促紅細(xì)胞生成素對缺氧缺血新生大鼠腦

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1、促紅細(xì)胞生成素對缺氧缺血新生大鼠腦【摘要】目的探討重組人紅細(xì)胞生成素(rhEPO)對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)、腦水腫及NO、MDA含量的影響。方法選用7日齡DA含量。結(jié)果假手術(shù)組腦的含水量及NO和MDA含量均明顯低于HIBD組，差異有顯著性(P<0.05)；rhEPO治療組測定值明顯低于生理鹽水對照組(P<0.05)，而與硫酸鎂治療組相比差異無顯著性(P＞0.05)。結(jié)論促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)和硫酸鎂一樣對腦缺氧缺血具有保護(hù)作用，可以減輕腦水腫，抑制自由基的生成?！娟P(guān)鍵詞】鼠；缺氧缺血性腦損傷；促紅細(xì)胞生成素；腦水腫；一氧化氮；丙二醛【Abstra

2、ct】ObjectiveToobservetheeffectsofrebinanthumanerythropoietin(rhEPO)onthecerebraledemaandthecontentsofNO，MDAofthehypoxic-ischemicratbrain.Methods80infantgSO4treatedgroup.Eachratinthelast3grouplytakenoutfromeachgrouptoobservethepathologicsection，andtomeasurethecontentsof-operatedcontrolgroupa，

3、andinhibittheproductionfreeradical.【Keyicbraindamage；erythropoietin；cerebraledema；NO；MDA圍生期窒息所致的缺氧缺血性腦損傷(HIBD)是引起新生兒死亡或其神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙的主要原因。因此，積極探索安全、合理、有效的治療方案是當(dāng)今研究的熱點。筆者應(yīng)用促紅細(xì)胞生成素治療HIBD動物模型，觀察大鼠腦組織中一氧化氮（NO）和丙二醛(MDA)水平及其對腦水腫的影響，旨在對促紅細(xì)胞生成素的作用機(jī)制作進(jìn)一步探討，并為臨床治療HIBD提供理論依據(jù)。1材料與方法1.1實驗動物及分組選用健康7日齡DA檢測試劑盒均

4、由南京建成生物工程研究所提供。1.3方法1.3.1模型制備乙醚麻醉后取頸正中切口，分離并用絲線結(jié)扎右側(cè)頸總動脈后縫合皮膚，術(shù)后恢復(fù)2h，然后置于37℃水浴且通入8％氧氣和92％氮氣的混合氣體的密閉缺氧箱中缺氧2h，即制成缺氧缺血性腦病模型［1］。其模型檢驗依據(jù)腦組織的病理改變。1.3.2各組處理方法假手術(shù)組只分離右側(cè)頸總動脈，不結(jié)扎、不缺氧，亦不給予藥物干預(yù)；生理鹽水對照組制成模型前30min腹腔注射生理鹽水0.5ml/10g；rhEPO治療組在制成模型前30min腹腔注射rhEPO3000u/kg；硫酸鎂治療組則給予硫酸鎂100mg/kg腹腔注射。上述動物均回籠飼養(yǎng)，48h后

5、斷頭處死，取右側(cè)大腦半球。1.3.3標(biāo)本的獲取和結(jié)果的檢測（1）電子天平精確稱量右側(cè)大腦半球重量（濕重），將腦置于180℃恒溫烤箱中烘干48h至恒重稱重（干重），計算腦的含水量％＝（濕重－干重）／濕重×100％；（2）取右側(cè)大腦半球皮質(zhì)100mg，按1g∶10ml加入冰鹽水作為勻漿介質(zhì)，用研缽在冰水浴中研磨10min，以3000r/min的速度離心15min，取上清液，即制成10％腦組織勻漿。NO含量用硝酸還原酶法測定，MDA含量用改良的硫代巴比妥酸法測定。勻漿蛋白含量用雙縮脲法測定。嚴(yán)格按照使用說明操作；（3）取右側(cè)大腦半球，10％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切取中級至視交叉

6、處組織腦組織切片(6μm)，H-E染色，觀察病理學(xué)改變。1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用方差分析，所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1病理改變(1)假手術(shù)組：外觀顯示大鼠腦膜血管無擴(kuò)張，腦組織無水腫。光鏡下顯示腦各部位結(jié)構(gòu)及層次清楚，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰完整。(2)生理鹽水對照組：肉眼見大鼠腦膜血管中度擴(kuò)張，組織極度水腫。鏡下顯示腦各部位結(jié)構(gòu)及層次紊亂，細(xì)胞水腫明顯，毛細(xì)血管周圍間隙增寬，神經(jīng)纖維疏松。部分神經(jīng)細(xì)胞固縮、細(xì)胞質(zhì)深染，提示神經(jīng)元變性；部分細(xì)胞嗜酸變性提示細(xì)胞壞死。（3）兩干預(yù)組：外觀顯示大鼠腦膜血管輕度擴(kuò)張，腦組織輕度水腫。光鏡下顯示腦

7、各部位結(jié)構(gòu)及層次較生理鹽水對照組清楚，細(xì)胞輕度水腫。神經(jīng)元變性及脫失較生理鹽水對照組減輕。2.2各組腦組織含水量與假手術(shù)組比較，生理鹽水對照組腦含水量明顯增加（P<0.05），EPO治療組與生理鹽水對照組比較，腦含水量明顯減少（P<0.05），EPO治療組和硫酸鎂治療組二者差異無顯著性（P＞0.05）。表1各組腦組織的含水量（x±s）2.3各組腦組織的MDA和NO含量與假手術(shù)組比較，生理鹽水對照組腦皮質(zhì)MDA、NO含量明顯增加（P<0.05），EPO治療組與生理鹽水對照組比