紅車軸草總異黃酮粉劑中總異黃酮含量測定研究

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1、紅車軸草總異黃酮粉劑中總異黃酮含量測定研究朱賢森黃志勤楊慶春齊來【摘要】目的建立紅車軸草總異黃酮粉劑中總異黃酮含量的測定方法,從而對該品進行質量控制。方法采用紫外分光光度法直接測定粉劑中總異黃酮含量,測定波長為250nm。結果回歸方程為:Y=0.1312X+0.0095,相關系數(shù)r=0.9997,平均回收率為98.3%,RSD為2.06%,線性范圍為1.0040~5.0200mg/ml。結論紫外分光光度法測定該粉劑中總異黃酮含量結果準確、方便、快捷、重現(xiàn)性好?!娟P鍵詞】紫外分光光度法紅車軸草粉劑總異黃酮  Abstract:

2、ObjectiveToestablishthedeterminationmethodofcontentofisoflavonesinTrifoliumpratenseFenjibyUVspectromertryandcontrolthequality.MethodsThecontentofisoflavonesinedbymeasuringtheUVabsorbanceat250nm..ResultsThelinearrelationshipg/ml.ConclusionItisspecific,accurate,conve

3、nientandrapidformeasuringthecontentofisoflavones.  Keyertry;TrifoliumpratenseFenji;Isoflavones;DeterminationofConcentration  中藥紅車軸草TrifoliumpratenseL.為豆科車軸草屬多年生草本植物的干燥花序及帶花枝葉,又名紅三葉紅花苜蓿三葉草等[1],在我國大部分地區(qū)均有生產(chǎn),主要含有蛋白質、氨基酸、糖類、維生素和異黃酮等成分,其中異黃酮具有抗腫瘤(胃癌、乳腺癌)和治療骨質疏松、更年期綜合征[2

4、]、抑制前列腺癌和骨髓白血病細胞的生長、改善動脈血管的柔順性[3]等多種功能。隨著對研究的深入,目前國內(nèi)外科學家已從紅車軸草中發(fā)現(xiàn)了四十多種異黃酮類化合物,主要是大豆黃素、染料木素、刺芒柄花素和鷹嘴豆芽素A等及其相應的苷類。目前關于紅車軸草及其提取物中異黃酮報道較少,大多只測定了刺芒柄花素和鷹嘴豆芽素A。紅車軸草總異黃酮粉劑由中藥材紅車軸草經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提取、濃縮、干燥、粉碎而成。本文對該粉劑中總異黃酮的含量測定進行了相關研究?! ?儀器與試藥  紫外可見分光光度計:UV2450PC(日本島津公司);紅車軸藥材購自廣東清遠藥

5、材市場,紅車軸草總異黃酮粉劑由實驗室自制,芒柄花素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇(色譜純),水(重蒸水),其他試劑均為分析純?! ?方法與結果  2.1樣品的制備取紅車軸草藥材,粉碎成粗粉,加85%甲醇浸泡2h后回流提取兩次,2h/次。將提取液吸入減壓濃縮罐中,減壓回收至相對密度1.05~1.10(50℃)。濃縮液冷卻后靜置分層,傾出上層藥液,下層沉淀待處理;上層藥液加5倍量水,攪拌30min后離心處理。離心后所得沉淀與上述濃縮液下層沉淀合并,加6倍量溶劑于室溫下脫脂3次,每次攪拌30min后靜置1h,吸除上層溶劑

6、,下層脫脂沉淀物60℃真空干燥后用醋酸乙酯乙醇混合溶劑加熱回流提取2h,冷至室溫后濾過,濾液減壓濃縮至所加混合溶劑體積的1/12,冷至室溫后再靜置8h,濾過,沉淀物60℃真空干燥,粉碎,將樣品用甲醇配成適當濃度溶液即得。  2.2測定方法的選擇根據(jù)化學成分研究結果,紅車軸草含有黃酮類成分、蛋白質、糖類、脂溶性色素和少量的甾醇類等成分,本品經(jīng)純化后,主要含芒柄花素、鷹嘴豆芽素A等異黃酮類化合物及少量的脂溶性色素成分。這些異黃酮類化合物在紫外區(qū)具有很強的特征吸收,因此選擇紫外分光光度法測定本品總黃酮的含量。  2.3對照品的選

7、擇根據(jù)化學成分研究結果,芒柄花素(formonoin)是本品含量最高的成分,因此選擇芒柄花素作為本品含量測定的對照品。  2.4測定波長的選擇將樣品和芒柄花素對照品用甲醇配成適當濃度,在200~400nm范圍內(nèi)掃描,兩者最大吸收波長均在250nm,因此選擇250nm作為本品的測定波長。  2.5線性關系和回歸方程精密稱取芒柄花素對照品10mg,置10ml量瓶中,加適量的甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取該溶液0.5ml,置10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得每毫升含0.05mg的芒柄花素對照品溶液。準確吸取芒柄花素對照品溶液0

8、.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml,分別置于10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,以甲醇為空白對照,于250nm波長處測定吸收值。以吸收度為縱坐標,對照品濃度為橫坐標,繪制標準曲線。其線性關系和回歸方程為:Y=0.1312X+0.0095,相關系數(shù)r=0.9997,線性范圍為1.0040

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