食品沙門氏菌檢測方法進展論文

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1、食品沙門氏菌檢測方法進展論文沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學上具有重要意義的人畜共患病之一,其病原沙門氏菌屬腸道細菌科,包括那些引起食物中毒,導致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細菌。它們除可感染人外,還可感染很多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。人畜感染后可呈無癥狀帶菌狀態(tài),也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾病,它可能加重病態(tài)或死亡率,或者降低動物的繁殖生產(chǎn)力。蛋、家禽和肉類產(chǎn)品是沙門氏菌病的主要傳播媒介.freelonelletest1)對進出口動物產(chǎn)品(魚粉、肉骨粉等)進行沙門氏菌檢測。該法采用預先包被了沙門氏菌(A-E群)單克隆抗體的微量板,加入經(jīng)增菌處理

2、的樣品,反應后再加入一定的指示劑,作用畢后用酶標儀測定OD值來判定結果。食物樣品經(jīng)適當?shù)脑鼍幚?,也可用此法進行沙門氏菌檢測。ELISA法檢出沙門氏菌的極限范圍在105~106個細胞/ml,因此,要得出可靠的結果,食物樣品首先必需進行預增菌、選擇性增菌,通常還要在含有D-甘露糖的肉湯(M肉湯)中進行后增菌,以促進鞭毛發(fā)育??偟膩碚f,標準的ELISA法樣品的制備,約需要經(jīng)過40~48h的孵育才能完成。黎兆滾等人的微量板ELISA法(Salmonellatest1)樣品制備過程分三步,共耗時24h:①選用營養(yǎng)肉湯進行預增菌(6h),使“致傷”、冷凍的沙門

3、氏菌復蘇。②使用選擇性培養(yǎng)基RV進行增菌(14h),使沙門氏菌大量繁殖,同時抑制其它雜菌生長。③使用營養(yǎng)肉湯(蛋白胨水)進行后增菌(4h),使沙門氏菌的數(shù)量大大增加。比上述標準的ELISA法樣品制備過程縮短了一半的時間。ELISA方法本身,則僅需要大約2h而已(其中30min是操作時間,90min是孵育時間)。相比之下,黎兆滾等人的方法可在27h內完成,比上述方法縮短了一半的時間,頗值得推廣應用。最新式的沙門氏菌免疫學檢測法,利用經(jīng)特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎。幾滴樣品加到卡片上,結果可以直接用肉眼讀出。免疫色譜卡片極易操作,且由于無需要特殊設

4、備,很適合小型實驗室使用。盡管卡片檢測法與ELISA法一樣需要對樣品進行增菌處理,但它(卡片法)本身通常需時不超過10min,如果采用黎兆滾等人的樣品制備法,則可使操作時間更為縮短。3以核酸為基礎的方法細胞核酸DNA和RNA是唯一一類可以攜帶信息的大分子。由于所有的細胞都含有這種分子,可以利用它作為檢測的標靶。標靶通常是一個特異性核酸序列,它可通過以補體核酸分子作為探針來檢出。與免疫學方法相似,探針也需要加附適當?shù)臉擞?,如放射性同位素、酶或發(fā)光的標識物。Fitts等人在食品沙門氏菌檢測中引入了第一代DAN—RNA雜交技術,此法應用的探針含有用放射性同

5、位素標記的傷寒沙門氏菌DNA片段,其敏感性高,經(jīng)大約48h的增菌步驟后,檢測極限可達108個細菌/ml,但由于要使用放射性同位素,只能在專門的實驗室應用,此方法的優(yōu)點都被抵消了。為此,以核酸雜交為基礎的第二代技術—比色計目前已發(fā)展起來。這種方法依賴于沙門氏菌核糖體RNA(rRNA)—核糖體發(fā)育過程中儲存的核酸成分的檢測。核糖體是細胞蛋白質合成器的一部分,每個細菌細胞中存在5000~20000個復制體,而相比之下染色體DNA復制體僅2~10個。這種天然富含rRNA標靶序列的情況使得用無輻射計檢測成為可能,同時又保持了與放射性同位素方法相當或更高的敏感性

6、。其另一優(yōu)點是由于rRNA為單鏈(而DNA為雙鏈),雜交前無需經(jīng)過變性步驟。要得到陽性結果,此法需要105個靶細胞/ml,因此對沙門氏菌檢測來說,需要進行預增菌和選擇性增菌,總共約50h。rRNA探針法比沙門氏菌ELISA法更耗時,但二者成本相近。食品細菌檢測法的最新進展是在化學擴增體系方面的發(fā)展,即聚合酶鏈反應(PCR),用該體系可對制備好的樣品進行細菌DNA擴增,以便更易于用諸如凝膠電泳法或比色型ELISA法檢測。用于檢測沙門氏菌和其它以食物為載體的病原的PCR方法業(yè)已建立,其中一些方法顯示了極好的敏感性。但該法較難自動化,且必需經(jīng)選擇性增菌以稀

7、釋可能干擾檢測反應的某些成分。一個完整的以PCR為基礎的方法,需要2天才能完成,很大程度上抵銷了其高敏感性的優(yōu)點,但這種方法對那些含沙門氏菌較少或沙門氏菌“致傷”嚴重難以復蘇而仍保有沙門氏菌rRNA的樣品尤其有效。盡管目前用來檢測沙門氏菌的方法各有優(yōu)缺點,但隨著科學發(fā)展,技術進步,人們探索、實踐的繼續(xù)深入,我們可以期待,將會有更多,敏感性更高,特異性更強,診斷時間更短的新方法出現(xiàn)。4兩種沙門氏菌快速檢測法4.1Transia沙門氏菌平板檢測法與耗時、昂貴的傳統(tǒng)方法相比,此法快1~2天,且每次檢測所需的操作時間縮短。該法建立在夾心ELISA法的基礎上,

8、利用多抗體混合物以保證檢出所有的沙門氏菌血清型。反應的固相載體是一種有可見或不可見條紋的微量反應板。其小孔內

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