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《磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法檢測hbsag比較與應用》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg比較與應用唐勁松(東莞市大朗醫(yī)院檢驗科523770)【摘要】目的比較磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法(EUSA)檢測HBsAg靈敏度和陽性檢出率,選用較好的方法用于低濃HBsAg的測定。方法EUSA檢測HBsAg為強陽性的血清標木40份,混合為HBsAg強陽性混合血清,用化學發(fā)光法檢測HBsAg全陰性血清稀釋成46例濃度不同的HBsAg陽性血清,然后分別用磁珠濃縮法、酶聯(lián)免疫法和化學發(fā)光法檢測。結(jié)果磁珠濃縮法檢測46份標木陽性例數(shù)42例,最低檢出濃度0.1IU/mL,EUSA檢岀陽性標木33例,最低檢出濃度0.5IU/mL,磁珠濃縮法靈敏度和檢出率明顯高于EUSA(
2、P<0.01)。結(jié)論磁珠濃縮法可明顯提高EUSA檢測HBsAg的靈敏度和陽性檢出率,只有一定的研究意義?!娟P鍵詞】HBsAg靈敏度磁珠濃縮法【中圖分類號】R446【文獻標識碼】A【文章編號】2095-1752(2013)34-0208-02乙型肝炎病毒(HBV)感染簡稱乙肝,是一種嚴重危害人類健康的疾病,在我國感染率相當高。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝診斷及治療評估中非常重要的血清學標志物。研究表明,低濃度HBsAg人群在我國占有不小比例(占HBsAg陽性人群22.01%)[1]。如果漏檢,可能導致HBV通過手術、輸血、母嬰垂直等途徑傳播。有效檢測低濃度HBsAg,具有重要的臨
3、床和流行病學意義。木文釆用磁珠濃縮法和酶聯(lián)免疫法(EUSA)檢測不同濃度HBsAg陽性標木,比較兩種方法靈敏度和陽性檢出率,旨在為低濃度HBsAg血清提供敏感、實用的檢測方法。1材料與方法1.1材料1.1.1標木來源收集2012年期間在木醫(yī)院接受抗病毒治療的乙型肝炎患者,經(jīng)EUSA檢測HBsAg為強陽性的血清標木40份,混合為HBsAg強陽性混合血清,用經(jīng)化學發(fā)光法檢測乙型肝炎標志物全陰性血清稀釋成46例濃度不同的HBsAg陽性血清。1.1.2儀器和試劑羧基磁珠和磁分離架由上海奧潤微納新材料科技冇限公司和無錫中德捫爾生物技術有限公司提供,HBsAgEUSA試劑盒由廈門英科(新創(chuàng))生物右限公司
4、提供。酶標儀為法國Mutiskan-MK3,美國W克曼DXI-600全自動化學發(fā)光免疫分析儀和配套試劑。1.2方法分別用磁珠濃縮法[2]、酶聯(lián)免疫法和化學發(fā)光法檢測46例濃度不同的HBsAg陽性血清,酶標儀測定HBsAg的吸光度值,并計算S/CO值(吸光度值與臨界值的比值)。當S/CO值≥l吋,結(jié)果為陽性;S/CO值<l時,結(jié)果為陰性[3】。1.3統(tǒng)計學分析采用SPSSI3.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果磁珠濃縮法檢測46份標本陽性例數(shù)42例,最低檢出濃度O.:UU/mL,ELISA檢出陽性標本33例,最低檢出濃度0.5IU/mL靈敏度和檢
5、出率明顯高于與ELISA(P<0.01),見表1。表1三種方法測定HBsAg結(jié)果比較3討論我國是一個乙肝高發(fā)國家,HBV感染的診斷工作對乙肝的防治工作奮重大意義。目前一般認為HBsAg陽性是HBV感染的標志,乙肝兩對半作為HBV感染最常用的檢測,在我國各級醫(yī)院廣泛開展。0前我國檢測乙肝兩對半的方法主要奮金標法、酶免法、化學發(fā)光法和電化學發(fā)光法,艽中酶免法應用最廣泛。在高濃度HBsAg標本中,上述檢測方法區(qū)別不大,但是在低濃度HBsAg標本中,各種方法檢測結(jié)果可能不同。在乙型肝炎病毒感染的“窗U期”、急性期后或恢復期、自限性感染末期的攜帶者等情況下人體內(nèi)會出現(xiàn)低濃度的HBsAg。低濃度H
6、BsAg的患者體內(nèi)可能存在著肝臟的持續(xù)性損傷和病毒復制,一旦發(fā)生漏檢就會嚴重影響臨床診治和輸血安全,應該引起高度重視[4]。采用微粒子酶免疫技術(MEIA)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),低濃度HBsAg的檢出率得到顯著提高。MEIA法雖然具有重復性好,安全封閉,操作不易被污染的優(yōu)點,但由于需要大型儀器,成本較高,基層醫(yī)院很難普及,檢測費用也比較高,不為大多數(shù)患者承受,有一定的局限性。EUSA法操作簡便快速,試劑成本低,適用于大批量人群的篩査試驗,對高濃度HBsAg檢測可與某些先進技術相媲美,但是靈敏度比較低,對低濃度HBsA易漏診。如何比較奮效和經(jīng)濟的提高ELISA檢測HBsAg
7、的靈敏度是研宄的重點。磁珠(MagneticBeads)是一種由磁性材料和非磁性聚合物材料復合而成的新型功能微球。磁珠己廣泛應用于蛋白質(zhì)的分離提純、細胞分離、酶的固定以及免疫分析等多個領域。磁珠提取蛋白質(zhì)與磁珠表面基團有關,在特定的鹽離子和pH環(huán)境下,可以與蛋白質(zhì)進行結(jié)合與解離[5]。Satoh等[3】使用磁珠濃縮處理標本后,其HBsAg濃縮水平提高了4?7倍。本文采用市場上廣泛生產(chǎn)的羧基磁珠吸附血源性HBs