植株生理生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定

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1、根系活力的測(cè)定（TTC法）植株根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長(zhǎng)情況和活力水平直接影響地上部分的生長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)狀況及產(chǎn)量水平。一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV的氧化還原色素，溶于水中成為無(wú)色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比較穩(wěn)定，不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗(yàn)的氫受體，植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，蘋(píng)果酸得到增強(qiáng)，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性并作為根系活力的指標(biāo)。二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料水培或砂培小麥、

2、玉米等植物根系。（二）儀器設(shè)備1.分光光度計(jì)；2.分析天平（感量0.1mg）；3.電子頂載天平（感量0.1g）；4.溫箱；5.研缽；6.三角瓶50ml；7.漏斗；8.量筒100ml；9.吸量管10ml；10.刻度試管10ml；11.試管架；12.容量瓶10ml；13.藥勺；14.石英砂適量；15.燒杯10ml、1000ml。（三）試劑1、乙酸乙酯（分析純）。2、次硫酸鈉（Na2S2O4），分析純，粉末。3、1％TTC溶液：準(zhǔn)確稱取TTC1.0g，溶于少量水中。定容到100ml。4、0.4％TTC溶液：準(zhǔn)確稱取TTC0.4g，溶于少量水中。定容到100ml

3、。5、磷酸緩沖液（1/15mol/L，pH7）：6、1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55ml，邊攪拌邊加入盛有500ml蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000ml。7、0.4mol/L琥珀酸：稱取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。三、實(shí)驗(yàn)步驟1、定性測(cè)定資料（1）配制反應(yīng)液：把1%TTC溶液、0.4mol/L的琥珀酸和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合。（2）把根仔細(xì)洗凈，把地上部分從莖基切除。將根放入三角瓶中，倒入反應(yīng)液，以浸沒(méi)根為度，置37℃左右暗處放1~3h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細(xì)側(cè)根都明顯地變成紅色，表明該處

4、有脫氫酶存在。2、定量測(cè)定（1）TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少許Na2S2O4粉搖勻后立即產(chǎn)生紅色的甲腙。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標(biāo)準(zhǔn)比色系列，以空白作參比，在485nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）稱取根尖樣品0.5g，放入10ml燒杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒(méi)

5、在溶液內(nèi)，在37℃下暗保溫1～3h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應(yīng)（與此同時(shí)做一空白實(shí)驗(yàn)，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上）。（3）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研缽內(nèi)磨碎，以提出甲月替。紅色提取液移入試管，并用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈於?、三次，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量?0ml，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)485nm下比色，以空白試驗(yàn)作參比測(cè)出吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出四氮唑還原量。四、結(jié)果計(jì)算單位質(zhì)量鮮根的四氮唑還原強(qiáng)度mg/g?h=CW×tC—從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出的四氮唑還原量（mg）；W—樣品質(zhì)量（g）；t—反應(yīng)

6、時(shí)間（h）。資料植物體內(nèi)硝酸還原酶活力的測(cè)定硝酸還原酶（nitratereductase,NR），是植物氮素同化的關(guān)鍵酶，它催化植物體內(nèi)的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽（NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O）。產(chǎn)生的亞硝酸鹽與對(duì)–氨基苯磺酸（或?qū)ΘC氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性條件下定量生成紅色偶氮化合物。生成的紅色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定。硝酸還原酶活性可由產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮的量表示。一般單位鮮重以μg氮/（g·h）為單位。NR的測(cè)定可分為活體法和離體法。活體法步驟簡(jiǎn)單，適合快速、多組測(cè)定；離體法復(fù)雜，

7、但重復(fù)性較好。Ⅰ離體法一、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實(shí)驗(yàn)材料水稻、小麥或其他植物葉片、幼穗等。（二）試劑1、亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取分析純NaNO20.9857g溶于無(wú)離子水后定容至1000mL，然后再吸取5mL定容至1000mL，即為含亞硝態(tài)氮的1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。2、0.1mol/LpH7.5的磷酸緩沖液：Na2HPO4·12H2O30.0905g與NaH2PO4·2H2O2.4965g加無(wú)離子水溶解后定容至1000mL。3、1％磺胺溶液：1.0g磺胺溶于100mL濃度為3mol/L的HCl中（25mL濃鹽酸加水定容至100mL即為3mol/

8、LHCl）。4、0.02％萘基乙烯胺溶液：0.0200g萘基乙烯胺溶于100mL