附子中新烏頭堿的含量測定

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1、附子中新烏頭堿的含量測定作者：賈金艷，彭小冰，沈洲卿，楊衛(wèi)平【摘要】　　目的建立以高效液相色譜法測定附子中新烏頭堿含量的方法。方法采用-C18色譜柱(5μm,4.6mm×250mm)，以甲醇－水－三乙胺（75∶25∶0.033）為流動相，流速為1.0ml·min-1，檢測波長為233nm，柱溫為30℃。結(jié)果新烏頭堿在0.0464～0.3248μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率為100.7%，RSD=2.19%。結(jié)論該方法操作簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于附子中新烏頭堿的含量測定?！娟P(guān)

2、鍵詞】附子；新烏頭堿；高效液相色譜法附子為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliDebx.子根的加工品，具有回陽救逆、補(bǔ)火助陽、逐風(fēng)寒濕邪的功效［1］。附子的主要成分是烏頭類生物堿，可分為單酯類、雙酯類和胺基醇類生物堿。其中以雙酯型類生物堿如烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿成分毒性較大，但又同時是附子的藥性成分。歷代醫(yī)家都非常重視附子的毒性及其用量［2］。為保證用藥的安全性，本文在參考有關(guān)　　2.2.2樣品溶液的制備精密稱取生附子粉末（40目）約1.4g，置于具塞三角錐形瓶中，加入濃氨水2ml

3、，浸潤0.5h,再加75ml乙醚搖勻，放置過夜，超聲（功率500in,過濾，再以25ml乙醚分次洗滌藥渣，過濾，合并濾液和洗液，45℃水浴揮干，0.037％鹽酸甲醇溶液溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?5ml，搖勻，臨用前用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試樣品溶液。　　2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取“2.2.1”項(xiàng)下制得的對照品溶液，均進(jìn)樣5μl，在233nm處檢測，以峰面積值（A）對進(jìn)樣量（C）進(jìn)行線形回歸，得回歸方程為：A=8625582C-142.3115，r＝0.9999（n=7），結(jié)果表明,在0.0464～0.

4、3248μg范圍內(nèi)新烏頭堿峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系?！　?.4精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一供試樣品溶液5μl注入高效液相色譜儀,重復(fù)進(jìn)樣6次，測得新烏頭堿的峰面積，RSD=1.52％。結(jié)果表明儀器精密度良好?！　?.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取放置0，2，4，6，8h的樣品溶液5μl分別注入高效液相色譜儀，測得相應(yīng)的峰面積，RSD=2.19％。結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。　　2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同一藥材6份按“2.2.2”項(xiàng)下供試品的制備方法制備，分別吸取上述樣品溶液5μl注入高效液相色譜儀，

5、測其峰面積并計(jì)算含量，RSD=2.06％?！　?.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量樣品（約0.7g）9份，分別精密加入新烏頭堿對照品溶液適量使其中新烏頭堿含量為樣品中新烏頭堿含量的80%（3份）、100%（3份）、120%（3份）。按“2.2.2”項(xiàng)制備，按上述色譜條件測定，并計(jì)算新烏頭堿含量及RSD值。結(jié)果見表1。表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）　　2.8樣品含量測定對生附子、白附片、黑附子3種藥材分別按“樣品溶液的制備”方法處理，依法測定。結(jié)果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果（略）　　3討論　　通過對3種不同

6、炮制方法所制成的附子中新烏頭堿的含量測定可知，不同炮制方法的附子中新烏頭堿的含量差別較大，其中生附子中新烏頭堿的含量較高?！　”緦?shí)驗(yàn)中曾進(jìn)行了流動相系統(tǒng)的優(yōu)化研究，比較了乙腈－0.03％乙二胺（46∶54），乙腈－0.03％乙二胺（40∶60），乙腈－0.03％乙二胺（42∶58），乙腈－0.2％冰醋酸＜三乙胺調(diào)pH6.25＞（37∶63），甲醇－水－三乙胺（70∶30∶0.1），甲醇－水－三乙胺（70∶30∶0.04），甲醇－水－三乙胺（90∶10∶0.04），甲醇－水－三乙胺（80∶20∶0.08

7、），甲醇－水－三乙胺（75∶25∶0.1），甲醇－水－三乙胺（72∶28∶0.037），甲醇－水－三乙胺（74∶26∶0.035），甲醇－水－三乙胺（75∶25∶0.033）等流動相系統(tǒng)的出峰效果，以最后一種對新烏頭堿的檢測效果最佳，在此色譜條件下，新烏頭堿與雜峰分離良好、峰形亦佳，故選用此流動相。　　在樣品的提取方法上，我們對直接超聲提取及放置過夜后超聲提取兩種提取方法的提取效果進(jìn)行了對比研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)放置過夜后超聲提取對新烏頭堿的提取率最高，且通過加樣回收率實(shí)驗(yàn)說明放置過夜后超聲提取方法對新烏頭堿

8、的提取可靠，同時，發(fā)現(xiàn)超聲提取時間對新烏頭堿的含量有顯著影響。以超聲15min的提取率最高（再增加提取時間其含量無明顯升高，故選15min）。在定容溶劑的考察上，我們分別對二氯甲烷和鹽酸－甲醇溶液的效果進(jìn)行了對比研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用鹽酸－甲醇溶液定容時供試液的穩(wěn)定性較好。對于鹽酸－甲醇溶液的濃度，查