shù)碼管、液晶顯示。高端的如日立的F4500、F7000和上海棱光的F97系列熒光分光光度計都沒有顯示系統(tǒng)，他們主要通過聯(lián)接電腦PC機來進行操作。????6.樣品系統(tǒng)：樣品系統(tǒng)是否齊全是可以影響一款儀器的應用范圍的，功能齊全的樣品系統(tǒng)可以更有效地發(fā)揮出儀器應有的功能。3、熒光分

8、析法的定性和定量1.定性分析???熒光物質(zhì)特性的光譜包括激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜兩種。在分光光度法中，被測物質(zhì)一般只有一種特征的吸收光譜，而熒光分析法能測出多種特征光譜，因此，其鑒定物質(zhì)的可靠性較強。當然，必須在標準品對照下進行定性。?