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1、烏腺金絲桃中總黃酮超聲法提取工藝研究 摘要：本試驗以總黃酮的提取率為評價指標(biāo)，通過正交試驗法篩選烏腺金絲桃總黃酮超聲提取最佳工藝。結(jié)果表明：超聲提取總黃酮的影響因素順序為乙醇濃度>溫度>超聲功率>提取時間>料液比，最佳工藝條件是用樣品22倍量的體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇，采用超聲功率120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，在此條件下總黃酮提取率是8.15%?！ ￡P(guān)鍵詞：烏腺金絲桃;總黃酮;超聲提取;正交設(shè)計 基金項目：吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項目（2015008） 中圖分類號：S567文獻(xiàn)標(biāo)識碼：ADOI編號：10.14025/j.cnki.jlny.2016
2、.24.043 烏腺金絲桃是藤黃科草本植物，功效為鎮(zhèn)痛、止血、通乳，主要應(yīng)用于吐血、子宮出血、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛、跌打損傷、乳腺炎[1]。研究表明，其具有治療心臟病、抗腫瘤等作用，主要藥效物質(zhì)為黃酮類化合物[2，3]。黃酮類化合物因其具有抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、保肝、利尿、調(diào)節(jié)血管滲透性、延緩衰老、防護(hù)紫外線損傷等廣譜的藥理作用引人矚目[4]。鑒于烏腺金絲桃總黃酮提取工藝的研究少見報道[5]，且用超聲法從烏腺金絲桃中提取總黃酮的研究未見文獻(xiàn)報道，筆者在本試驗中采用正交試驗設(shè)計，對影響其提取率的多個因素進(jìn)行了考察，以期優(yōu)選出超聲法提取烏腺金絲總黃酮的最佳工藝?！ ?材料5 1
3、.1試劑與材料 本試驗材料為烏腺金絲桃葉，于2015年9月采自吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院左家校區(qū)烏腺金絲桃試驗田，鼓風(fēng)烘干（50℃）備用。金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品;無水乙醇、甲醇、亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉?！ ?.2儀器 電熱鼓風(fēng)干燥箱、電子分析天平、循環(huán)水式真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗器、紫外可見分光光度計?！ ?方法 2.1試驗流程 樣品稱重超聲提取抽濾濾液濃縮定容離心測定含量計算提取率?！ ?.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 精密稱取金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品3.8毫克，溶解于甲醇中，制成濃度為380微克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)品母液。 2.3空白溶液的配制 取甲醇0.5毫升，加入5%NaNO2溶液0.3毫升，搖勻，放置
4、6分鐘，加入10%Al（NO3）3溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，再加入4%NaOH溶液3毫升，搖勻，放置15分鐘，即為空白對照液[3]。 2.4測定波長的選擇 對2份樣品和金絲桃苷對照品經(jīng)顯色后，在350～700nm范圍內(nèi)掃描。金絲桃苷對照品的λmax=530nm處，樣品提取液的λmax=525～527nm，故選擇顯色后在527nm處測定吸光度。 2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制5 取母液稀釋得系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別取各濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5毫升，按2.3項操作，離心，在527nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，金絲桃苷濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程y=0.0006x+0.00765（
5、R2=0.99905），線性范圍是5.93～380微克/毫升?！ ?.6樣品溶液的制備和總黃酮提取率的計算 取藥材粗粉2.0克，精密稱取，用乙醇溶液超聲提取。提取液抽濾濃縮，用甲醇定容并依據(jù)試驗情況適當(dāng)稀釋，精密量取溶液0.5毫升，按按2.5項操作，測定吸光度（A），計算總黃酮的含量及總黃酮的提取率，提取率=樣品中總黃酮的量/藥材重量×100%。 2.7單因素考察 平行條件分別考察乙醇濃度、溫度、提取時間、料液比、超聲功率在不同水平下對烏腺金絲桃中總黃酮提取效果的影響?！ ?.8正交試驗 采用L9（34）正交試驗安排表進(jìn)行試驗，以考察多因素對提取過程的交互影響，從而篩選出超聲提取最
6、佳工藝。因素及水平設(shè)置見表1。 3結(jié)果與分析 表1超聲提取法的L9（34）正交因素水平表 表2單因素考察結(jié)果 3.1單因素考察結(jié)果 單因素考察結(jié)果見表2，結(jié)果表明，乙醇濃度、溫度、提取時間、超聲功率對總黃酮提取效果有影響，料液比對提取效果影響不大，確定提取時料液比為1∶22。依據(jù)結(jié)果確定正交試驗各因素的合理水平。5 3.2正交試驗結(jié)果 表3超聲法提取的正交試驗結(jié)果 極差分析結(jié)果的R值大小表明，四種因素對烏腺金絲桃中總黃酮提取影響程度A>B>D>C，即乙醇濃度>溫度>超聲功率>提取時間，說明因素A為影響烏腺金絲桃中總黃酮提取率的主要因素;四
7、種因素的K值表明各因素水平的影響程度是A1>A2>A3，B2>B3>B1，C3>C1>C2，D2>D3>D1，綜上所述，理論最佳的工藝條件是A1B2C3D2，即樣品用60%乙醇采用超聲功率為120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，見表3。 3.3驗證性試驗結(jié)果 按照上述確定的最佳條件，取5份樣品做了5次平行試驗，總黃酮平均提取率8.15%，算得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=2
