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《植株生理生長指標測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在教育資源-天天文庫。
1、根系活力的測定（TTC法）植株根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長情況和活力水平直接影響地上部分的生長、營養(yǎng)狀況及產量水平。一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是標準氧化電位為80mV的氧化還原色素，溶于水中成為無色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比較穩(wěn)定，不會被空氣中的氧自動氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗的氫受體，植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，蘋果酸得到增強，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性并作為根系活力的指標。二、材料、設備儀器及試劑（一）材料水培或砂培小麥、
2、玉米等植物根系。（二）儀器設備1.分光光度計；2.分析天平（感量0.1mg）；3.電子頂載天平（感量0.1g）；4.溫箱；5.研缽；6.三角瓶50ml；7.漏斗；8.量筒100ml；9.吸量管10ml；10.刻度試管10ml；11.試管架；12.容量瓶10ml；13.藥勺；14.石英砂適量；15.燒杯10ml、1000ml。（三）試劑1、乙酸乙酯（分析純）。2、次硫酸鈉（Na2S2O4），分析純，粉末。3、1％TTC溶液：準確稱取TTC1.0g，溶于少量水中。定容到100ml。4、0.4％TTC溶液：準確稱取TTC0.4g，溶于少量水中。定容到100ml
3、。5、磷酸緩沖液（1/15mol/L，pH7）：6、1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55ml，邊攪拌邊加入盛有500ml蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000ml。7、0.4mol/L琥珀酸：稱取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。三、實驗步驟1、定性測定資料（1）配制反應液：把1%TTC溶液、0.4mol/L的琥珀酸和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合。（2）把根仔細洗凈，把地上部分從莖基切除。將根放入三角瓶中，倒入反應液，以浸沒根為度，置37℃左右暗處放1~3h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細側根都明顯地變成紅色，表明該處
4、有脫氫酶存在。2、定量測定（1）TTC標準曲線的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少許Na2S2O4粉搖勻后立即產生紅色的甲腙。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標準比色系列，以空白作參比，在485nm波長下測定吸光度，繪制標準曲線。（2）稱取根尖樣品0.5g，放入10ml燒杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒
5、在溶液內，在37℃下暗保溫1～3h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應（與此同時做一空白實驗，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上）。（3）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研缽內磨碎，以提出甲月替。紅色提取液移入試管，并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌二、三次，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量為10ml，用分光光度計在波長485nm下比色，以空白試驗作參比測出吸光度，查標準曲線，即可求出四氮唑還原量。四、結果計算單位質量鮮根的四氮唑還原強度mg/g?h=CW×tC—從標準曲線查出的四氮唑還原量（mg）；W—樣品質量（g）；t—反應
6、時間（h）。資料植物體內硝酸還原酶活力的測定硝酸還原酶（nitratereductase,NR），是植物氮素同化的關鍵酶，它催化植物體內的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽（NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O）。產生的亞硝酸鹽與對–氨基苯磺酸（或對–氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性條件下定量生成紅色偶氮化合物。生成的紅色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法測定。硝酸還原酶活性可由產生的亞硝態(tài)氮的量表示。一般單位鮮重以μg氮/（g·h）為單位。NR的測定可分為活體法和離體法。活體法步驟簡單，適合快速、多組測定；離體法復雜，
7、但重復性較好。Ⅰ離體法一、實驗材料、試劑與儀器設備（一）實驗材料水稻、小麥或其他植物葉片、幼穗等。（二）試劑1、亞硝酸鈉標準溶液：準確稱取分析純NaNO20.9857g溶于無離子水后定容至1000mL，然后再吸取5mL定容至1000mL，即為含亞硝態(tài)氮的1μg/mL的標準液。2、0.1mol/LpH7.5的磷酸緩沖液：Na2HPO4·12H2O30.0905g與NaH2PO4·2H2O2.4965g加無離子水溶解后定容至1000mL。3、1％磺胺溶液：1.0g磺胺溶于100mL濃度為3mol/L的HCl中（25mL濃鹽酸加水定容至100mL即為3mol/
8、LHCl）。4、0.02％萘基乙烯胺溶液：0.0200g萘基乙烯胺溶于100mL
