響應(yīng)面法對香椿葉總黃酮提取工藝的優(yōu)化

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1、響應(yīng)面法對香椿葉總黃酮提取工藝的優(yōu)化　　摘要：為了提高香椿（ToonaSinensis）葉總黃酮的純化效率，試驗以鄂東地區(qū)野生香椿為材料，采用響應(yīng)面法建立了H-107大孔樹脂對香椿葉中黃酮動態(tài)吸附和解吸的二次多項數(shù)學(xué)模型，并驗證了模型的有效性。結(jié)果表明，H-107大孔樹脂對香椿葉總黃酮動態(tài)吸附參數(shù)為上樣液濃度1.60mg/mL、上樣液流速0.5mL/min、上樣液pH5.0。H-107大孔樹脂的最優(yōu)動態(tài)吸附率驗證值為98.7%（理論值為99.1%）；H-107大孔樹脂對香椿葉中黃酮動態(tài)解吸率的工藝參數(shù)為解吸液體積分數(shù)64.88%、解吸液流速0.91mL/min、解吸液體

2、積99.11mL、H-107大孔樹脂的最優(yōu)動態(tài)解吸率驗證值為87.21%（理論值為88.45%）。上述結(jié)果表明，H-107大孔樹脂對香椿葉中總黃酮有較好的吸附解吸性能。　　關(guān)鍵詞：香椿（ToonaSinensis）；總黃酮；響應(yīng)面法；吸附；解吸　　中圖分類號：S644.4；R284.2文獻標識碼：A文章編號：0439-8114（2016）16-4253-05　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.16.046　　香椿（Toona9sinensis）又名香椿芽、香樁頭、椿天等，屬楝科，原產(chǎn)于中國，廣泛分布于長江南北平源地區(qū)和大別山

3、區(qū)[1，2]。香椿中黃酮類物質(zhì)含量較高，黃酮類化合物具有心血管系統(tǒng)活性、抗腫瘤、抗氧化自由基、抗炎等多種生物活性[3，4]。目前已有多種方法從香椿葉中提取并純化黃酮類化合物，這些方法包括堿浸酸沉法[5]、酶解法[6]、超臨界CO2流體萃取法[7]、薄層析法[8]等。大孔樹脂是一類有機高分子聚合物吸附劑，具有吸附量大、選擇性好、可重復(fù)使用等優(yōu)點，已廣泛用于生物活性物質(zhì)的分離純化[9]。目前采用響應(yīng)面法優(yōu)化大孔樹脂純化香椿葉中總黃酮的研究報道較少。本研究以H-107大孔樹脂為吸附載體，采用響應(yīng)面法優(yōu)化香椿葉總黃酮的提取純化工藝，為進一步開發(fā)利用香椿葉總黃酮資源提供理論基礎(chǔ)。

4、　　1材料與方法　　1.1材料　　香椿葉采自湖北省麻城市木子店鎮(zhèn)，于2014年6月上旬采集?！　√J丁（純度為99.9%）購自四川光泰制藥有限公司；H-107樹脂（非極性）購自鄭州亨通化工；NaCl、NaOH、NaNO2、Al（NO3）3、石油醚、環(huán)己烷、無水乙醇均為分析純?！　?.2方法　　1.2.1樹脂預(yù)處理將H-107樹脂完全浸入乙醇中，并不斷攪拌，以除去氣泡，靜置24h后將樹脂裝入1.5cm×50.0cm玻璃層析柱中，用2倍體積的乙醇以3.0mL/min的流速沖洗樹脂，至洗脫液無白色渾濁物，再用蒸餾水以同樣流速沖洗樹脂至無醇，完全洗脫后，先酸洗再堿洗，即先用2倍體

5、積1.0mol/L的鹽酸浸泡，同時沖洗樹脂，流速為6.0mL/min，再以同樣流速的蒸餾水沖洗至中性，然后以2倍體積的1.0mol/L的氫氧化鈉溶液沖洗樹脂，最后按同樣的流速用蒸餾水沖洗至中性備用?！　?.2.2香椿葉總黃酮的粗提稱取新鮮采集的香椿葉500g于55℃9恒溫箱中干燥至恒重，粉碎，過40目篩后用濾紙將香椿葉包好放入索氏抽提器中，在圓底燒瓶中加入300mL石油醚，70℃脫脂6h后，再將香椿葉烘干至恒重。稱取上述香椿葉5.0g研磨成粉末樣品，以70%乙醇水溶液，于200W功率下超聲處理30min后，于70℃抽提兩次，每次1.5h，料液比為1∶20（g∶mL，下同

6、），合并兩次提取液。采用乙醇沉淀法除去蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)[10]，減壓回收乙醇，將濃縮液轉(zhuǎn)入水相用環(huán)己烷除去葉綠素，得到總黃酮粗提取液?！　?.2.3H-107大孔樹脂動態(tài)吸附與解吸準確稱取經(jīng)預(yù)處理后的H-107樹脂10.0g，瀝干水分，濕法裝入1.5cm×50.0cm玻璃層析柱中。將10.0mL總黃酮粗提液緩慢倒入層析柱，進行動態(tài)吸附直至樣品全部流出為止。再用20.0mL超純水洗去可溶性多糖及雜質(zhì)，最后用一定體積分數(shù)的乙醇溶液進行洗脫[11]。按下述公式分別計算動態(tài)吸附率和解吸率：　　吸附率=（C0-CV）/C0×100%；　　解吸率=C3V2/[（C0-C1）V0-

7、C2V1]×100%　　式中，CV為吸附后溶液中總黃酮濃度；C0為吸附前溶液中總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；C1為吸附后溶液中總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；C2為除雜用水中總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；C3為解吸液中黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；V0為供試總黃酮提取液體積，mL；V1為除雜用水體積，mL；V2為解吸液體積，mL。　　1.2.4動態(tài)吸附和動態(tài)解吸條件9在前期單因素試驗基礎(chǔ)上，將上樣液速率、濃度、pH作為影響動態(tài)吸附率的3個主要因素，每個因素設(shè)3個水平，試驗因素與水平見表1；將洗脫液流速、體積、體積分數(shù)作為影響動態(tài)解吸率的3個主要因素，